茅為 趙海濤 丁盛 王兵

摘 要 目的：篩選富馬酸酮替芬片的處方，制備與參比制劑具有相同質(zhì)量及生物利用度的自制片。方法：以溶出曲線評(píng)價(jià)結(jié)果，篩選原料藥粒徑和各輔料用量并考察原輔料混合方式和制粒時(shí)間等工藝參數(shù)。結(jié)果：確定富馬酸酮替芬原料藥及各輔料的用量，采用“一鍋法”進(jìn)行原輔料混合，3批采用驗(yàn)證工藝生產(chǎn)的富馬酸酮替芬自制片與參比制劑質(zhì)量相近且生物等效。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)篩選的處方和工藝能保證自制片質(zhì)量與參比制劑一致。

關(guān)鍵詞 富馬酸酮替芬片 處方篩選 工藝研究 生物等效

中圖分類號(hào)：R976； R944.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2020）17-0059-06

Study on the formulation and process of ketotifen fumarate tablet and its human bioequivalence

MAO Wei*， ZHAO Haitiao， DING Sheng**， WANG Bing

（Changzhou Pharmaceutical Factory Co.， Ltd.， Jiangsu Changzhou 213000， China）

ABSTRACT Objective： To study the formulation of ketotifen fumarate tablets in order to prepare home-made tablets having the similar bioequivalence to the reference preparation. Methods： The amount of active pharmaceutical ingredient and all excipients was screened out based on the in vitro dissolution behavior， and the effects of process parameters such as raw material and auxiliary material mixing methods and granulation time were also investigated. Results： The amount of active pharmaceutical ingredient and each excipient was determined. Three batches of ketotifen fumarate home-made tablets produced by the verification process had similar quality and bioequivalent to the reference preparation when raw materials and excipients were mixed by one-pot blend method. Conclusion： The formulation and process selected in this study can ensure that the quality of home-made tablets is consistent with the reference preparation.

KEy WORDS ketotifen fumarate tablets； prescription screen； process research； bioequivalence

富馬酸酮替芬片是新型抗變態(tài)反應(yīng)藥物，能有效抑制過(guò)敏反應(yīng)介質(zhì)，同時(shí)具有組胺H1受體拮抗作用和抑制過(guò)敏反應(yīng)介質(zhì)釋放作用抗過(guò)敏作用較強(qiáng)，且藥效持久，臨床上主要用于治療變異性咳嗽、變異性支氣管哮喘和慢性蕁麻疹等疾病[1-3]。在我國(guó)患過(guò)敏性鼻炎和過(guò)敏性支氣管哮喘人數(shù)眾多，且患者多為嬰幼兒。因此需盡快完成該品種的質(zhì)量一致性研究，提升藥物的質(zhì)量。

本研究以溶出曲線為考察指標(biāo)，對(duì)原料藥粒徑、輔料種類和用量、混合和制粒工藝進(jìn)行研究，最終確定本品處方組成和生產(chǎn)工藝。按照確定的處方和生產(chǎn)工藝制備的自制片與參比制劑生物等效。

1 材料和方法

1.1 儀器

Waters e2695-2489型高效液相色譜儀和X-bridge C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 mm）均購(gòu)自美國(guó)Waters公司；708DS溶出儀（美國(guó)Agilent公司）；MS105型電子天平和MJ33型水分測(cè)定儀（瑞士Mettler-Toledo公司）；DRAL10型和DRAL400型高速混合攪拌制粒機(jī)（比利時(shí)Collette公司）；FLZB-1.5型、FLZB-150型旋轉(zhuǎn)整粒機(jī)和HAD-50型多向運(yùn)動(dòng)混合機(jī)（浙江小倫制藥機(jī)械有限公司）；HAD-200型多向運(yùn)動(dòng)混合機(jī)（迦南科技有限公司）；FLG-1.5型和FLG-120型高效沸騰干燥器（創(chuàng)志機(jī)電科技發(fā)展（上海）有限公司）；ZP19/2型旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)（北京新龍立科技有限公司）；P2020型壓片機(jī)（菲特中國(guó)制藥科技有限公司）；YD-35型片劑硬度儀（天津天大天發(fā)科技有限公司）。

