孫晨明，徐亞亞，高清清，袁華根

（1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇 泰州 225300；2.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009）

亞甲基水楊酸桿菌肽預(yù)混劑為多肽類(lèi)抗生素中的一種，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌如金黃色葡萄球菌、魏氏梭菌、鏈球菌、腸球菌有抑制作用，可以促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高飼料利用率，預(yù)防和控制由梭菌或其他敏感菌引起的或并發(fā)的壞死性腸炎，可與其他藥物聯(lián)合使用。美國(guó)FDA 批準(zhǔn)的亞甲基水楊酸桿菌肽適應(yīng)癥包括提高增重率和飼料效率、提高蛋雞產(chǎn)蛋量、防治雞壞死性腸炎、治療火雞傳染性腸炎、預(yù)防鵪鶉潰瘍性腸炎和預(yù)防豬痢疾等[1]。藥效學(xué)試驗(yàn)表明，國(guó)產(chǎn)亞甲基水楊酸桿菌肽預(yù)混劑按55 mg∕kg·d混飼給藥，連用42 d，能有效治療產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的雞壞死性腸炎。本次試驗(yàn)旨在評(píng)價(jià)亞甲基水楊酸桿菌肽預(yù)混劑對(duì)靶動(dòng)物雞的安全性，以期為其在雞的臨床用藥中提供依據(jù)。

1 材料

1.1 供試藥品 亞甲基水楊酸桿菌肽預(yù)混劑（規(guī)格10%，以桿菌肽計(jì)），批號(hào)L091001，福建某生化有限公司提供。

1.2 儀器與試劑 主要儀器有血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、生物顯微鏡、手撳式計(jì)數(shù)器、OLYMPUS Au2700 全自動(dòng)生化分析儀、載玻片、離心管、一次性注射器、離心機(jī)等。主要試劑有磷酸鹽緩沖液、冰醋酸、瑞士染液、結(jié)晶紫染液、蒸餾水、生理鹽水、中性紅染液，以及用于血液生化測(cè)試分析的相關(guān)試劑等。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 1 日齡雜交黃羽肉雞100 只，由中國(guó)家禽研究所提供。育雛期及試驗(yàn)期間，采用油汀和白熾燈保溫。

1.4 試驗(yàn)動(dòng)物入選和剔除標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 入選標(biāo)準(zhǔn) 用于靶動(dòng)物安全性試驗(yàn)的雞在試驗(yàn)前一天須經(jīng)獸醫(yī)人員檢查，并確認(rèn)處于良好的健康狀況。

1.4.2 剔除標(biāo)準(zhǔn) 有下列狀況的雞應(yīng)從試驗(yàn)中剔除：適應(yīng)期內(nèi)瀕死的雞；適應(yīng)期內(nèi)生病或受傷的雞。

1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 正式試驗(yàn)時(shí)從約100只8日齡雛雞中選擇80只健康雛雞，然后按體重進(jìn)行均衡隨機(jī)分組，使每組雞的體重盡可能一致。試驗(yàn)雞共分為4組，每組20只。采用翅號(hào)和籠號(hào)進(jìn)行標(biāo)記識(shí)別。

根據(jù)生產(chǎn)廠家擬推薦的臨床給藥劑量，各試驗(yàn)組分別按最大推薦劑量的倍數(shù)——0（空白對(duì)照）、1、3、5倍給藥（見(jiàn)表1）。

表1 試驗(yàn)雞分組與給藥

試驗(yàn)雞由專(zhuān)人飼養(yǎng)，飼料使用的是中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院中國(guó)家禽研究所飼料廠特制的不含任何抗菌藥物的全價(jià)日糧。試驗(yàn)前將藥物按預(yù)先擬定的給藥劑量，采用逐級(jí)稀釋法將受試藥物與飼料混勻飼喂。每天定時(shí)喂料，雞只自由飲食，定期記錄每組雞的采食量。

2 試驗(yàn)方法

2.1 臨床觀察 試驗(yàn)雞每天由飼養(yǎng)人員嚴(yán)密監(jiān)控，觀察和記錄雞對(duì)藥物有毒劑量產(chǎn)生的反應(yīng)情況。記錄的項(xiàng)目如下：與藥物有關(guān)的發(fā)病率和死亡率，其他可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)；分別于試驗(yàn)前、試驗(yàn)中期（0～21 d）和試驗(yàn)結(jié)束（21～42 d）各測(cè)定一次試驗(yàn)雞的體重和各階段的飼料消耗量，據(jù)此計(jì)算每組雞在各階段的平均增重和飼料利用率等。

