李 歡， 陳娟娟， 祝成亮， 張平安

武漢大學(xué)人民醫(yī)院 檢驗科， 武漢 430060

原發(fā)性肝癌簡稱肝癌，起源于肝臟的上皮或間葉組織，是全球第六大最常見的腫瘤，也是第三大最常見的癌癥相關(guān)死亡原因[1]，世界各地每年有70多萬人診斷為肝癌，其中很大一部分是肝細(xì)胞癌(HCC)。HBV感染是HCC主要的病因之一。早期診斷對改善HCC的治療和預(yù)后非常重要。生長分化因子(growth differentiation factor，GDF)15屬于TGFβ超家族成員，與腫瘤的轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系[2]。在正常生理條件下，一般表達于胎盤和前列腺中，其他器官中不常見，但在炎癥和惡性腫瘤等病理狀態(tài)時，累及的組織及血液中GDF15表達顯著升高[3]。AFP是肝癌診斷最常用的血清標(biāo)志物，但單一使用AFP診斷時靈敏度和特異度都不夠理想，本研究將探討GDF15和AFP聯(lián)合檢測對HBV相關(guān)HCC診斷的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象 收集2019年3月1日-2019年9月1日在本院就診的HBV相關(guān)HCC患者(HCC組)、慢性乙型肝炎(CHB)患者(CHB組)和健康體檢者(NC組)的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有HCC患者HBsAg均為陽性，HCC患者的診斷符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2017年版)》[4]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)HCC患者未接受過介入治療或化療等；(3)CHB患者診斷后尚未接受治療；(4)所有對象臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)排除HBV外其他肝炎病毒或重疊感染；(2)排除HCC以外的其他惡性腫瘤；(3)排除甲狀腺功能亢進、嚴(yán)重心血管病、糖尿病等疾??；(4)排除妊娠婦女。本研究經(jīng)武漢大學(xué)人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)(批號：2016K-C025)，且所納入對象均簽訂知情同意書。

1.2 檢測方法 采集所有研究對象空腹6～8 h后的靜脈血5 ml，以轉(zhuǎn)速3500 r/min(離心半徑=16 cm)離心5 min，分離血清-80 ℃?zhèn)溆?。采用Siemens公司ADVIA CENTUAR XP全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑盒檢測血清AFP 水平，參考區(qū)間為0～8.0 ng/ml；采用從R&D(Quantikine，R&D Systems，USA)購入的ELISA試劑盒(目錄號：DY957，DY008)檢測血清GDF15水平，參考檢測范圍為0～0.5 ng/ml。所有檢測均在試劑盒說明書規(guī)定的時間內(nèi)完成，且嚴(yán)格遵守實驗相關(guān)操作規(guī)程。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較 共納入患者225例，其中HCC組97例，男56例，女41例；CHB組41例，男23例，女18例；NC組87例，男49例，女38例。三組研究對象在年齡(F=0.158，P=0.854)與性別分布(χ2=0.05，P=0.975)上的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(表1)。

2.2 GDF15和AFP檢測結(jié)果 HCC組的GDF15水平明顯高于CHB組和NC組(P值均<0.01)；HCC組和CHB組的AFP水平均顯著高于NC組，且HCC組AFP水平顯著高于CHB組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.01)(表2)。

表2 各組GDF15和AFP水平比較

注：與NC組相比，1)P<0.01；與CHB組相比，2)P<0.01

2.3 ROC曲線分析GDF15和AFP單獨或聯(lián)合檢測診斷HCC的價值 采用二元logistic回歸分析得到兩種指標(biāo)聯(lián)合的回歸模型，進一步繪制GDF15和AFP單獨或聯(lián)合檢測的ROC曲線(圖1)，分析結(jié)果見表3，GDF15聯(lián)合AFP的曲線下面積最大，為0.816，其次為GDF15(0.752)，AFP最低(0.660)。AFP的特異度最高，GDF15聯(lián)合AFP的靈敏度和約登指數(shù)最高。

