王茜，黃勇，李賀敏，周艷，祁瑞林，高致明，張紅瑞

(河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，河南 鄭州 450046)

地黃為玄參科植物地黃(RehmanniaglutinosaLibosch.)的新鮮或干燥塊根，可加工為鮮地黃、生地黃和熟地黃。鮮地黃具有清熱生津、涼血、止血之效；生地黃具有清熱涼血、養(yǎng)陰生津之效；熟地黃具有補(bǔ)血滋陰、益精填髓之效[1-2]。地黃是傳統(tǒng)常用大宗中藥材之一[3]，主要分布于遼寧、河北、河南、山東、湖北等地，中國(guó)各地及國(guó)外均有栽培。其中，主產(chǎn)于河南古懷慶府地區(qū)的地黃為著名的“四大懷藥”之一[4]。近年來(lái)在大力發(fā)展中藥材的基礎(chǔ)上，人們對(duì)地黃的認(rèn)識(shí)逐漸深入，在地黃種質(zhì)創(chuàng)新和品種選育[5]、播期對(duì)地黃產(chǎn)量的影響[6]、地膜覆蓋對(duì)懷地黃產(chǎn)量和品質(zhì)的研究[7]、密度對(duì)脫毒懷地黃生長(zhǎng)發(fā)育等的影響[8]、不同施肥措施[9]、根際土壤中化感物質(zhì)的篩選[10]等方面均有研究，但仍存在由于種栽質(zhì)量參差不齊、栽培技術(shù)不規(guī)范等嚴(yán)重影響地黃產(chǎn)量和品質(zhì)的現(xiàn)象?；诖?，本試驗(yàn)通過(guò)研究不同藥劑處理不同等級(jí)種栽對(duì)地黃生理特性的影響，以期找到地黃種栽較為適宜的播前處理，為地黃安全生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

河南主產(chǎn)區(qū)溫縣主栽地黃品種金九，經(jīng)河南農(nóng)業(yè)大學(xué)高致明教授鑒定為玄參科地黃(Rehmanniaglutinosa(Gaetn.)Libosch.ex Fisch.Et Mey.)。

1.2 處理設(shè)計(jì)

于2017年3—4月收集大小均勻、無(wú)病蟲害的地黃種栽50份，每份2 kg，從中隨機(jī)選取10份，參考姚峰等[11]的方法，以地黃種栽直徑、質(zhì)量、長(zhǎng)度為指標(biāo)，應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)差法對(duì)種栽進(jìn)行等級(jí)劃分。將所選種栽分為4個(gè)等級(jí)：1級(jí)，種栽長(zhǎng)度≥6 cm，種栽直徑≥2.5 cm，種栽質(zhì)量≥10 g；2級(jí)，種栽長(zhǎng)度4～<6 cm，種栽直徑2～<2.5 cm，種栽質(zhì)量7～<10 g；3級(jí)，種栽長(zhǎng)度>2.5～<4 cm，種栽直徑>1～<2 cm，種栽質(zhì)量>4～<7 g；4級(jí)，種栽長(zhǎng)度≤2.5 cm，種栽直徑≤1 cm，種栽質(zhì)量≤4 g。

2017年5月下旬，將不同等級(jí)種栽分別做18種不同比例藥劑浸種以及與生石灰拌種混合處理的播前處理。T1～T3分別為300、500、700倍液多菌靈藥劑浸種，T4～T6分別為300、500、700倍液多菌靈藥劑浸種+生石灰粉混合拌種，T7～T9分別為300、500、700倍液甲托藥劑浸種，T10～T12分別為300、500、700倍液甲托藥劑浸種+生石灰粉混合拌種，T13～T15分別為300、500、700倍液代森錳鋅藥劑浸種，T16～T18分別為300、500、700倍液代森錳鋅藥劑浸種+生石灰粉混合拌種，以清水為對(duì)照(CK)。將藥劑處理后的種栽按10 cm左右株距穴植在4 m×4 m且四周設(shè)1 m左右保護(hù)行的小區(qū)內(nèi)，每個(gè)小區(qū)起5個(gè)50 cm左右的壟，每壟2行，按常規(guī)田間管理方法管理。

1.3 測(cè)定方法

每隔30 d在各小區(qū)隨機(jī)選取5株健康樣株測(cè)其葉綠素含量、光合特性及其他生理指標(biāo)。統(tǒng)一選取以植株為中心由下向上第2排健康且完全展開(kāi)的葉片，用SPAD 502測(cè)定其葉綠素含量；Li-6400便攜式光合儀測(cè)定其凈光合速率(Pn)；過(guò)氧化物酶(POD)活性采用李玲[12]的方法測(cè)定；過(guò)氧化氫酶(CAT)活性采用H2O2比色法[13]測(cè)定；可溶性蛋白含量采用考馬斯亮藍(lán)比色法[14]測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2003結(jié)合SPSS 17.0分析軟件進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同等級(jí)種栽地黃生理特性差異