1.2 試藥

富馬酸酮替芬原料藥（批號(hào)：5504-17-001M，浙江華海藥業(yè)股份有限公司）；富馬酸酮替芬對(duì)照品（批號(hào)：100230-201703，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；富馬酸酮替芬片原研藥（批號(hào)：Y0198，諾華制藥）；淀粉（批號(hào)：170909，曲阜市天利藥用輔料有限公司）；乳糖（批號(hào)：L101850217A54500，德國(guó)Meggle公司）；微晶纖維素（批號(hào)：170608A，曲阜市天利藥用輔料有限公司）；聚維酮K30（批號(hào)：0002140566，美國(guó)ISP公司）；交聯(lián)聚維酮（批號(hào)：0001734520，美國(guó)ISP公司）；硬脂酸鎂（批號(hào)：161129，浙江中維藥業(yè)股份有限公司）；其他化學(xué)試劑均為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；水為純化水。

1.3 方法

1.3.1 溶出實(shí)驗(yàn)方法

取本品，采用中國(guó)藥典2015年版四部通則0931第二法進(jìn)行溶出實(shí)驗(yàn)，pH 1.2、pH 4.5、pH 6.8溶液和水為介質(zhì)，介質(zhì)體積900 ml，溫度為（37±0.5）℃，轉(zhuǎn)速為50 r/min，取樣時(shí)間為5、10、15、20、30 min。

1.3.2 測(cè)定方法

性狀、鑒別、溶出度、含量、有關(guān)物質(zhì)、含量均勻度參照日本醫(yī)療用藥品品質(zhì)情報(bào)集富馬酸酮替芬膠囊溶出曲線檢測(cè)方法[4]和2015版中國(guó)藥典檢測(cè)方法[5]進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.3 原料藥粒徑研究

原料藥粒徑影響產(chǎn)品的溶出速度[6-7]。為確定原料藥粒徑分布，使用機(jī)械粉碎方式獲得粒徑d0.9=103 mm，d0.9=75 mm，d0.9=50 mm及d0.9=30 mm的原料藥，并與其他輔料混合20、30、40 min，于不同時(shí)間點(diǎn)取樣10份檢測(cè)含量，并計(jì)算含量均值和RSD值。

1.3.4 原輔料相容性研究

按照1∶5的比例將原料藥分別與淀粉、乳糖、微晶纖維素、聚維酮K30混合，按照20∶1的比例將原料藥與硬脂酸鎂混合?；旌戏鄯胖糜?0 ℃、相對(duì)濕度（RH）75%或92.5%及LX 4500±500條件下進(jìn)行穩(wěn)定性考察。

1.3.5 處方研究

1）含不同量填充劑 確保片重為125 mg/片和其他輔料用量相同，調(diào)整處方中乳糖、微晶纖維素和淀粉的用量組成不同的處方，將不同處方組成的物料經(jīng)混合、制粒、干燥，總混，壓片得成品，考察溶出。填充劑用量篩選實(shí)驗(yàn)處方組成見(jiàn)表1。

2）含不同量聚維酮K30 設(shè)定處方中聚維酮K30量分別為3、4和5 mg/片，通過(guò)調(diào)整處方中淀粉用量保持片重相同。物料經(jīng)混合、制粒、干燥、總混、壓片得樣品。

3）含不同量硬脂酸鎂 其加入量過(guò)少易出現(xiàn)壓片粘沖的現(xiàn)象；而加入量過(guò)高則將影響產(chǎn)品的溶出速度[8-9]。取若干份富馬酸酮替芬顆粒，分別加入硬脂酸鎂0.625、1.25、1.875和2.50 mg/片，再經(jīng)混合、壓片得樣品。