表1 研究對象一般資料

表3 GDF15、AFP單獨及聯(lián)合檢測診斷HCC的ROC曲線分析結(jié)果

圖1GDF15、AFP單獨及聯(lián)合檢測診斷HCC的ROC曲線

3 討論

HCC診斷的腫瘤標(biāo)志物較多，常見的有AFP、α-L-巖藻苷酶和癌胚抗原等[5]。單個標(biāo)志物對診斷HCC的靈敏度和特異度往往不夠理想，而多指標(biāo)聯(lián)合檢測可以明顯提高診斷效能[6-8]。本研究HCC組的GDF15和AFP水平均顯著高于CHB組和NC組，提示GDF15和AFP可能是HCC診斷的有效指標(biāo)，且GDF15診斷HCC的曲線下面積大于0.7，高于AFP，說明GDF15對HCC的診斷效能優(yōu)于AFP。

GDF15，又稱巨噬細(xì)胞抑制因子1，能抑制巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNFα，參與組織損傷或疾病時的感染、纖維化和凋亡途徑，在多種腫瘤中有高表達的現(xiàn)象，比如結(jié)直腸癌[9]、胃癌[10]等。目前，多項研究發(fā)現(xiàn)GDF15既可作為抑癌因子，也可作為致癌因子，與腫瘤類型相關(guān)。在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中，GDF15具有抗腫瘤活性[11]；在人結(jié)直腸細(xì)胞中，GDF15通過控制細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抗腫瘤蛋白的作用[12]；而在口腔鱗狀細(xì)胞癌中，GDF15的表達與其惡性程度呈正相關(guān)，GDF15能促進腫瘤細(xì)胞的增殖和集落形成[13]；Wang等[14]的實驗數(shù)據(jù)證明GDF15能促進HepG 2細(xì)胞的存活、侵襲、遷移和血管生成，并認(rèn)為GDF15可能是肝癌的危險因素，可作為肝癌診斷的血清標(biāo)志物。本研究的數(shù)據(jù)顯示HCC組GDF15水平顯著高于CHB組和NC組，與Liu等[15]的研究結(jié)果一致。同時，ROC曲線分析顯示GDF15診斷HBV相關(guān)HCC的曲線下面積為0.752，靈敏度為74.0%，特異度為68.3%，在Liu等[15]研究中，GDF15診斷HCC的曲線下面積為0.843，靈敏度為86.8%，特異度為72.8%，較高于本文結(jié)果，可能是由于取樣和地域等原因，但這些均在一定程度上證實GDF15可作為HCC診斷的血清標(biāo)志物。

AFP是最常見的HCC診斷血清標(biāo)志物，主要由胎兒肝細(xì)胞及卵黃囊合成，血清正常含量<25 μg/L，當(dāng)細(xì)胞癌變時，其水平會顯著升高[16]。本研究HCC組的AFP水平顯著高于CHB組和NC組，與理論基礎(chǔ)相符。但除了HCC，AFP在慢性肝炎、肝硬化等其他肝病中也有升高的現(xiàn)象，可能會導(dǎo)致漏診和誤診。在朱慧婧等[17]研究中AFP診斷HCC的靈敏度為58.57%，特異度為78.71%，與本研究結(jié)果有部分差異，原因可能是抽樣量不同、采用的測定儀器和試劑種類或地域差異等。本研究將GDF15和AFP聯(lián)合作ROC曲線，結(jié)果顯示曲線下面積為0.816，大于單項檢測結(jié)果，故認(rèn)為聯(lián)合檢測的性能優(yōu)于單項指標(biāo)檢測。

綜上所述，GDF15和AFP均可作為HCC診斷的有效指標(biāo)，且聯(lián)合檢測可以進一步提高HCC的診斷效能，對臨床診斷有重要的參考價值。