張淑瓊 江 虹 劉 艷 向 容 李 琴

(長(zhǎng)江師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，長(zhǎng)江師范學(xué)院武陵山片區(qū)綠色發(fā)展協(xié)同創(chuàng)新中心重慶 408100)

地奧司明(Diosmin)是一種血管保護(hù)劑，它具有增強(qiáng)靜脈張力、改善微循環(huán)及促進(jìn)淋巴回流等作用，臨床上主要用于治療慢性靜脈功能不全、淋巴功能不全、急性痔發(fā)作、糖尿病患者的微血管病變和繼發(fā)于傳統(tǒng)肺癌治療后的上肢淋巴水腫等。該藥的副作用：在神經(jīng)系統(tǒng)方面有失眠、嗜睡、眩暈、頭痛、焦慮和疲勞等；在胃腸道方面主要有惡心、嘔吐、消化不良、腹痛及腹瀉等；在皮膚方面主要有濕疹及玫瑰糠疹等。鑒于此，為了控制用藥質(zhì)量，對(duì)藥物中地奧司明含量的檢測(cè)方法進(jìn)行研究顯得很有必要。目前，文獻(xiàn)報(bào)道的對(duì)地奧司明的檢測(cè)方法并不多，主要是高效液相色譜法[1-8]和液-質(zhì)聯(lián)用法[9，10]，也偶有氣-質(zhì)聯(lián)用法[11]、電化學(xué)法[12]及熒光法[13]等的報(bào)道。高效液相色譜法和液-質(zhì)聯(lián)用法有高的準(zhǔn)確度和靈敏度，但儀器價(jià)格貴、成本高，不易普及，并且前處理麻煩、費(fèi)時(shí)。吸收光譜法不僅操作簡(jiǎn)便、儀器價(jià)廉易于普及，并有較高靈敏度，且目前未見(jiàn)用吸收光譜法研究地奧司明的報(bào)道。

本工作以亮綠作為地奧司明的締合劑，用三波長(zhǎng)吸收光譜法來(lái)研究地奧司明的定量測(cè)定方法。實(shí)驗(yàn)表明，地奧司明在一定濃度范圍內(nèi)服從比爾定律，靈敏度比單波長(zhǎng)法高2～3 倍，比一般吸收光譜法(表觀摩爾吸光系數(shù)為103或104L/(mol·cm))高1或2 個(gè)數(shù)量級(jí)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

U-4100型紫外-可見(jiàn)-近紅外分光光度計(jì)，日本日立公司；pHS-3C型精密酸度計(jì)，上海虹益儀器儀表有限公司。

亮綠(Brilliant Green，BLG；99%，成都市科龍化工試劑廠)溶液：1.0×10-3mol/L。地奧司明(Diosmin，DOSM；對(duì)照品批號(hào)：D485200，中國(guó)食品藥品檢定研究院)標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取適量DOSM 對(duì)照品于小燒杯中，加6 mL 2.0 mol/L NaOH 溶液，加水10 mL，攪拌，待溶解完全后轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶中，用水定容，即得濃度為608.0 mg/L 貯備液，保存于冰箱(4 ℃)中，用時(shí)取貯備液用水稀釋10 倍。Tris-HCl緩沖溶液：取適量HCl(0.10 mol/L)和適量三羥甲基氨基甲烷，0.20 mol/L(Tris)混合，用pH 計(jì)測(cè)定，配成pH=3.5～8.5范圍的溶液。實(shí)驗(yàn)所用水為二次蒸餾水。

樣品：不同生產(chǎn)廠家的地奧司明片(1#、2#)，市售。

1.2 樣液制備

取市售地奧司明片(1#和2#)各5片，去包衣后，置于小燒杯中，加20 mL 2.0 mol/L NaOH 溶液溶解，再加20 mL水，攪拌、過(guò)濾后，將濾液置于1 000 mL 容量瓶中，用水定容。移取該溶液10.0 mL 于另一1 000 mL 容量瓶中，用水定容，即為待測(cè)液。

1.3 吸光度的測(cè)定

于10 mL 比色管中，準(zhǔn)確加入Tris-HCl緩沖溶液(pH=5.68)1.0 mL，亮綠(1.0×10-3mol/L)溶液2.0 mL 和地奧司明(60.80 mg/L)標(biāo)準(zhǔn)溶液0～2.0 mL，用水稀至刻度，搖勻，10 min 后，在U-4100 型光度計(jì)上，以試劑空白作參比，掃描吸收光譜，分別記錄424 nm、560 nm 及660 nm 處的吸光度A，再用三波長(zhǎng)法求體系溶液的吸光度A424+560+660。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收光譜

圖1 亮綠與地奧司明的吸收光譜Fig.1 Absorption spectra of brilliant green and diosmin 1.6.08 mg/L DOSM,against water;2.2.0×10-5 mol/L BLG,pH=5.68,against water;3-6.3.04,6.08,9.13,12.2 mg/L DOSM-2.00×10-4 mol/L BLG,pH=5.68.

