劉美劍 趙子明 劉 明 陳蘇南 鄭翔隆 林阿朋① 宮慶禮①

澳洲鱈鱸()全人工繁殖技術(shù)研究*

劉美劍1趙子明1劉 明2陳蘇南1鄭翔隆1林阿朋1①宮慶禮2①

(1. 江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院 泰州 225300; 2. 中國(guó)海洋大學(xué) 青島 266003)

澳洲鱈鱸()為澳大利亞國(guó)宴用魚(yú), 已引入國(guó)內(nèi)開(kāi)始工廠化養(yǎng)殖, 但人工繁殖還有若干問(wèn)題未解決。為實(shí)現(xiàn)其全人工繁殖, 本研究就澳洲鱈鱸精卵同步、精子存活時(shí)間延長(zhǎng)、選取室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖培育的個(gè)體作為親本進(jìn)行繁殖等人工繁殖過(guò)程中關(guān)鍵步驟進(jìn)行了研究。結(jié)果表明精子樣本常溫保存6h后精子動(dòng)性降低, 存活時(shí)間顯著縮短, 96h后未發(fā)現(xiàn)游動(dòng)精子。添加2.5%葡萄糖或1.25%葡萄糖+2.25‰氯化鈉激活精子動(dòng)性升高, 存活時(shí)間得以延長(zhǎng), 提示葡萄糖可能能夠充當(dāng)外源性能量來(lái)源, 顯著增強(qiáng)精子活力、提高繁殖效率。實(shí)驗(yàn)選取6—8齡室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖澳洲鱈鱸作為繁殖親本, 運(yùn)用該方法最終獲得50萬(wàn)尾魚(yú)苗, 證明了用室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖的個(gè)體作為親本進(jìn)行人工繁殖是可以滿足工廠化養(yǎng)殖苗種需求的。

澳洲鱈鱸; 人工繁殖; 親本; 精子動(dòng)性; 存活時(shí)間; 葡萄糖

澳洲鱈鱸()又稱墨瑞鱈或澳洲蟲(chóng)紋斑, 屬暖水性魚(yú)類(Lake, 1971), 主要分布于澳大利亞墨瑞-達(dá)令河流域, 是澳大利亞土著魚(yú)類, 素有澳大利亞國(guó)寶魚(yú)之稱。澳洲鱈鱸體型較大, 野生捕獲最大個(gè)體體重可達(dá)113.6kg (Noble, 1955), 壽命可達(dá)48年(Lintermans, 2007; Koehn, 2012)。由于棲息環(huán)境惡化、遷徙受阻、水質(zhì)惡化、非法捕撈等諸多因素(Koehn, 2004; Rowland, 2004; Koehn, 2012), 澳洲鱈鱸原產(chǎn)地野生資源量急劇減少, 現(xiàn)已被列為漸危種(Brazil, 1999; Ye, 2007)。澳大利亞政府采取了一系列措施, 如全國(guó)范圍內(nèi)禁止商業(yè)捕撈、開(kāi)展增殖放流活動(dòng)等(Lintermans, 2004)。澳洲鱈鱸人工繁殖研究始于1903年(Dannevig, 1903), Rowland于1985年初步實(shí)現(xiàn)了采用野生親本以土池自產(chǎn)方式進(jìn)行人工繁殖(Rowland, 1985)。

澳洲鱈鱸繁殖具有明顯的周年周期特征, 雌魚(yú)約6齡性成熟、雄魚(yú)3—4齡性成熟(Gooley, 1995)。每年春季至初夏穆瑞河水溫達(dá)到20°C時(shí)開(kāi)始產(chǎn)卵(Rowland, 1998), 產(chǎn)卵前澳洲鱈鱸能夠逆流而上120km (Koehn, 2009), 產(chǎn)卵時(shí)一般成對(duì)出現(xiàn), 卵具黏性, 需附著于硬基質(zhì)上。人工育苗土池中水溫同樣需達(dá)到20°C澳洲鱈鱸才能產(chǎn)卵, 需在水中放置管道或者空心原木等供卵子附著(Lake, 1967; Rowland, 1988; Lintermans, 2007)。據(jù)報(bào)道, 澳大利亞相關(guān)專家40年來(lái)通過(guò)此種方式獲得的種苗量不超過(guò)1300萬(wàn)尾(Forbes, 2015)。因此, 這種人工繁殖方式, 親本來(lái)源受限, 且效率低下。