2.1.1 葉綠素含量

由圖1可知，相同等級(jí)種栽地黃的葉綠素含量隨生育進(jìn)程的推進(jìn)總體呈逐漸上升的趨勢(shì)，且在生長(zhǎng)發(fā)育前期(6、7月)，1、2、3級(jí)種栽地黃葉綠素含量顯著高于4級(jí)；生長(zhǎng)后期(9月)，1、2級(jí)種栽地黃葉綠素含量增長(zhǎng)迅速，且極顯著高于3、4級(jí)種栽地黃葉綠素含量，其中，1、2級(jí)間種栽葉綠素含量間差異極顯著，3、4級(jí)間差異不顯著。

相同月份間無(wú)相同大小寫字母分別表示組間在P<0.01和P<0.05水平差異顯著。圖2～3同。圖1 不同等級(jí)種栽地黃葉綠素含量

2.1.2 POD和CAT活性

由圖2可知，同等級(jí)種栽地黃在不同生育期內(nèi)POD活性總體表現(xiàn)為下降趨勢(shì)；同一生育期內(nèi)不同等級(jí)種栽地黃POD活性整體呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，總體表現(xiàn)為2級(jí)>1級(jí)>3級(jí)>4級(jí)。其中，1、2級(jí)種栽地黃POD活性均與3、4級(jí)差異極顯著，且1級(jí)種栽地黃POD活性極顯著高于2級(jí)。

圖2 不同等級(jí)種栽地黃POD活性

由圖3可知，同一等級(jí)種栽地黃CAT活性在不同生育期內(nèi)總體呈先升高后降低的趨勢(shì)，即9月>10月>8月；同一生育期內(nèi)不同等級(jí)種栽地黃CAT活性總體呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，CAT活性總體表現(xiàn)為2級(jí)>1級(jí)>3級(jí)>4級(jí)，且各等級(jí)種栽地黃CAT活性差異極顯著。

圖3 不同等級(jí)種栽地黃CAT活性

2.2 不同藥劑處理種栽地黃生理特性差異

2.2.1 Pn

由表1可知，1級(jí)種栽地黃的Pn除T7和T12處理外均與對(duì)照間存在極顯著差異；2級(jí)種栽地黃的Pn除T15與對(duì)照差異顯著外，T2、T3、T4、T6、T8、T11、T13、T16、T18均與對(duì)照差異極顯著，其余各處理與對(duì)照差異均不顯著；3級(jí)種栽的T14處理的地黃Pn與對(duì)照間差異顯著，且除T5、T7、T9、T10、T12外，其余各處理均與對(duì)照差異極顯著；4級(jí)種栽地黃Pn除T5、T7、T10、T12外均與對(duì)照差異極顯著。綜上可知，在藥劑處理種栽對(duì)地黃Pn影響中，優(yōu)勢(shì)藥劑處理為T16和T11。同時(shí)，T16處理的1、3級(jí)種栽地黃的Pn均較強(qiáng)，分別為15.17和8.82；T11處理的2、4級(jí)種栽地黃的Pn均較強(qiáng)，分別為10.25和6.89。

表1 不同處理對(duì)不同等級(jí)種栽地黃Pn的影響

注：*和**分別表示不同處理在0.01和0.05水平差異顯著。

2.2.2 葉綠素含量

采用不同藥劑處理不同等級(jí)種栽地黃，對(duì)其葉綠素含量進(jìn)行測(cè)定，篩選出優(yōu)勢(shì)處理為300倍液代森錳鋅藥劑浸種+生石灰粉混合拌種(T16)和500倍液甲托藥劑浸種+生石灰粉混合拌種(T11)，并將其與清水進(jìn)行比較分析。

由圖4可知，藥劑處理后各等級(jí)種栽地黃葉綠素含量隨生育進(jìn)程的推進(jìn)總體呈逐漸升高的趨勢(shì)；經(jīng)優(yōu)勢(shì)藥劑T16、T11處理后，相同生育時(shí)期的各級(jí)種栽均分別比清水相應(yīng)處理的種栽葉綠素含量高。T16處理的相同生育期內(nèi)，1、3級(jí)種栽地黃葉綠素含量均較其他等級(jí)高，且1級(jí)種栽地黃葉綠素含量比3級(jí)高；相同生育期內(nèi)T11處理的1、2級(jí)種栽地黃葉綠素含量相差不大，但高于3、4級(jí)。

圖4 藥劑處理對(duì)不同等級(jí)種栽地黃葉綠素含量的影響

2.2.3 POD活性

對(duì)不同藥劑處理的不同等級(jí)種栽地黃的POD活性進(jìn)行測(cè)定，篩選確定優(yōu)勢(shì)藥劑處理為300倍液代森錳鋅藥劑浸種及生石灰粉混合拌種(T16)和500倍液甲托藥劑浸種及生石灰粉混合拌種(T11)，并將其與清水處理進(jìn)行比較分析。

