茅為 趙海濤 丁盛 王兵

摘 要 目的：篩選富馬酸酮替芬片的處方，制備與參比制劑具有相同質量及生物利用度的自制片。方法：以溶出曲線評價結果，篩選原料藥粒徑和各輔料用量并考察原輔料混合方式和制粒時間等工藝參數(shù)。結果：確定富馬酸酮替芬原料藥及各輔料的用量，采用“一鍋法”進行原輔料混合，3批采用驗證工藝生產的富馬酸酮替芬自制片與參比制劑質量相近且生物等效。結論：本實驗篩選的處方和工藝能保證自制片質量與參比制劑一致。

關鍵詞 富馬酸酮替芬片 處方篩選 工藝研究 生物等效

中圖分類號：R976； R944.4 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2020）17-0059-06

Study on the formulation and process of ketotifen fumarate tablet and its human bioequivalence

MAO Wei*， ZHAO Haitiao， DING Sheng**， WANG Bing

（Changzhou Pharmaceutical Factory Co.， Ltd.， Jiangsu Changzhou 213000， China）

ABSTRACT Objective： To study the formulation of ketotifen fumarate tablets in order to prepare home-made tablets having the similar bioequivalence to the reference preparation. Methods： The amount of active pharmaceutical ingredient and all excipients was screened out based on the in vitro dissolution behavior， and the effects of process parameters such as raw material and auxiliary material mixing methods and granulation time were also investigated. Results： The amount of active pharmaceutical ingredient and each excipient was determined. Three batches of ketotifen fumarate home-made tablets produced by the verification process had similar quality and bioequivalent to the reference preparation when raw materials and excipients were mixed by one-pot blend method. Conclusion： The formulation and process selected in this study can ensure that the quality of home-made tablets is consistent with the reference preparation.

KEy WORDS ketotifen fumarate tablets； prescription screen； process research； bioequivalence

富馬酸酮替芬片是新型抗變態(tài)反應藥物，能有效抑制過敏反應介質，同時具有組胺H1受體拮抗作用和抑制過敏反應介質釋放作用抗過敏作用較強，且藥效持久，臨床上主要用于治療變異性咳嗽、變異性支氣管哮喘和慢性蕁麻疹等疾病[1-3]。在我國患過敏性鼻炎和過敏性支氣管哮喘人數(shù)眾多，且患者多為嬰幼兒。因此需盡快完成該品種的質量一致性研究，提升藥物的質量。

本研究以溶出曲線為考察指標，對原料藥粒徑、輔料種類和用量、混合和制粒工藝進行研究，最終確定本品處方組成和生產工藝。按照確定的處方和生產工藝制備的自制片與參比制劑生物等效。

1 材料和方法

1.1 儀器

Waters e2695-2489型高效液相色譜儀和X-bridge C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 mm）均購自美國Waters公司；708DS溶出儀（美國Agilent公司）；MS105型電子天平和MJ33型水分測定儀（瑞士Mettler-Toledo公司）；DRAL10型和DRAL400型高速混合攪拌制粒機（比利時Collette公司）；FLZB-1.5型、FLZB-150型旋轉整粒機和HAD-50型多向運動混合機（浙江小倫制藥機械有限公司）；HAD-200型多向運動混合機（迦南科技有限公司）；FLG-1.5型和FLG-120型高效沸騰干燥器（創(chuàng)志機電科技發(fā)展（上海）有限公司）；ZP19/2型旋轉式壓片機（北京新龍立科技有限公司）；P2020型壓片機（菲特中國制藥科技有限公司）；YD-35型片劑硬度儀（天津天大天發(fā)科技有限公司）。

1.2 試藥

富馬酸酮替芬原料藥（批號：5504-17-001M，浙江華海藥業(yè)股份有限公司）；富馬酸酮替芬對照品（批號：100230-201703，中國食品藥品檢定研究院）；富馬酸酮替芬片原研藥（批號：Y0198，諾華制藥）；淀粉（批號：170909，曲阜市天利藥用輔料有限公司）；乳糖（批號：L101850217A54500，德國Meggle公司）；微晶纖維素（批號：170608A，曲阜市天利藥用輔料有限公司）；聚維酮K30（批號：0002140566，美國ISP公司）；交聯(lián)聚維酮（批號：0001734520，美國ISP公司）；硬脂酸鎂（批號：161129，浙江中維藥業(yè)股份有限公司）；其他化學試劑均為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）；水為純化水。