澳洲鱈鱸已經(jīng)成為澳大利亞國(guó)宴用魚(yú)(廖靜, 2019), 其含肉率高、無(wú)脊間刺、味道鮮美, 富含四種呈味氨基酸、EPA和DHA等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(Gunasekera, 1999; 宋理平等, 2013)。此外, 澳洲鱈鱸形似鱖魚(yú), 口感和鮮度比鱖魚(yú)更好, 其大型個(gè)體可替代三文魚(yú)供應(yīng)魚(yú)片, 契合我國(guó)人民對(duì)魚(yú)類消費(fèi)升級(jí)的需求(Abery, 2005)。在2001年引入國(guó)內(nèi)進(jìn)行人工養(yǎng)殖后, 受到市場(chǎng)青睞, 但養(yǎng)殖產(chǎn)量較低, 年產(chǎn)只有約20t, 其原因主要是人工繁殖效率低下。劉怡(2014)曾報(bào)道在廣東利用全人工繁育技術(shù)獲得6萬(wàn)多尾4—10cm種苗, 但這對(duì)于人工養(yǎng)殖來(lái)說(shuō)還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。繁殖效率低、獲得種苗數(shù)量少, 一方面是由于澳洲鱈鱸本身繁殖力不高(Rowland, 1985), 更重要的是人工繁殖過(guò)程中諸多問(wèn)題如精卵同步、精子入卵時(shí)間的確定、授精時(shí)最佳精卵比例、受精成功與否的判別等, 還有待深入研究。

通過(guò)常規(guī)按壓取精方法采集澳洲鱈鱸精液后, 多數(shù)精子即被激活, 且活性降低較快, 導(dǎo)致人工授精精卵難以同步, 極大地影響后期孵化率(Billard, 1992; Daly, 2008); 精子質(zhì)量直接影響能否成功入卵完成受精(Legendre, 1980; Stoss, 1981); 卵子受精成功與否還缺乏明確、具體的衡量指標(biāo)。這一系列的問(wèn)題都需要進(jìn)一步研究、探索。本研究主要針對(duì)澳洲鱈鱸全人工繁殖過(guò)程中精卵同步、精子活力延長(zhǎng)等關(guān)鍵環(huán)節(jié)進(jìn)行了研究, 通過(guò)94對(duì)、188尾室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖親魚(yú), 經(jīng)過(guò)2個(gè)月的培育, 獲得52.3萬(wàn)尾魚(yú)苗, 證明了用室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖的個(gè)體作為親本進(jìn)行人工繁殖是可以滿足工廠化養(yǎng)殖苗種需求的。

1 材料與方法

1.1 親本與精液收集、精液動(dòng)性分析

澳洲鱈鱸親本取自青島七好飼料科技有限公司室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖基地。在3月下旬至4月初的繁殖季節(jié), 選取體表無(wú)外傷、發(fā)育良好的6—8齡澳洲鱈鱸親本, 其中雌、雄魚(yú)各94尾(體重5.2—11.3kg, 體長(zhǎng)42—75cm)。用丁香酚麻醉后, HCG催產(chǎn), 雄魚(yú)1000IU/kg, 雌魚(yú)劑量減半(Rowland, 1988), 48h后, 將魚(yú)腹部朝上倒放在產(chǎn)卵架上, 擦干魚(yú)體表面, 將近生殖孔處水排除, 通過(guò)按壓取精、卵。收集精液樣本時(shí), 為避免采集過(guò)程中尿液污染可能對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)帶來(lái)的潛在影響(Billard, 1992), 取精時(shí)直接用預(yù)裝有4mL人工精漿(ASP)的5mL不帶針頭注射器吸取1mL精液。將所取樣品混勻后取0.1mL混合液用2mL蒸餾水激活(Rowland, 1988), 用CASA精子分析軟件檢測(cè)精子動(dòng)性, 低于90%的樣本丟棄, 收集三個(gè)以上動(dòng)性超過(guò)90%的樣品并將其混勻, 常溫[(19.5±0.5)°C]放置備用。動(dòng)性分析時(shí)取ASP-精液混合液0.1mL, 用2mL蒸餾水或?qū)嶒?yàn)設(shè)置所需激活液稀釋激活, 讀數(shù)、記錄。操作時(shí)間15—20s、每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