由圖5可知，各處理同等級(jí)間種栽地黃的POD活性隨生育進(jìn)程的推進(jìn)總體呈先降低后升高的趨勢(shì)，且均表現(xiàn)為2級(jí)最高，1級(jí)其次，1、2級(jí)明顯高于3、4級(jí)。

圖5 藥劑處理對(duì)不同等級(jí)種栽地黃POD活性的影響

2.2.4 CAT活性

對(duì)不同藥劑處理的不同等級(jí)種栽地黃的CAT活性進(jìn)行測(cè)定，篩選確定優(yōu)勢(shì)藥劑處理為T16和T11，并將其與清水處理進(jìn)行比較分析。

由圖6可知，各處理同等級(jí)間種栽地黃的CAT活性隨生育進(jìn)程的推進(jìn)總體呈先升高后降低的趨勢(shì)，即9月>10月>8月，且均表現(xiàn)為2級(jí)最高，1級(jí)其次，1、2級(jí)明顯高于3、4級(jí)。

2.2.5 可溶性蛋白含量

由圖7可知，經(jīng)藥劑處理后在不同生育期內(nèi)同一等級(jí)種栽地黃可溶性蛋白含量整體均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，且可溶性蛋白含量均在9月達(dá)到最高；不同藥劑處理各等級(jí)種栽地黃可溶性蛋白含量均高于清水處理，且優(yōu)勢(shì)藥劑處理為T16和T11。其中，T16處理的1、3級(jí)種栽地黃可溶性蛋白含量較高，T11處理的2、4級(jí)種栽地黃可溶性蛋白含量較高。

圖7 藥劑處理對(duì)不同等級(jí)地黃可溶性蛋白含量的影響

3 小結(jié)與討論

植物的CAT和POD活性的高低變化反映出其抗逆性的強(qiáng)弱。吳鳳芝等[15]研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)對(duì)黃瓜施用不同藥劑，對(duì)其幼苗的POD活性存在抑制作用；謝越等[16]研究發(fā)現(xiàn)，滁菊體內(nèi)POD、CAT和SOD活性隨營(yíng)養(yǎng)液中成分質(zhì)量濃度的增加而降低；沈玉聰?shù)萚17]研究表明，經(jīng)外施藥劑處理后，三七幼苗的POD和CAT活性均有所降低。本試驗(yàn)采用不同藥劑處理地黃種栽發(fā)現(xiàn)，300倍代森錳鋅浸種與生石灰粉混合拌種、500倍甲基托布津浸種與生石灰粉混合拌種的藥劑浸種處理為優(yōu)勢(shì)藥劑處理，對(duì)種栽地黃POD和CAT活性影響均極顯著，這可能是由于優(yōu)勢(shì)藥劑處理增強(qiáng)了地黃的抗逆性。糖類是植物新陳代謝的基礎(chǔ)，植物體內(nèi)糖含量的高低反映其新陳代謝和生命力的強(qiáng)弱[18]。優(yōu)勢(shì)藥劑處理種栽對(duì)地黃可溶性糖含量影響極顯著，可能由于藥劑處理種栽后地黃長(zhǎng)勢(shì)較好，達(dá)到了增強(qiáng)生命力的效果。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，4個(gè)等級(jí)種栽地黃中，1、2級(jí)種栽的葉綠素含量較高，其POD和CAT活性大小均表現(xiàn)為2級(jí)>1級(jí)>3級(jí)>4級(jí)。300倍液代森錳鋅藥劑浸種及生石灰粉混合拌種處理的1、3級(jí)種栽地黃的葉綠素含量、Pn和可溶性蛋白含量均較高，同時(shí)，1、2級(jí)種栽地黃的POD、CAT活性均較高；500倍液甲托藥劑浸種及生石灰粉混合拌種處理的2、4級(jí)種栽地黃的Pn和可溶性蛋白含量較高，1、2級(jí)種栽地黃的葉綠素含量、POD、CAT活性均較高。

地黃生長(zhǎng)生理指標(biāo)是衡量其對(duì)環(huán)境變化是否產(chǎn)生適應(yīng)性的重要因素，可有效用于改善地黃品質(zhì)。綜上分析可知，300倍代森錳鋅浸種與生石灰粉混合拌種和500倍甲基托布津浸種與生石灰粉混合拌種的藥劑浸種處理對(duì)地黃生理特性影響較為突出，并與清水處理差異極顯著，可用上述藥劑對(duì)地黃種栽進(jìn)行播前處理，提高地黃產(chǎn)量與品質(zhì)，為其安全高產(chǎn)栽培提供參考。