吳晶，周萍，楊懷鏡

（1.大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理671000；2.大理州食品藥品檢驗所，云南大理671000）

紅花（Carthamus tinctorius L.）為菊科植物的干燥管狀花[1]，又名次紅花、紅花草、紅花菜、紅藍花等，性溫，味苦，具有通經(jīng)、活血和止疼等功效[2-4]，為民間常用的活血化瘀藥?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，紅花具有抗炎、抗腫瘤、保護心血管、免疫力調(diào)節(jié)等作用[5-11]。紅花揮發(fā)性成分復(fù)雜，紅花揮發(fā)油具有抑菌，抗炎止疼，抗凝血等藥理功效[12-14]，紅花揮發(fā)油可以促進組織愈合，可以用于治療凍瘡[15]，但起主要藥效作用的物質(zhì)尚不完全明確，這些揮發(fā)性紅花是臨床常用的中藥材之一，目前鮮見紅花揮發(fā)性成分的氣相指紋圖譜研究宋青坡等[16]采用氣相圖譜（gas chromatography，GC）法建立不同產(chǎn)地野菊花揮發(fā)油成分氣相指紋圖譜，建立的指紋圖譜具有專屬性，穩(wěn)定性好，方法可靠。本文通過研究滇產(chǎn)紅花藥材的氣相指紋圖譜，建立25 批云南紅花的氣相圖譜。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

紅花樣品采集于大理和麗江2 個城市的不同地方，共25 批，均經(jīng)大理白族自治州食品藥品檢驗所楊懷鏡主任藥師鑒定為菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.的干燥花，憑證標本放于大理白族自治州食品藥品檢驗所標本室，樣品自然陰干后粉碎，放入干燥容器中于室溫（25 ℃）下避光保存，樣品信息見表1。

表1 紅花樣品信息Table 1 Safflower sample information

1.2 試驗儀器與試劑

Agilengt7890 氣相色譜儀：安捷倫科技有限公司；AX200 型分析天平：島津企業(yè)管理有限公司；石油醚（30 ℃～60 ℃）、石油醚（60 ℃～90 ℃）（分析純）：廣東光華科技股份有限公司；正己烷分析純：天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；二氯甲烷（色譜純）：成都市科龍化工試劑廠。

1.3 試驗方法

1.3.1 供試品溶液的制備

取過5 號篩的紅花粉末樣品約1.0 g，精密稱取，置于具塞錐形瓶中，精密加入10 mL 石油醚（30 ℃～60 ℃），稱定其重量，時時振搖，并靜置過夜，然后稱定重量，用石油醚補足其損失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用0.45 μm 微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

1.3.2 氣相色譜條件

色譜柱：石英毛細管色譜柱DB-1（0.25 μm×0.320 mm×30 m）；FID 檢測器；載氣：高純氮氣；進樣口溫度：250 ℃；檢測器溫度：250 ℃；升溫程序：初始溫度100 ℃，維持 2 min，以 10 ℃/min 的速率升至 160 ℃，維持 5 min，以 5 ℃/min 的速率升至 230 ℃，維持 10 min，再以3 ℃/min 的速率升至250 ℃，維持5 min，最后以2 ℃/min 的速率升至 300 ℃，維持 3 min；進樣量 2 μL；后運行10 min。

1.4 方法學(xué)考察

1.4.1 精密度試驗

精密稱取S2 樣品1 份，按“1.3.1”項下的方法制備供試品溶液，按“1.3.2”氣相色譜條件連續(xù)進樣6 次，記錄圖譜。

1.4.2 穩(wěn)定性試驗

隨著人們環(huán)保意識的提高，環(huán)保問題將會越來越被社會各界所重視，國家也會出臺更加詳細的環(huán)保政策來解決環(huán)境污染的問題，在這個過程中也會淘汰一些落后的生產(chǎn)方式，機械自動化也會向綠色，健康的方向發(fā)展，例如在生產(chǎn)過程中會采用一些可降解的原料，生產(chǎn)的過程也會盡可能減少有害物質(zhì)的產(chǎn)生，生產(chǎn)廢物也會通過各種技術(shù)手段轉(zhuǎn)化成可以二次利用的材料。這樣不僅會解決工業(yè)生產(chǎn)對環(huán)境的污染問題，也會降低生產(chǎn)過程中因環(huán)境問題而帶來的不必要的成本。

精密稱取同一批S2 紅花樣品1 份，按“1.3.1”項下的方法制備供試品溶液，在 0、2、8、16 h 按“1.3.2”氣相色譜條件進樣，并記錄下GC 色譜圖。

1.4.3 重復(fù)性試驗

取同一批（S2）樣品 6 份，按“1.3.1”項下的方法制備供試品溶液，按“1.3.2”氣相色譜條件進樣測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 精密度試驗

以S 峰的保留時間和峰面積為參照，計算共有峰的相對保留時間和相對峰面積，精密度考察結(jié)果見表2 和表3。

表2 以S 峰的保留時間為參照的精密度試驗結(jié)果Table 2 Precision test results based on retention time of S peak