1.2 溶液配置

據(jù)Ohta等(1998)配置ASP溶液1L (NaCl 55mmol/L, KCl 82.4mmol/L, CaCl22.0mmol/L, MgCl20.8mmol/L, NaHCO320mmol/L, TAPS 20mmol/L), 調(diào)節(jié)pH至8.0。為避免細(xì)菌影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果, ASP溶液中額外加入青霉素1000IU/L、硫酸鏈霉素0.1g/L (Oplinger, 2015), 溶液放置4°C冰箱備用, 使用前先將溶液平衡至常溫。所用試劑均為分析純, 購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.3 方法

評(píng)估常溫下保存時(shí)間對(duì)精子初始動(dòng)性的影響: 0h、6h、12h、24h、48h、96h六個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)取樣用蒸餾水激活, 記錄精子初始(激活后20s時(shí))動(dòng)性。

分析其動(dòng)性及存活時(shí)間變化規(guī)律, 設(shè)置了: 0h、6h、12h、24h四個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)取樣, 分別每隔20s記錄其動(dòng)性變化。

評(píng)估添加葡萄糖作為激活劑對(duì)精子動(dòng)性的影響, 設(shè)置了蒸餾水、1.25%、2.50%、5.00%葡萄糖溶液(分別記為DW、G1、G2、G3)作為激活劑, 記錄20s動(dòng)性, 然后每隔1min記錄一次; 不同濃度葡萄糖-氯化鈉混合液作為激活劑激活精子, 葡萄糖注射液與生理鹽水等體積混合, 再進(jìn)行梯度稀釋, 分別設(shè)置了蒸餾水、0.625%葡萄糖+1.125‰氯化鈉、1.25%葡萄糖+2.25‰氯化鈉、2.50%葡萄糖+4.50‰氯化鈉四種激活劑(分別記為DW、G1-SC、G2-SC、G3-SC), 激活20s記錄動(dòng)性, 然后每隔1min記錄一次。

1.4 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示(=3), 數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行樣本檢驗(yàn)分析, 并進(jìn)行one-way ANOVA分析, 多重比較處理組與對(duì)照組之間的差異性, 采用Origin Pro 2018作圖, 取<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 保存時(shí)間對(duì)精子初始激活動(dòng)性的影響

如圖1所示, 保存不同時(shí)間激活后精子初始激活動(dòng)性均超過(guò)90%, 未見(jiàn)顯著差異。激活保存0h、6h、12h、24h、48h精子, 初始動(dòng)性分別為94.00%±1.27%、96.15%±1.50%、92.00%±1.27%、93.00%±2.58%、92.00%, 保存96h后未見(jiàn)游動(dòng)精子。

圖1 精子在ASP中保存不同時(shí)間后精子動(dòng)性

2.2 保存時(shí)間對(duì)精子激活后不同時(shí)間點(diǎn)動(dòng)性的影響

由圖2可知, 精子在ASP中保存6h即對(duì)精子活力有顯著影響(<0.05), 保存6h、12h、24h后動(dòng)性及存活時(shí)間均顯著低于0h組(<0.05), 激活后1min動(dòng)性降低20%以上, 6h、12h、24h三組間差異不顯著。保存6h、12h、24h后40s、60s、80s、100s精子動(dòng)性均顯著低于保存0h組(<0.05); 保存6h、12h、24h組激活后精子存活時(shí)間均小于100s, 顯著低于0h組(120s,<0.05)。

圖2 保存不同時(shí)間對(duì)精子動(dòng)性及存活時(shí)間的影響

2.3 添加葡萄糖(Glc)對(duì)精子活力的影響

如圖3所示, 加入高濃度葡萄糖(G3組)后精子初始動(dòng)性受到抑制, 可顯著延長(zhǎng)精子存活時(shí)間。G3激活精子20s時(shí)動(dòng)性為48.89%±14.80%, 顯著低于DW、G1、G2組(分別為87.61%±8.51%、93.60%±5.86%、92.10%±2.41%,<0.05), DW、G1、G2三組精子動(dòng)性在20s未見(jiàn)顯著差異; 激活后1min精子動(dòng)性從高到低分別為G2(75.73%±11.92%)、G1(62.14%±16.80%)、G3(54.98%±12.16%)與DW組(54.28%±16.61%), 四組未見(jiàn)顯著差異。