圖1表明，DOSM 溶液在可見(jiàn)光區(qū)幾乎無(wú)吸收，在紫外光區(qū)有一定吸收，最大吸收波長(zhǎng)位于375 nm。BLG 的弱酸性溶液(pH=5.68)在可見(jiàn)光區(qū)有強(qiáng)吸收，最大吸收波長(zhǎng)為623 nm。當(dāng)在BLG 的弱酸性溶液(pH=5.68)中加入不同質(zhì)量濃度的DOSM 溶液后，在可見(jiàn)光區(qū)的光譜曲線上出現(xiàn)3 個(gè)較強(qiáng)的強(qiáng)度相近的負(fù)吸收峰，分別位于424 nm(紫移199 nm)、560 nm(藍(lán)移63 nm)和660 nm(紅移37 nm)，在此3 個(gè)波長(zhǎng)處，隨著DOSM 質(zhì)量濃度的增大，負(fù)吸收隨之呈線性增強(qiáng)。表明DOSM 與BLG 間可以發(fā)生反應(yīng)，生成的新物質(zhì)(BLG 是一種堿性染料，DOSM 結(jié)構(gòu)上的酚基氫離去后以陰離子形式存在于溶液中，于是二者以靜電引力結(jié)合生成離子締合物)在424 nm、560 nm 及660 nm 處的吸光度絕對(duì)值|A|均與加入的一定濃度范圍內(nèi)的DOSM 的質(zhì)量濃度呈線性關(guān)系，并服從比爾定律。為了提高方法的靈敏度，采用三波長(zhǎng)法來(lái)測(cè)定DOSM 的含量，根據(jù)吸光度的加和性，三波長(zhǎng)法仍服從比爾定律，可用于定量分析，且靈敏度比單波長(zhǎng)法高2～3倍。故實(shí)驗(yàn)選用三波長(zhǎng)法進(jìn)行測(cè)定。

2.2 適宜條件的選擇

2.2.1 酸度及用量取DOSM(60.80 mg/L)標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 mL，BLG(1.0×10-3mol/L)溶液2.0 mL，考察Tris-HCl緩沖溶液pH值(pH=3.5～8.5)對(duì)DOSM-BLG體系靈敏度的影響。結(jié)果表明，無(wú)論用單波長(zhǎng)法還是用雙波長(zhǎng)法或三波長(zhǎng)法測(cè)定，最佳酸度均為pH=5.68，見(jiàn)圖2。當(dāng)酸度大于或小于pH=5.68時(shí)，|A|均有不同程度降低。故實(shí)驗(yàn)選擇pH=5.68控制反應(yīng)的酸度。隨即考察了其用量對(duì)DOSM-BLG體系靈敏度的影響，結(jié)果表明用量為1.0 mL時(shí)，各測(cè)定波長(zhǎng)下體系的|A|相對(duì)較高，即靈敏度較高；從圖可知，三波長(zhǎng)法的靈敏度相對(duì)最高。適宜酸度條件控制為1.0 mL pH=5.68的Tris-HCl 溶液。

2.2.2 BLG溶液濃度固定DOSM溶液的濃度和用量，在選定的緩沖溶液適宜酸度及用量條件下，考察BLG溶液濃度對(duì)DOSM-BLG體系靈敏度的影響。結(jié)果表明，BLG溶液的最佳濃度為2.0×10-4mol/L，見(jiàn)圖3。故實(shí)驗(yàn)選擇BLG(1.0×10-3mol/L)溶液2.0 mL。

2.2.3 試劑加入順序固定DOSM溶液的濃度和用量，在選定的最佳緩沖溶液酸度、用量及最佳BLG濃度的條件下，考察試劑加入順序?qū)OSM-BLG體系靈敏度的影響。結(jié)果表明，用三波長(zhǎng)法測(cè)定，試劑加入順序?qū)A|均無(wú)明顯影響，即改變?cè)噭┘尤腠樞?，體系的|A|基本不變。

2.2.4 反應(yīng)速度及締合物的穩(wěn)定性考察反應(yīng)時(shí)間對(duì)DOSM-BLG體系靈敏度的影響。結(jié)果表明，反應(yīng)在10 min內(nèi)可以進(jìn)行完全。10 min后，隨著反應(yīng)的繼續(xù)進(jìn)行，|A|基本不變，穩(wěn)定時(shí)間約1 h。故實(shí)驗(yàn)選在10 min后進(jìn)行測(cè)定。

2.3 吸光度與DOSM濃度的關(guān)系

無(wú)論用單波長(zhǎng)法還是用雙波長(zhǎng)法或三波長(zhǎng)法測(cè)定最佳條件下的DOSM標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，方法的線性范圍均為0.03～12.2 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖4，其他相關(guān)參數(shù)見(jiàn)表1?？梢?jiàn)，三波長(zhǎng)法的靈敏度相對(duì)最高。

圖3 BLG溶液濃度對(duì)|A|的影響Fig.3 Effect of BLG concentration on |A|1.424 nm;2.560 nm;3.660 nm;4.(424+560) nm;5.(424+560+660) nm.

圖4 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4 Calibration curves1.424 nm;2.560 nm;3.660 nm;4.(424+560) nm;5.(424+560+660) nm.

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)參數(shù)Table 1 Related parameters of standard curves

2.4 共存物質(zhì)的影響

2.5 樣品分析

在最佳實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)定各試液的吸光度，各樣品平行測(cè)定5份。加標(biāo)回收試驗(yàn)中，做3個(gè)不同加標(biāo)水平的回收試驗(yàn)，各水平做平行試驗(yàn)5份。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品分析結(jié)果及回收試驗(yàn)(n=5)Table 2 Analytical results of samples and recovery tests(n=5)

3 結(jié)論

采用三波長(zhǎng)吸收光譜法測(cè)定藥物中的地奧司明，方法具有簡(jiǎn)便、靈敏度高(和一般吸收光譜法相比)、前處理簡(jiǎn)單(相對(duì)于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法[1])、費(fèi)時(shí)少、所用儀器價(jià)廉及易于普及等優(yōu)點(diǎn)。有較高的準(zhǔn)確度(回收率為98.1%～102%)和精密度(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.0%～2.4%)，滿足痕量分析要求，方法的選擇性良好。該方法適用于市售地奧司明片劑中地奧司明的定量分析。