楊舒慧，李強(qiáng)，羅志昊，李芬，曹偉，李小偉

（1.四川省畜牧總站，四川 成都 610041；2.四川省龍日種畜場(chǎng)，四川 紅原 624400；3.成都匯豐動(dòng)物育種有限公司，四川 成都 610011）

2015～2018年，四川省畜牧總站和四川省龍日種畜場(chǎng)以麥洼牦牛為試驗(yàn)對(duì)象，解決了牦牛集中飼養(yǎng)、調(diào)教及采精、原精處理、遠(yuǎn)距離運(yùn)輸及分裝冷凍等方面的技術(shù)難點(diǎn)。本文對(duì)麥洼牦牛細(xì)管凍精生產(chǎn)要點(diǎn)進(jìn)行了梳理和提煉，以期對(duì)牦牛細(xì)管凍精規(guī)?；a(chǎn)提供參考。

1 牦牛飼養(yǎng)及訓(xùn)練

牦牛體型大、野性高，發(fā)情期的種公牛具有很強(qiáng)的攻擊性，因此需要進(jìn)行采精前訓(xùn)練。訓(xùn)練對(duì)象為采精種公牛、臺(tái)牛，時(shí)間約半年，馴化的目的是為增進(jìn)采精員與牦牛的親近度，減少牦牛人工采精的應(yīng)激，同時(shí)讓采精員熟悉牦牛的生理反應(yīng)。

1.1 選擇種公牛、臺(tái)牛、采精員

1.1.1 選擇種公牛 選擇4～5歲健康無(wú)病、體質(zhì)健壯的特級(jí)麥洼牦牛種公牛作為采精種公牛，對(duì)其編號(hào)建檔，穿鼻戴環(huán)并開(kāi)始訓(xùn)練。

1.1.2 選擇臺(tái)牛 選用適宜采精種公牛交配體的身體健康、性情溫順、發(fā)情旺盛、體形適當(dāng)?shù)哪概Ｗ髋_(tái)牛。

1.1.3 選擇采精員 選擇膽大心細(xì)、靈敏謹(jǐn)慎，有耐心的飼養(yǎng)員作為采精員，兩人一組，每組負(fù)責(zé)6頭種公牛的馴化及采精。

1.2 牦牛訓(xùn)練 采精牛訓(xùn)練的主要目的是為避免牦牛發(fā)生應(yīng)激導(dǎo)致無(wú)法采精，甚至攻擊采精人員造成人員受傷。馴化主要包括兩個(gè)階段：消除警惕階段和建立親密關(guān)系階段。

1.2.1 消除警惕階段 采精人員每天早晚定時(shí)定點(diǎn)，到牛舍進(jìn)入采精種公牛視線，前期僅小幅度活動(dòng)，讓牦牛適應(yīng)采精員的存在。后期逐步增大活動(dòng)幅度及頻率，逐步縮小牦牛與采精員接近的極限距離直至采精員可觸摸牦牛為止。期間發(fā)現(xiàn)警惕性極高無(wú)法接近的牦牛應(yīng)及時(shí)淘汰。

1.2.2 建立親密關(guān)系階段 采精員手盛食鹽誘導(dǎo)公牛舔舐，舔舐中觸摸牦牛額頭，注意避開(kāi)眼睛鼻子等敏感部位，每日2～3次。這一步驟的目的是為讓牦牛適應(yīng)采精員進(jìn)行直接身體接觸。待牦牛完全適應(yīng)觸摸后，逐步減少食鹽的使用，增加觸摸力度與范圍，確保實(shí)際碰觸到牦牛肌肉，使肌肉適度受壓。觸摸需從低敏感部位向高敏感部位緩慢過(guò)渡，順序應(yīng)為頭、角、耳、頸、背、睪丸、陰莖。淘汰有反抗甚至攻擊行為的牦牛淘汰。

1.3 牦牛飼養(yǎng) 牦牛訓(xùn)練通常持續(xù)半年左右，且牦牛暖季發(fā)情，因此必須在前一年冷季完成選牛工作，所選牛只要經(jīng)歷冷季到暖季的疾病高發(fā)期，因此要做好冷季補(bǔ)飼及暖季驅(qū)蟲(chóng)、防疫工作。

2 鮮精采集

牦牛以天然草場(chǎng)放牧為主，采精工作通常選擇在6～9月開(kāi)展。

2.1 采精前的準(zhǔn)備

2.1.1 環(huán)境 選擇地面平整、干凈無(wú)風(fēng)的草場(chǎng)或圈舍作為采精點(diǎn)。采精前清掃地面，安裝保定架、實(shí)驗(yàn)臺(tái)。

2.1.2 人員 每次采精至少需要采精員2 人、記錄員1人、助手4～6人。采精員負(fù)責(zé)輪流采精及鮮精現(xiàn)場(chǎng)保存稀釋，記錄員負(fù)責(zé)記錄采精牦牛個(gè)體信息、精液信息，助手負(fù)責(zé)驅(qū)趕、牽引及保定臺(tái)牛和采精牛，一旦牦牛出現(xiàn)攻擊行為，助手負(fù)責(zé)引導(dǎo)驅(qū)趕牦牛。采精員須雙手消毒并戴一次性醫(yī)用橡膠手套，助手須穿戴工作服及線手套。