G3激活后精子存活時(shí)間達(dá)8min顯著高于其余三組, G2組次之(超過(guò)2min, 未達(dá)3min), 最低為G1與DW組(超過(guò)1min, 未達(dá)2min)?？梢?jiàn), 較高濃度葡萄糖能延長(zhǎng)精子存活時(shí)間。

圖3 不同濃度葡萄糖(Glc)作為激活劑對(duì)精子動(dòng)性及存活時(shí)間的影響

2.4 添加葡萄糖(Glc)和氯化鈉(NaCl)對(duì)精子活力的影響

如圖4所示, G2-SC激活精子初始動(dòng)性為92.55%±2.61%, 與G1-SC (88.09%±4.60%)和DW組(87.61%±8.51%)相比未見(jiàn)顯著差異; G2-SC激活后1min精子動(dòng)性為87.96%±4.52%, 顯著高于G1-SC組(69.06%±13.42%)和DW組(54.28%±16.60%) (<0.05), 在1min時(shí)較DW組提升62%; G2-SC激活后2min精子動(dòng)性降至50.39%±5.82%, 其余三組未見(jiàn)游動(dòng)精子。G2-SC激活后精子存活時(shí)間達(dá)8min, 顯著高于G1-SC組和DW組(<2min)。

由此可見(jiàn), 2.50%葡萄糖+4.50‰氯化鈉不能激活精子, 而1.25%葡萄糖+2.25‰氯化鈉能顯著增強(qiáng)精子活力、延長(zhǎng)存活時(shí)間。

2.5 澳洲鱈鱸卵子成熟度、胚胎發(fā)育

選取的6—8齡雌性親本, 注射催產(chǎn)針, 效應(yīng)時(shí)間后泄殖孔處有卵自然流出, 即視為合格親本, 解剖獲取成熟卵子如圖5a所示。按壓取卵進(jìn)行人工授精后受精卵如圖5b, 剔除白色、不透明的死卵(Rowland, 1988), 結(jié)果表明, 成功受精卵數(shù)量超過(guò)80%, 能夠滿足人工繁殖要求。卵子受精后3—4d后即出現(xiàn)眼點(diǎn)(圖5c), 8—9d后發(fā)育成卵黃囊尚未被吸收初孵仔魚(yú)(圖5d)。

圖4 不同濃度氯化鈉(NaCl)和葡萄糖(Glc)混合物作為激活劑對(duì)精子動(dòng)性及存活時(shí)間的影響

圖5 澳洲鱈鱸卵子及受精卵發(fā)育過(guò)程

注：a. 催產(chǎn)48h后卵子成熟情況, b. 受精卵(箭頭所指為死卵), c. 眼點(diǎn)出現(xiàn)(3—4d, 箭頭所指為眼點(diǎn)), d. 初孵仔魚(yú)(8—9d)

3 討論

3.1 親本的選擇

澳洲鱈鱸非常適合高密度尤其是封閉系統(tǒng)養(yǎng)殖(Abery, 2005), 引入國(guó)內(nèi)后主要進(jìn)行室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖。已有研究表明澳洲鱈鱸在水溫低于16°C時(shí), 攝食減緩, 生長(zhǎng)幾乎停止, 水溫高于30°C時(shí)開(kāi)始死亡(Boreham, 2004; Ingram, 2004), 因此, 澳洲鱈鱸在我國(guó)無(wú)法過(guò)冬和度夏完成生活史, 完全不必?fù)?dān)心造成生態(tài)入侵的可能性。一般2—3齡養(yǎng)至0.75—1.00kg即可達(dá)商品規(guī)格, 養(yǎng)殖產(chǎn)量低的主要原因是苗種受限。

圖6 澳洲鱈鱸雌性親本

對(duì)于澳洲鱈鱸人工繁殖已經(jīng)有了一些研究, 但僅限于生殖力的評(píng)估(Rowland, 1985)以及人工促熟、催產(chǎn)技術(shù)(Rowland, 1983, 1988)。因當(dāng)?shù)貏?dòng)物保護(hù)政策、海關(guān)、運(yùn)輸成本較高等諸多原因, 從澳大利亞引進(jìn)達(dá)到性成熟的野生親本用于人工繁殖還不現(xiàn)實(shí), 只能通過(guò)養(yǎng)殖企業(yè)自身培育獲得。苗種數(shù)量少、性成熟年齡時(shí)間長(zhǎng)、養(yǎng)殖周期長(zhǎng)等諸多因素導(dǎo)致養(yǎng)殖企業(yè)成熟親本量極少。因此, 目前國(guó)內(nèi)工廠化養(yǎng)殖企業(yè)多數(shù)通過(guò)從澳大利亞進(jìn)口受精卵或魚(yú)苗, 成本極高。