1.3 方法

1.3.1 溶出實驗方法

取本品，采用中國藥典2015年版四部通則0931第二法進行溶出實驗，pH 1.2、pH 4.5、pH 6.8溶液和水為介質，介質體積900 ml，溫度為（37±0.5）℃，轉速為50 r/min，取樣時間為5、10、15、20、30 min。

1.3.2 測定方法

性狀、鑒別、溶出度、含量、有關物質、含量均勻度參照日本醫(yī)療用藥品品質情報集富馬酸酮替芬膠囊溶出曲線檢測方法[4]和2015版中國藥典檢測方法[5]進行檢測。

1.3.3 原料藥粒徑研究

原料藥粒徑影響產品的溶出速度[6-7]。為確定原料藥粒徑分布，使用機械粉碎方式獲得粒徑d0.9=103 mm，d0.9=75 mm，d0.9=50 mm及d0.9=30 mm的原料藥，并與其他輔料混合20、30、40 min，于不同時間點取樣10份檢測含量，并計算含量均值和RSD值。

1.3.4 原輔料相容性研究

按照1∶5的比例將原料藥分別與淀粉、乳糖、微晶纖維素、聚維酮K30混合，按照20∶1的比例將原料藥與硬脂酸鎂混合?；旌戏鄯胖糜?0 ℃、相對濕度（RH）75%或92.5%及LX 4500±500條件下進行穩(wěn)定性考察。

1.3.5 處方研究

1）含不同量填充劑 確保片重為125 mg/片和其他輔料用量相同，調整處方中乳糖、微晶纖維素和淀粉的用量組成不同的處方，將不同處方組成的物料經(jīng)混合、制粒、干燥，總混，壓片得成品，考察溶出。填充劑用量篩選實驗處方組成見表1。

2）含不同量聚維酮K30 設定處方中聚維酮K30量分別為3、4和5 mg/片，通過調整處方中淀粉用量保持片重相同。物料經(jīng)混合、制粒、干燥、總混、壓片得樣品。

3）含不同量硬脂酸鎂 其加入量過少易出現(xiàn)壓片粘沖的現(xiàn)象；而加入量過高則將影響產品的溶出速度[8-9]。取若干份富馬酸酮替芬顆粒，分別加入硬脂酸鎂0.625、1.25、1.875和2.50 mg/片，再經(jīng)混合、壓片得樣品。

1.3.6 工藝研究

1）原輔料混合方式研究 為保證原輔料混合均勻，選擇“等量遞增”和“一鍋法”兩種混合方法進行原輔料混合（表2），并于混合15、20、30、40 min后取樣10份檢測含量，并計算含量均值和RSD值。

2）制粒時間研究 濕法制粒時間對制粒效果具有較大的影響[10-11]，本研究在相同的攪拌刀轉速和制粒刀轉速均為1速的條件下，對濕法制粒時間（3、5、7 min）進行了考察。

1.3.7 生物等效性實驗

采用雙周期交叉試驗設計法進行空腹給藥實驗和餐后給藥實驗，48名受試者隨機分別為兩組，每組24人，其中男性和女性健康志愿者兼?zhèn)洹?/p>

1）空腹給藥實驗 志愿者在試驗前1天20時后禁食，實驗當天早上8時空腹用溫開水240 ml送服給藥，A組服用參比制劑1片，B組服用受試制劑1片，服藥3 h和6 h后統(tǒng)一進食。分別在服藥前和服藥后0.33、0.67、1、1.33、1.67、2、2.33、2.67、3、3.33、3.67、4、4.33、4.67、5、5.5、6、8、10、12、16、24、36、48、72 h采血，置于肝素化試管中抗凝、離心后將上層血漿于-20 ℃保存，采用HPLC-MS進行檢測。間隔1周后進行交叉實驗。

2）餐后給藥實驗 志愿者試驗前1天20時后禁食，試驗當天統(tǒng)一進食高脂餐，進食結束后0.5 h，A組服用受試制劑1片，B組服用參比制劑1片，同上取0～72 h時間段血樣；間隔1周后進行交叉實驗。