2.2 眼觀病理學(xué)檢查 對(duì)試驗(yàn)中所有死亡雞進(jìn)行剖檢。對(duì)于與藥物毒性、疾病或其他原因有關(guān)的死亡，通過(guò)可接受的診斷技術(shù)加以確認(rèn)，并記錄死亡日期。對(duì)顯示疑似與藥物有關(guān)的眼觀損傷進(jìn)行組織學(xué)病理學(xué)檢查。

2.3 臨床病理學(xué)檢查 在試驗(yàn)中期（第21 d）每組隨機(jī)選擇10只雞分別采集血樣，進(jìn)行血常規(guī)和血液生化學(xué)檢查。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)（第42 d）對(duì)每組剩下的10 只雞也分別采集血樣進(jìn)行血常規(guī)和血液生化學(xué)檢查。血常規(guī)分析采用人工血細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)法，血液生化學(xué)檢測(cè)采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定[2]。

2.4 組織病理學(xué)檢查 試驗(yàn)中期（第21 d）從10只被采血樣的雞中隨機(jī)抽出5 只，逐只剖檢進(jìn)行眼觀病理學(xué)檢查。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，撲殺每組存活下來(lái)的雞進(jìn)行組織學(xué)檢查，收集下列組織并保存于10%福爾馬林溶液中：心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、胸腺、腎上腺、法氏囊、胰腺、甲狀腺、氣管、睪丸、卵巢、食管、嗉囔、肌胃、腸（上段、中段和盲腸）。

對(duì)下列組織進(jìn)行常規(guī)檢查：肝臟、腎臟、法氏囊、脾臟、胸腺、卵巢和睪丸。根據(jù)出現(xiàn)的毒性情況決定是否對(duì)其他組織作進(jìn)一步檢查[3]。

所有剖檢動(dòng)物的臟器組織均被固定（如10%福爾馬林溶液）和保存起來(lái)。根據(jù)臨床觀察、血液學(xué)和血液生化學(xué)檢測(cè)的數(shù)據(jù)結(jié)果，結(jié)合該藥的作用特點(diǎn)，僅對(duì)肉眼觀察到受影響的器官和可疑靶器官進(jìn)行組織病理學(xué)檢查（包括制作組織病理切片和顯微觀察）。

如果與不給藥的對(duì)照組相比，來(lái)自較高推薦劑量試驗(yàn)組的雞組織未出現(xiàn)與藥物相關(guān)的組織病理學(xué)變化，則較低濃度劑量組的雞組織就不再進(jìn)行組織學(xué)檢查。

2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的顯著性檢驗(yàn)[4]。采用t檢驗(yàn)比較試驗(yàn)組與對(duì)照組在平均增重、料肉比（飼料利用率）、血液學(xué)和血液生化學(xué)指標(biāo)等方面的顯著性差異。

3 結(jié)果與分析

3.1 一般臨床觀察 整個(gè)試驗(yàn)期間，對(duì)照組和各劑量組中所有試驗(yàn)雞的健康狀況良好，飲水和采食均正常，未觀察到任何臨床癥狀，各組雞均未出現(xiàn)死亡。

3.2 增重與飼料利用率 各組雞各階段的平均增重及飼料利用率分別見(jiàn)表2～表5。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，試驗(yàn)組雞連續(xù)給藥至第21 d（0～21 d）時(shí)，各用藥組與對(duì)照組的平均增重均無(wú)顯著差異（P＞0.05）；但至試驗(yàn)結(jié)束時(shí)（21～42d），3 倍和5倍推薦劑量組的平均增重與對(duì)照組相比卻有顯著或極顯著性差異，增重明顯（P＜0.05或0.01）。