Rowland等(1985)認(rèn)為, 自然水體中5齡以上就能達(dá)到性成熟; Gooly等認(rèn)為野外條件下雄性親本3—4齡、雌性親本6齡即可達(dá)性成熟(Gooley, 1995)。但繁殖期前三個(gè)月捕撈已達(dá)性成熟的多數(shù)雌性個(gè)體(體重3.1—34kg, 體長(zhǎng)600—1075mm)多數(shù)生殖細(xì)胞出現(xiàn)卵泡退化或卵子被重吸收的現(xiàn)象, 需進(jìn)一步在土池中養(yǎng)殖6年, 性腺發(fā)育才能達(dá)到繁殖需求(Rowland, 1988)。一般認(rèn)為其性成熟需要經(jīng)歷季節(jié)變化(Gooley, 1995), 目前室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖水溫一般控制在20—26°C之間(Ingram, 2005), 工廠化養(yǎng)殖培育親魚(yú)性腺發(fā)育能否滿足繁殖要求還未明確。根據(jù)室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖的親本性腺成熟度, 結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及生產(chǎn)成本等因素, 本實(shí)驗(yàn)選取了6—8齡的室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖親本作為人工繁殖使用, 雌性親本性腺成熟度如圖5a。

3.2 常溫保存對(duì)于精子活力的影響

澳洲鱈鱸孵化率偏低的重要原因是精子被提前激活。精子在由精巢至體外過(guò)程中遇到蒸餾水、池水、或者尿液(Ginzburg, 1972; Park, 2005), 因滲透壓的突然改變致使精子被激活(Cosson, 2004; Alavi, 2005)。澳洲鱈鱸取精時(shí), 精液必須經(jīng)過(guò)較大的泄殖腔, 極易被污染, 精子被激活幾乎無(wú)法避免, 而人工授精時(shí)精卵結(jié)合需要一定的時(shí)間。鯉科魚(yú)類、虹鱒()、鱘等種類在ASP中保存時(shí)間可達(dá)7—14d (Gallego, 2019), 因此我們嘗試用ASP對(duì)收集到的精液進(jìn)行短期保存。結(jié)果表明保存6h、12h、24h均會(huì)造成精子活力過(guò)低。常溫條件下細(xì)菌繁殖較快, 魚(yú)類精子質(zhì)量短時(shí)間內(nèi)迅速惡化, 因此在配制ASP中添加抗生素(Oplinger, 2015)。本實(shí)驗(yàn)中ASP中加入青霉素、硫酸鏈霉素能在一定時(shí)間內(nèi)保持精子活力, 但較建鯉(var. Jian) (Saad, 1988)、匙吻鱘() (Brown, 1995;Park, 2005)等短期保存效果差。

3.3 葡萄糖延長(zhǎng)精子存活時(shí)間

高質(zhì)量的精子是影響人工繁殖效率的關(guān)鍵因素。有學(xué)者研究指出淡水魚(yú)類精子存活時(shí)間一般不超過(guò)2min (魯大椿等, 1989; Rowland, 1998; Billard, 2004), 可能是因?yàn)榧?xì)胞內(nèi)線粒體DNA活動(dòng)不足以補(bǔ)償精子激活后ATP的利用(Perchec, 1995)。本實(shí)驗(yàn)中澳洲鱈鱸精子激活劑中添加葡萄糖后其存活時(shí)間延長(zhǎng), G2-SC組(1.25%葡萄糖+2.25‰氯化鈉)精子動(dòng)性在1min時(shí)相較于DW組(蒸餾水)提升62.0%, 存活時(shí)間達(dá)8min, 較DW組(2min)延長(zhǎng)了3倍。表明適宜濃度的葡萄糖能夠顯著增強(qiáng)精子的活力, 延長(zhǎng)存活時(shí)間。