1.3.6 工藝研究

1）原輔料混合方式研究 為保證原輔料混合均勻，選擇“等量遞增”和“一鍋法”兩種混合方法進(jìn)行原輔料混合（表2），并于混合15、20、30、40 min后取樣10份檢測(cè)含量，并計(jì)算含量均值和RSD值。

2）制粒時(shí)間研究 濕法制粒時(shí)間對(duì)制粒效果具有較大的影響[10-11]，本研究在相同的攪拌刀轉(zhuǎn)速和制粒刀轉(zhuǎn)速均為1速的條件下，對(duì)濕法制粒時(shí)間（3、5、7 min）進(jìn)行了考察。

1.3.7 生物等效性實(shí)驗(yàn)

采用雙周期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)法進(jìn)行空腹給藥實(shí)驗(yàn)和餐后給藥實(shí)驗(yàn)，48名受試者隨機(jī)分別為兩組，每組24人，其中男性和女性健康志愿者兼?zhèn)洹?/p>

1）空腹給藥實(shí)驗(yàn) 志愿者在試驗(yàn)前1天20時(shí)后禁食，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天早上8時(shí)空腹用溫開(kāi)水240 ml送服給藥，A組服用參比制劑1片，B組服用受試制劑1片，服藥3 h和6 h后統(tǒng)一進(jìn)食。分別在服藥前和服藥后0.33、0.67、1、1.33、1.67、2、2.33、2.67、3、3.33、3.67、4、4.33、4.67、5、5.5、6、8、10、12、16、24、36、48、72 h采血，置于肝素化試管中抗凝、離心后將上層血漿于-20 ℃保存，采用HPLC-MS進(jìn)行檢測(cè)。間隔1周后進(jìn)行交叉實(shí)驗(yàn)。

2）餐后給藥實(shí)驗(yàn) 志愿者試驗(yàn)前1天20時(shí)后禁食，試驗(yàn)當(dāng)天統(tǒng)一進(jìn)食高脂餐，進(jìn)食結(jié)束后0.5 h，A組服用受試制劑1片，B組服用參比制劑1片，同上取0～72 h時(shí)間段血樣；間隔1周后進(jìn)行交叉實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 原料藥粒徑

以不同粒徑分布的原料藥進(jìn)行混合實(shí)驗(yàn)， d0.9≤75 mm的原料藥與輔料混合20 min后含量均接近100%且 RSD值較小，說(shuō)明原輔料混合均勻（表3）。

2.2 原輔料相容性

結(jié)果表明，淀粉、乳糖、微晶纖維素、聚維酮K30及硬脂酸鎂與原料藥相容性良好（表4），上述物料可用于本品處方開(kāi)發(fā)。

2.3 填充劑用量

使用不同用量淀粉、乳糖和微晶纖維素制備的樣品溶出有所差異（圖2）。從溶出曲線可知，處方3溶出曲線與參比制劑溶出曲線最相近，由此說(shuō)明處方3的處方組成與參比制劑最為相似，故認(rèn)為處方3為最優(yōu)處方，并由此確定本品每片含淀粉25.04 mg，乳糖34.10 mg，微晶纖維素60.23 mg。

2.4 粘合劑用量

處方中聚維酮K30的用量增加對(duì)顆粒的壓縮度無(wú)明顯差異（表5），但樣品的溶出卻隨著聚維酮用量的增加而減慢（圖3）。當(dāng)聚維酮K30用量為3 mg/片時(shí)，樣品溶出速度與參比制劑最為相近，故最終確定本品處方中聚維酮K30用量為3 mg/片。