表3 以S 峰的峰面積為參照的精密度試驗結(jié)果Table 3 Precision test results based on the peak area of S peak

結(jié)果表明匹配到的11 個共有峰的相對保留時間和峰面積穩(wěn)定，以S 峰保留時間為參照的RSD＜2.0%，以S 峰峰面積為參照的RSD＜3.0%，表明儀器精密度良好。

2.2 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

以S 峰的保留時間和峰面積為參照，計算其他各共有峰的相對保留時間和相對峰面積，穩(wěn)定性試驗結(jié)果見表4 和表5。

以S 峰的保留時間和峰面積為參照，計算其他各共有峰的相對保留時間和相對峰面積，RSD 均小于5%，結(jié)果顯示紅花供試品溶液在16 h 內(nèi)穩(wěn)定。

表4 以S 峰的保留時間為參照的穩(wěn)定性試驗結(jié)果Table 4 Stability test results based on retention time of S peak

表5 以S 峰的峰面積為參照的穩(wěn)定性試驗結(jié)果Table 5 Stability test results based on the peak area of S peak

2.3 重復(fù)性試驗考察

表6 以S 峰的保留時間為參照的重復(fù)性試驗結(jié)果Table 6 Repetitiveness test results based on the retention time of S peak

表7 以S 峰的峰面積為參照的重復(fù)性試驗結(jié)果Table 7 Repetitiveness test results based on the peak area of S peak

由表可知，結(jié)果11 個共有峰的相對保留時間和峰面積穩(wěn)定，RSD 均小于3.0%。結(jié)果表明建立的該方法重復(fù)性良好。

2.4 GC 指紋圖譜的建立

按“1.3.1”項下的方法制備供試品溶液，按“1.3.2”氣相色譜條件進樣，得到25 批紅花藥材的GC 指紋圖譜，并記錄相應(yīng)圖譜，采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A 版”電腦軟件處理試驗數(shù)據(jù)，建立滇產(chǎn)紅花的GC 指紋圖譜，對25 批紅花藥材的指紋圖譜進行檢測，圖譜見圖1 和圖2。

圖1 生成的對照圖譜Fig.1 Comparison map generated

圖2 25 批紅花樣品GC 圖譜Fig.2 GC map of the 25 batches of carthamus tinctorius

由圖1 和圖2 可知，紅花樣品在80 min 內(nèi)全部分離，匹配得到11 個共有峰，S2 樣品色譜峰信息量較多，分離度良好，因此設(shè)置S2 為參照圖譜，自動匹配生成共有峰，生成對照圖譜R 并計算相似度。

以25 批紅花藥材的色譜圖和共有峰為基礎(chǔ)，用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)導(dǎo)入圖譜，25 批紅花藥材的GC 指紋圖譜相對保留時間和峰面積都符合建立指紋圖譜的標準，S 峰在整個色譜峰中強度適中，分離度較好，因此選為參照峰，并計算25 批不同產(chǎn)地紅花藥材圖譜與生成的對照圖譜之間的相似度。結(jié)果見表8、表9 和表10。

表8 25 批紅花藥材共有峰相對保留時間結(jié)果Table 8 Results of the relative retention time of the total common peaks of the 25 batches of safflower medicinal materials

續(xù)表8 25 批紅花藥材共有峰相對保留時間結(jié)果Continue table 8 Results of the relative retention time of the total common peaks of the 25 batches of safflower medicinal materials

表9 25 批紅花藥材共有峰相對峰面積結(jié)果Table 9 Results of relative peak area of common peaks in 25 batches of safflower

由表8 和9 可知，25 批紅花藥材以S 峰的保留時間作為參照結(jié)果RSD 均在3.0%以下，表明多個產(chǎn)地的指紋圖譜相似，以S 峰峰面積為參照結(jié)果RSD 則波動較大，說明不同區(qū)域的樣品之間存在一定的差異。

表10 25 批紅花藥材指紋圖譜相似度Table 10 Similarity of fingerprints of 25 batches of safflower

由表10 可知，25 批紅花藥材與對照圖譜的相似度在0.984～0.995，樣品之間的相似度在0.962～0.980，結(jié)果表明各個不同產(chǎn)地紅花藥材的質(zhì)量相對穩(wěn)定。

3 討論

建立紅花藥材GC 指紋圖譜的方法，方法學(xué)考察結(jié)果證明建立的該方法操作簡單，選擇性高，靈敏度高，適合紅花藥材揮發(fā)性成分的分析，能夠準確的描述其揮發(fā)性成分的總體特征。25 批云南不同產(chǎn)地紅花在不同色譜峰的比例有差距，表明不同批次紅花樣品質(zhì)量存在一定的差異。建立的紅花氣相指紋圖譜信息量大，穩(wěn)定，能夠客觀反映紅花藥材的質(zhì)量，可用于紅花藥材的鑒別與品質(zhì)評價。