鯉科魚(yú)類和鮭鱒魚(yú)類精子細(xì)胞中存在糖原物質(zhì)(Lahnsteiner, 1992, 1993), 但這些糖原物質(zhì)并不足以支持長(zhǎng)時(shí)間消耗(Dadras, 2017)。Gardiner(1978)和Stoss(1983)的研究表明一定濃度的外源性葡萄糖可以延長(zhǎng)鯉科魚(yú)類精子存活時(shí)間, 這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果類似, 提示澳洲鱈鱸精子可能具有利用外源性葡萄糖的能力。然而, 一般認(rèn)為葡萄糖分子較大不能直接通過(guò)精子細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部, 葡萄糖是怎樣充當(dāng)精子能量來(lái)源還有待進(jìn)一步探究。

此外, 本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同批次對(duì)照組精子激活后存活時(shí)間及精子動(dòng)性存在差異, 可能是由于澳洲鱈鱸于室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖過(guò)程中, 溫度、光照、餌料等人工因素對(duì)其造成脅迫, 影響精子質(zhì)量(Bromage, 1995; Rowland, 1998; Izquierdo, 2001)。該現(xiàn)象同樣在鯉魚(yú)、羅非魚(yú)中有發(fā)現(xiàn)(De W Kruger, 1984)。

4 結(jié)論

澳大利亞眾多政府組織和企業(yè)經(jīng)過(guò)40年的努力, 共培育了1289萬(wàn)澳洲鱈鱸魚(yú)苗(Forbes, 2015), 本研究中一次人工繁殖就獲得了52.3萬(wàn)尾的魚(yú)苗, 高于劉怡(2014)的結(jié)果(6萬(wàn)多尾, 4—10cm), 本研究使用延長(zhǎng)精子活力的方法大大提高了育苗效率, 室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖所培育的親本可以滿足人工繁殖的要求。因此, 本研究解決了澳洲鱈鱸人工繁殖親本來(lái)源問(wèn)題, 有利于增加苗種供應(yīng)規(guī)模, 可為澳洲鱈鱸工廠化養(yǎng)殖的大規(guī)模推廣奠定基礎(chǔ); 與此同時(shí), 通過(guò)該方法可以提高澳洲鱈鱸育苗效率, 降低生產(chǎn)成本, 使該品種的養(yǎng)殖更加經(jīng)濟(jì)可行; 此外, 添加糖類和氯化鈉延長(zhǎng)精子活力的方法為鱈鱸科魚(yú)類人工繁殖提供了新思路。

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ON PRACTICAL TECHNOLOGY FOR FULL ARTIFICIAL PROPAGATION OF MURRAY COD

LIU Mei-Jian1, ZHAO Zi-Ming1, LIU Ming2, CHEN Su-Nan1, ZHENG Xiang-Long1, LIN A-Peng1, GONG Qing-Li2

(1. Jiangsu Ari-animal Husbandry Vocational College, Taizhou 225300, China; 2. China Ocean University, Qingdao 266003, China)

As state banquet fish of Australia, Murray codhas been introduced to China for indoor industrial culture. However, a series of problems remain unsettled. To achieve the full artificial propagation, the key steps in the process of artificial reproduction, such as the synchronization of sperm and egg, the prolongation of sperm survival time, and the selection of individuals cultured in factory as parents, were investigated. Results showed that the motility of spermatozoa decreased and the survival time of spermatozoa significantly shortened after 6 hours of normal temperature storage, and no motile spermatozoa was found after 96 hours. The addition of 2.5% glucose or 1.25% glucose plus 2.25‰ sodium chloride increased sperm motility and prolonged sperm survival time, suggesting that glucose may be used as an exogenous energy resource, significantly enhancing sperm motility, and improving reproductive efficiency. In the experiment, 6—8-year-old Murray cods were selected as the broodstocks, and 500 000 fry were finally obtained using this method. It was proved that using the indoor cultured individuals as broodstocks could meet the needs of fry for factory cultivation.

Murray cod; artificial propagation; broodstocks; sperm motility; survival time; glucose

* 江蘇省三新工程資助項(xiàng)目, Y2017-42號(hào); 農(nóng)業(yè)部948資助項(xiàng)目, 2016-X27號(hào); 江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目, 201912806027Y號(hào)。劉美劍, 碩士, 講師, E-mail: 2013020238@jsahvc.edu.cn

林阿朋, 博士, 副研究員, E-mail: 2018010382@jsahvc.edu.cn; 宮慶禮, 教授, E-mail: qingli@vip.sina.com

2019-11-13,

2019-12-30

S961.2; S965

10.11693/hyhz20191100214