2.5 硬脂酸鎂用量

從溶出實(shí)驗(yàn)可知，處方中硬脂酸鎂用量為0.625 mg/片時(shí)樣品的溶出速度較參比制劑快，用量為1.875及2.50 mg/片時(shí)樣品的溶出速度較參比制劑慢，用量為1.25 mg/片時(shí)產(chǎn)品的溶出速度與參比最相似。因此確定本品中硬脂酸鎂用量為1.25 mg/片。

綜上，確定每片富馬酸酮替芬片中含酮替芬1 mg，淀粉25.04 mg，乳糖34.10 mg，微晶纖維素60.23 mg，聚維酮K30 3 mg，硬脂酸鎂1.25 mg。

2.6 原輔料混合方式

使用“等量遞增法”和“一鍋法”這兩種混合方式混合，混合粉平均含量在可接受的范圍內(nèi)且RSD值≤5%（表6），由此說(shuō)明 “等量遞增”和“一鍋法”均能保證原輔料混合均勻。但是“等量遞增”操作步驟復(fù)雜，故選用“一鍋法”進(jìn)行原輔料混合，混合時(shí)間20 min。

2.7 濕法制粒時(shí)間

不同的制粒時(shí)間對(duì)顆粒的粒徑分布影響如圖5所示。制粒時(shí)間3 min，物料中大顆粒較多細(xì)粉較少；制粒時(shí)間7 min，物料中大顆粒較少且細(xì)粉明顯增加。三組實(shí)驗(yàn)中，制粒時(shí)間5 min制備的物料顆粒分布較均勻，因此確定本品生產(chǎn)過(guò)程制粒時(shí)間為5 min。

2.8 工藝驗(yàn)證

按照制定的處方組合和生產(chǎn)工藝，進(jìn)行了三批富馬酸酮替芬片（145萬(wàn)片/批）工藝驗(yàn)證，工藝驗(yàn)證結(jié)果符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。三批工藝驗(yàn)證產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果及溶出曲線見(jiàn)表7和圖6。

2.9 人體生物等效性

受試制劑YZ18011511和參比制劑Y0198的Cmax，AUC0→t和AUC0→∞的幾何均值比值及其90%置信區(qū)間均在80%～125%范圍內(nèi)。因此，本試驗(yàn)受試制劑和參比制劑在空腹和餐后條件下均為生物等效。

3 討論

溶出曲線研究最根本的目的就是觀察仿制制劑與參比制劑之間是否存在差異，并以此為監(jiān)測(cè)手段，盡量?jī)?yōu)化處方，確保受試制劑與參比制劑的溶出行為一致。具有區(qū)分力的溶出曲線，能夠預(yù)測(cè)藥物在體內(nèi)的吸收情況，找出藥物體內(nèi)體外測(cè)試結(jié)果的相關(guān)性，從而提高仿制藥臨床實(shí)驗(yàn)成功的幾率。

本研究以參比制劑的溶出曲線作為評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)影響產(chǎn)品質(zhì)量性質(zhì)的原料藥粒徑、輔料種類及用量等進(jìn)行研究，通過(guò)處方篩選和工藝參數(shù)研究，開(kāi)發(fā)了一種與原研制劑具有相同人體生物利用度的富馬酸酮替芬片。本研究用實(shí)例證明了溶出曲線對(duì)片劑仿制藥開(kāi)發(fā)的重要性。

按本研究建立的較優(yōu)生產(chǎn)工藝制備的三批自制片的溶出速度較參比制劑稍快，可能是由于在本品處方中加入了微晶纖維素、淀粉這兩種具崩解性能的填充劑，使得自制品能迅速崩解從而溶出速度稍快于參比制劑。

本研究雖對(duì)生產(chǎn)工藝進(jìn)行了研究，但尚未對(duì)可能影響產(chǎn)品質(zhì)量的工藝如干燥溫度、干燥時(shí)間、壓片壓力等參數(shù)進(jìn)行研究，后續(xù)可考慮從事這些參數(shù)的研究，以便進(jìn)一步提高本品的質(zhì)量。

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