2 結果

2.1 原料藥粒徑

以不同粒徑分布的原料藥進行混合實驗， d0.9≤75 mm的原料藥與輔料混合20 min后含量均接近100%且 RSD值較小，說明原輔料混合均勻（表3）。

2.2 原輔料相容性

結果表明，淀粉、乳糖、微晶纖維素、聚維酮K30及硬脂酸鎂與原料藥相容性良好（表4），上述物料可用于本品處方開發(fā)。

2.3 填充劑用量

使用不同用量淀粉、乳糖和微晶纖維素制備的樣品溶出有所差異（圖2）。從溶出曲線可知，處方3溶出曲線與參比制劑溶出曲線最相近，由此說明處方3的處方組成與參比制劑最為相似，故認為處方3為最優(yōu)處方，并由此確定本品每片含淀粉25.04 mg，乳糖34.10 mg，微晶纖維素60.23 mg。

2.4 粘合劑用量

處方中聚維酮K30的用量增加對顆粒的壓縮度無明顯差異（表5），但樣品的溶出卻隨著聚維酮用量的增加而減慢（圖3）。當聚維酮K30用量為3 mg/片時，樣品溶出速度與參比制劑最為相近，故最終確定本品處方中聚維酮K30用量為3 mg/片。

2.5 硬脂酸鎂用量

從溶出實驗可知，處方中硬脂酸鎂用量為0.625 mg/片時樣品的溶出速度較參比制劑快，用量為1.875及2.50 mg/片時樣品的溶出速度較參比制劑慢，用量為1.25 mg/片時產品的溶出速度與參比最相似。因此確定本品中硬脂酸鎂用量為1.25 mg/片。

綜上，確定每片富馬酸酮替芬片中含酮替芬1 mg，淀粉25.04 mg，乳糖34.10 mg，微晶纖維素60.23 mg，聚維酮K30 3 mg，硬脂酸鎂1.25 mg。

2.6 原輔料混合方式

使用“等量遞增法”和“一鍋法”這兩種混合方式混合，混合粉平均含量在可接受的范圍內且RSD值≤5%（表6），由此說明 “等量遞增”和“一鍋法”均能保證原輔料混合均勻。但是“等量遞增”操作步驟復雜，故選用“一鍋法”進行原輔料混合，混合時間20 min。

2.7 濕法制粒時間

不同的制粒時間對顆粒的粒徑分布影響如圖5所示。制粒時間3 min，物料中大顆粒較多細粉較少；制粒時間7 min，物料中大顆粒較少且細粉明顯增加。三組實驗中，制粒時間5 min制備的物料顆粒分布較均勻，因此確定本品生產過程制粒時間為5 min。

2.8 工藝驗證

按照制定的處方組合和生產工藝，進行了三批富馬酸酮替芬片（145萬片/批）工藝驗證，工藝驗證結果符合質量標準。三批工藝驗證產品檢測結果及溶出曲線見表7和圖6。

2.9 人體生物等效性

受試制劑YZ18011511和參比制劑Y0198的Cmax，AUC0→t和AUC0→∞的幾何均值比值及其90%置信區(qū)間均在80%～125%范圍內。因此，本試驗受試制劑和參比制劑在空腹和餐后條件下均為生物等效。

3 討論

溶出曲線研究最根本的目的就是觀察仿制制劑與參比制劑之間是否存在差異，并以此為監(jiān)測手段，盡量優(yōu)化處方，確保受試制劑與參比制劑的溶出行為一致。具有區(qū)分力的溶出曲線，能夠預測藥物在體內的吸收情況，找出藥物體內體外測試結果的相關性，從而提高仿制藥臨床實驗成功的幾率。

本研究以參比制劑的溶出曲線作為評判標準，對影響產品質量性質的原料藥粒徑、輔料種類及用量等進行研究，通過處方篩選和工藝參數(shù)研究，開發(fā)了一種與原研制劑具有相同人體生物利用度的富馬酸酮替芬片。本研究用實例證明了溶出曲線對片劑仿制藥開發(fā)的重要性。

按本研究建立的較優(yōu)生產工藝制備的三批自制片的溶出速度較參比制劑稍快，可能是由于在本品處方中加入了微晶纖維素、淀粉這兩種具崩解性能的填充劑，使得自制品能迅速崩解從而溶出速度稍快于參比制劑。

本研究雖對生產工藝進行了研究，但尚未對可能影響產品質量的工藝如干燥溫度、干燥時間、壓片壓力等參數(shù)進行研究，后續(xù)可考慮從事這些參數(shù)的研究，以便進一步提高本品的質量。

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