2.1.3 臺(tái)牛 檢查臺(tái)牛發(fā)情狀況，可提前72 h 注射孕馬血清進(jìn)行發(fā)情控制。發(fā)情狀況良好的臺(tái)牛通過(guò)角樁法保定，清洗并消毒臺(tái)牛后軀，重點(diǎn)為肛門、會(huì)陰、尾根。

2.1.4 采精器械、用具及藥品 采精器械及用具主要有：特制牦牛用假陰道、假陰道遮光布套、集精杯、錐形瓶、量筒、水浴鍋、溫度計(jì)、保鮮膜、記號(hào)筆、一次性醫(yī)用橡膠手套等。

藥品：75%酒精、凡士林、0.1%高錳酸鉀溶液。

集精杯、錐形瓶、量筒使用前高溫干燥消毒，溫度計(jì)要清洗干燥并用紫外線消毒。假陰道內(nèi)壁溫度和壓力的掌握也是能否順利采精的關(guān)鍵，假陰道使用前用75%的酒精做內(nèi)外消毒，調(diào)節(jié)內(nèi)壁壓力至與臺(tái)牛陰道內(nèi)壁壓力接近，預(yù)熱至42～45 ℃，使用后拆卸清洗并用雙蒸水浸泡30 min后晾干。

2.1.5 采精牛 保定采精種公牛，其清潔消毒體表。清洗公牛下腹部，清理包皮腔內(nèi)積尿和其他殘留物，用0.1%高錳酸鉀溶液洗凈其包皮并擦干。

2.2 鮮精采集 牦牛采精是通過(guò)在公牦牛進(jìn)行爬跨行為時(shí)用特制假陰道代替臺(tái)牛陰道進(jìn)行精液采集。采精時(shí)采精員須在采精種公牛爬跨時(shí)，迅速準(zhǔn)確溫柔地將陰莖導(dǎo)入假陰道內(nèi)采精，手持假陰道保持適宜位置至采精種公牛射精。uuvb在采集到精液的集精杯上做好牛號(hào)標(biāo)記。

3 原精的稀釋及運(yùn)輸

3.1 精液品質(zhì)的檢查 對(duì)采集的新鮮精液現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行精液計(jì)量和質(zhì)量檢查。記錄牛號(hào)、原精量、活力、顏色及性狀信息。氣味異常、帶膿液或血的精液廢棄。

3.2 精液稀釋 通過(guò)目測(cè)法判定精液的活力和密度，活力在0.5以上的精液根據(jù)密度進(jìn)行5～10倍稀釋。稀釋液須現(xiàn)配現(xiàn)用，將法國(guó)Optidyl稀釋原液用雙蒸水以1∶2.5 比例配置成稀釋液，配置時(shí)須將稀釋原液和雙蒸水預(yù)熱至34 ℃，并在34 ℃環(huán)境下恒溫配置并保存。稀釋時(shí)使用一次性無(wú)菌帶蓋白色儲(chǔ)存容器，標(biāo)記好牛號(hào)，在34 ℃恒溫條件下稀釋后，放置陰涼避光處自然冷卻至室溫。

3.3 運(yùn)輸 長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)輸必須要保證稀釋液有足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供精子代謝所需，避免精液活力降低。稀釋冷卻后的精液，立即用棉布包裹避光并放入車載冰箱恒溫運(yùn)輸，運(yùn)輸過(guò)程不超過(guò)10 h。

4 精液二次稀釋、分裝和冷凍

4.1 二次稀釋 運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室的精液經(jīng)過(guò)顯微鏡檢測(cè)后，根據(jù)活力和密度進(jìn)行二次稀釋，將活力在0.5以上的精液進(jìn)行分裝和冷凍。

4.2 精液分裝 使用Is4四頭一體精液灌裝機(jī)進(jìn)行分裝。分裝前，提前3 h將細(xì)管放入4 ℃平衡柜進(jìn)行降溫。分裝時(shí)，注意不同牛號(hào)的精液避免混裝。

4.3 精液的平衡 分裝好的精液細(xì)管需均勻平鋪在特制的冷凍架上，量大時(shí)將冷凍架進(jìn)行疊放，放入4 ℃平衡柜進(jìn)行緩慢降溫，降溫過(guò)程需要2.5 h。平衡過(guò)程中應(yīng)做好電源供應(yīng)，切忌斷電造成精液溫度回升。

4.4 冷凍 平衡結(jié)束后迅速將放有精液細(xì)管的冷凍架移入法國(guó)IMV 冷凍儀進(jìn)行冷凍。冷凍時(shí)間為20 min。冷凍完成后，將精液細(xì)管快速裝入棉布袋，貼上記錄精液牛號(hào)及數(shù)量的標(biāo)簽，直接放置在-196 ℃液氮中。

4.5 冷凍精液品質(zhì)檢查 冷凍后的精液需在37 ℃水浴鍋中解凍后進(jìn)行活力檢查，將活力在0.35以下的冷凍精液廢棄。