表2 試驗(yàn)中期各組雞的平均增重（，n＝20） g

表2 試驗(yàn)中期各組雞的平均增重（，n＝20） g

表3 試驗(yàn)中期各組雞的料肉比（n＝20） g

表4 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組雞的平均增重（，n＝10） g

表4 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組雞的平均增重（，n＝10） g

注：肩標(biāo)a 表示與對(duì)照組比較差異顯著，肩標(biāo)b 表示與對(duì)照組比較差異極顯著；下同

表5 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組雞的料肉比（n＝10） g

與對(duì)照組相比，各用藥組的料肉比均下降，飼料利用率增加，且隨著劑量增加，料肉比呈明顯下降的趨勢(shì)。表明亞甲基水楊酸桿菌肽預(yù)混劑在一定劑量范圍內(nèi)，隨著給藥劑量的增加，其改善飼料利用率的效果越明顯。

3.3 血液學(xué)參數(shù) 試驗(yàn)中期和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)每組抽檢的10 只雞的血液學(xué)檢測(cè)結(jié)果分別見(jiàn)表6 和表7。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，試驗(yàn)結(jié)束后各劑量組與對(duì)照組間均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表6 試驗(yàn)中期各組雞的血液學(xué)指標(biāo)（，n＝10）

表6 試驗(yàn)中期各組雞的血液學(xué)指標(biāo)（，n＝10）

表7 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組雞的血液學(xué)指標(biāo)（，n＝10）

表7 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組雞的血液學(xué)指標(biāo)（，n＝10）

3.4 血液生化學(xué)參數(shù) 試驗(yàn)中期、試驗(yàn)結(jié)束時(shí)每組抽檢的10 只雞的血液生化學(xué)檢測(cè)結(jié)果分別見(jiàn)表8和表9。

3.5 病理學(xué)檢查 試驗(yàn)中期（給藥后第21 d）隨機(jī)選出5 只雞，經(jīng)剖檢和眼觀病理學(xué)檢查，未發(fā)現(xiàn)有明顯眼觀病理學(xué)變化。試驗(yàn)結(jié)束后將5倍、3倍推薦劑量組和對(duì)照組的雞全部撲殺剖檢，眼觀檢查結(jié)果顯示：5 倍劑量組中有2只雞出現(xiàn)輕度脂肪肝，對(duì)照組中有1 只雞出現(xiàn)輕度脂肪肝，而3 倍推薦劑量組的肝臟均正常；未發(fā)現(xiàn)其他明顯的眼觀病理學(xué)變化。組織病理學(xué)切片HE染色鏡檢結(jié)果亦顯示：3倍和5倍推薦劑量組雞的肝、脾、腎和肺均未發(fā)現(xiàn)明顯的顯微病變。

表8 試驗(yàn)中期各組雞的血液生化指標(biāo)（，n＝10）

表8 試驗(yàn)中期各組雞的血液生化指標(biāo)（，n＝10）

表9 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組雞的血液生化指標(biāo)（，n＝10）

表9 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組雞的血液生化指標(biāo)（，n＝10）

4 討論與結(jié)論

FDA 資料顯示，分別給小雞和產(chǎn)蛋雞飼喂1 100 mg∕kg亞甲基水楊酸桿菌肽8周和5個(gè)月，在雞組織、蛋清和蛋黃中均未檢出桿菌肽殘留。加之桿菌肽口服不吸收，在雞的可食性組織中也無(wú)殘留，所以對(duì)于家禽養(yǎng)殖生產(chǎn)具有很好的安全性[5]。本試驗(yàn)所采集的數(shù)據(jù)包括體重、健康狀況、食欲情況以及血液學(xué)、生化學(xué)等參數(shù)，與對(duì)照組相比，1倍、3倍和5倍推薦劑量組的試驗(yàn)雞在健康狀況、食欲情況以及血液學(xué)參數(shù)等方面無(wú)顯著性差異。用亞甲基水楊酸桿菌肽預(yù)混劑連續(xù)飼喂42 d，雖然尿素氮指標(biāo)略有上升，但與對(duì)照組相比差異并不顯著。另外，1 倍和3 倍推薦劑量組中極個(gè)別血液生化參數(shù)（如白球比值、葡萄糖和氯的含量）與對(duì)照組相比差異顯著，但無(wú)劑量相關(guān)性。各試驗(yàn)組之間血液學(xué)和血液生化參數(shù)無(wú)顯著性差異；各用藥組與對(duì)照組相比，增重得到了明顯改善，飼料利用率增加。

綜上所述，亞甲基水楊酸桿菌肽預(yù)混劑以推薦劑量給靶動(dòng)物雞連續(xù)給藥42 d，具有較好的安全性。