核酸檢測(cè)是確診新冠肺炎的“金標(biāo)準(zhǔn)”,而檢測(cè)流程中的每一個(gè)環(huán)節(jié)都是精細(xì)活,容不得半點(diǎn)馬虎。
“這里是與病毒‘零距離接觸的地方,整個(gè)實(shí)驗(yàn)室完全密封,室內(nèi)處于負(fù)壓狀態(tài),我們喜歡用‘三流來形容它,即人流、物流、氣流的單向流動(dòng),確保在里面的污染物不會(huì)泄漏到外面而造成污染?!睆V東省第二人民醫(yī)院P3實(shí)驗(yàn)室主任林劍國(guó)說。而他說的“這里”指的就是P3實(shí)驗(yàn)室(生物安全防護(hù)三級(jí)實(shí)驗(yàn)室)。廣東省第二人民醫(yī)院每天400多份新冠病毒核酸檢測(cè)就是在這里開展的。
現(xiàn)在,讓我們揭開廣東省第二人民醫(yī)院P3實(shí)驗(yàn)室的神秘面紗,看看在這里病毒究竟是怎樣被“揪出來”的?
檢測(cè)流程每個(gè)環(huán)節(jié)都是精細(xì)活
核酸檢測(cè)確診新冠肺炎的流程可分為5個(gè)步驟:樣本進(jìn)入“傳遞窗”-滅活處理-開蓋加樣和核酸提取-擴(kuò)增反應(yīng)判斷結(jié)果-高壓滅菌。
第一步,采集的檢測(cè)樣本如咽拭子或肛拭子,在進(jìn)入P3實(shí)驗(yàn)室前就得先進(jìn)入一個(gè)特殊的窗口——“傳遞窗”,這個(gè)窗口也叫Air Lock,空氣鎖,顧名思義,與空氣有關(guān)。這個(gè)傳遞窗有不能同時(shí)打開的雙重門,保證傳遞樣本時(shí)帶進(jìn)去的空氣被隔離在雙重門中,確保實(shí)驗(yàn)室外的環(huán)境不受污染。
第二步,樣本在水浴箱經(jīng)半個(gè)小時(shí)56℃的高溫滅活,使病毒蛋白不再有生理活性,失去感染、致病和繁殖能力,使實(shí)驗(yàn)員在對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)相對(duì)安全,但是病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。
第三步,進(jìn)行開蓋加樣和核酸提取。
第四步,提取的核酸送到核酸檢測(cè)室內(nèi),就要上儀器了。提取的核酸加入擴(kuò)增試劑中,通過熒光PCR儀進(jìn)行RT-PCR反應(yīng),先將提取的核酸逆轉(zhuǎn)錄成DNA,再以DNA為模版,對(duì)特定位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增,利用不同的溫度進(jìn)行變性、退火和延伸,每個(gè)循環(huán)采集熒光值,45個(gè)循環(huán)后繪制熒光曲線,用時(shí)約110分鐘,實(shí)驗(yàn)員根據(jù)熒光曲線分析判斷結(jié)果為陰性或陽(yáng)性。
第五步,實(shí)驗(yàn)過程產(chǎn)生的污物通過高壓滅菌后,按相關(guān)普通醫(yī)療垃圾處理。
檢測(cè)結(jié)果經(jīng)歷重重比對(duì)與復(fù)核
任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題都可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果差錯(cuò)。因此,為保障檢測(cè)的質(zhì)量,檢測(cè)結(jié)果將經(jīng)歷重重的比對(duì)與復(fù)核。
在檢測(cè)過程中,實(shí)驗(yàn)員始終保持謹(jǐn)慎的態(tài)度進(jìn)行每一次測(cè)試,不錯(cuò)過任何一個(gè)可疑樣本,針對(duì)可疑樣本,還會(huì)選用不同的試劑進(jìn)行復(fù)核確定;其次,按照流程,每進(jìn)行一批實(shí)驗(yàn),均會(huì)隨機(jī)插入三個(gè)以上空白對(duì)照,針對(duì)陽(yáng)性樣本還會(huì)進(jìn)行病毒基因的測(cè)序比對(duì),以防止“假陽(yáng)性”的出現(xiàn)。
檢測(cè)后,實(shí)驗(yàn)室還會(huì)定期隨機(jī)抽取檢測(cè)樣本送到第三方實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè),對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析,同時(shí)實(shí)驗(yàn)室也會(huì)參加衛(wèi)生主管部門和廣東省臨床中心的室間質(zhì)評(píng),保障檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
(摘自《科技日?qǐng)?bào)》)