郭培培 黃志 秦曉威 陳思平 魚歡 宗迎 賀書珍

摘? 要：以香露兜（Pandanus amaryllifolius Roxb.）不同葉位葉片組織為材料，采用氣相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）技術(shù)對(duì)其揮發(fā)性成分進(jìn)行鑒定，揭示不同葉位揮發(fā)性成分組成變化規(guī)律。結(jié)果表明：香露兜8個(gè)不同葉位葉片揮發(fā)性成分由呋喃酮類、吡咯類、呋喃類等10類21種物質(zhì)組成，3-甲基-2（5H）-呋喃酮、新植二烯、2-乙酰-1-吡咯啉、葉綠醇、2，3-二氫苯并呋喃、2，4-二叔丁基酚、羥基丙酮、棕櫚酸乙酯和亞油酸乙酯9種共有物質(zhì)的含量均存在極顯著差異（P0.001）。其中，特征揮發(fā)性物質(zhì)2-乙酰-1-吡咯啉平均含量為（94.0036.66）μg/g，倒5葉位含量最高（122.99±3.48）μg/g，倒1至倒8葉位整體呈先升高后降低的變化趨勢(shì)。主成分分析結(jié)果表明，倒1葉位主要揮發(fā)性成分為3-甲基-2（5H）-呋喃酮、棕櫚酸乙酯和甲酸庚酯，倒2、3和4葉位主要揮發(fā)性成分為葉綠醇、2-丁基-1-辛醇、3-甲基-2（5H）-呋喃酮、2-乙酰-1-吡咯啉、2，3-二氫苯并呋喃、新植二烯、角鯊烯、棕櫚酸乙酯、亞油酸乙酯和2，4-二叔丁基酚，倒5葉位主要揮發(fā)性成分為2-乙酰-1-吡咯啉、2，3-二氫苯并呋喃和角鯊烯;倒6、7、8葉位主要揮發(fā)性成分為角鯊烯、新植二烯、2-乙酰-1-吡咯啉和羥基丙酮。香露兜不同葉位揮發(fā)性物質(zhì)組成及含量存在一定差異，將為其標(biāo)準(zhǔn)化采收提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：香露兜;葉位;揮發(fā)性成分;2-乙酰-1-吡咯啉

中圖分類號(hào)：R284.1? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Abstract： The difference of volatile components in different leaf position of Pandanus amaryllifolius Roxb. was identified by the gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS） method in order to understand the changes of volatile components in different leaf positions. The results showed that 21 components were detected in eight different leaf positions， which belonged to 10 chemical groups， such as furanones， pyrroles， furans， etc. The eight different leaf positions shared nine volatile components， and showed significant difference in the contents， such as 3-methyl-2（5H）- furanone， neophytadiene， 2-acetyl-1-pyrroline， phytol， coumaran， 2，4-di-tert-butylphenol， acetol， ethyl palmitate and ethyl linoleate （P<0.001）. The content of the main component 2-acetyl-1-pyrroline was （94.00±36.66）μg/g， which increased at first and then decreased from the 1st to 8th leaf position， and the highest content at the 5th leaf position （122.99±3.48）μg/g. Principal component analysis showed that the 1st leaf position was characterized by high contents of 3-methyl-2（5H）-furanone， ethyl palmitate and heptyl methanote. The 2nd， 3rd and 4th leaf position exhibited high content of phytol， 2-butyloctanol， 3-methyl-2（5H）-furanone， 2-acetyl-1-pyrroline， coumaran， neophytadiene， squalene， ethyl palmitate， ethyl linoleate， and 2，4-di-tert-butylphenol. The 5th leaf position has exhibited high contents of 2-acetyl-1-pyrroline， coumaran and squalene. The 6th， 7th and 8th leaf position were mainly composed of squalene， neophytadiene， 2-acetyl-1-pyrroline and acetol. The difference of the composition and content of volatiles in different leaf position of Pandanus amaryllifolius Roxb.， which would provide a basis for harvesting quality.

Keywords： Pandanus amaryllifolius Roxb.; leaf positions; volatile components; 2-acetyl-1-pyrroline

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2020.12.021

香露兜（Pandanus amaryllifolius Roxb.），又名斑蘭葉、香蘭葉，為露兜樹(shù)科（Pandanaceae）露兜樹(shù)屬（Pandanus）熱帶園藝作物[1]。其葉片的主要特征揮發(fā)性物質(zhì)為2-乙酰-1-吡咯啉（2-acetyl-1-pyrroline），能散發(fā)出一種特殊香氣——粽香[2]。同時(shí)，香露兜中富含角鯊烯（squalene）和葉綠醇（phytol）等活性成分，具有增強(qiáng)細(xì)胞活力、加快新陳代謝、提高人體免疫力的作用，廣泛應(yīng)用于食品和醫(yī)藥行業(yè)，市場(chǎng)潛力巨大[3-5]。香露兜主栽于斯里蘭卡、印度、新加坡、印度尼西亞、泰國(guó)、馬來(lái)西亞等南亞及東南亞國(guó)家，年產(chǎn)鮮葉約400 萬(wàn)t，其中東南亞占80%以上。我國(guó)香露兜為境外引進(jìn)作物，20世紀(jì)50年代由印度尼西亞引進(jìn)并試種成功[1]，主栽于海南、云南等地，已逐步發(fā)展成為熱帶特色農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)，開(kāi)發(fā)利用前景廣闊。

植物揮發(fā)性物質(zhì)作為一種“化學(xué)語(yǔ)言”，其合成與釋放決定著食用器官部位的風(fēng)味品質(zhì)特性。香露兜葉為單葉、頂生，排列成螺旋狀，是主要的食用器官[1]。相關(guān)研究表明，香露兜揮發(fā)性物質(zhì)主要由呋喃類、吡咯類、醇類、烯烴類、酯類等化合物組成[5-7]。Jiang等[7]采用二氯甲烷溶劑提取法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）鑒定出2-乙酰-1-吡咯啉、3-己醇（3-hexanol）、4-甲基-1-戊醇（4-methyl-1-pentanol）和3-甲基- 2-（5H）-呋喃酮[3-methyl-2-（5H）-furanone]等化合物是新加坡香露兜葉片中的關(guān)鍵揮發(fā)性物質(zhì)。其中，2-乙酰-1-吡咯啉的分子量為111.14，極易揮發(fā)，具有粽香風(fēng)味[8]，被列入中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2760—2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》。Wakte等[9]利用頂空固相微萃取-氣相色譜火焰離子化檢測(cè)器聯(lián)用（HS-SPME/GC-FID）技術(shù)鑒定出印度半島不同生態(tài)區(qū)域香露兜葉片揮發(fā)性成分19種，不同生態(tài)產(chǎn)區(qū)的2-乙酰-1-吡咯啉含量變異區(qū)間為6.25～ 12.25 mg/kg。此外，任竹君等[4]利用水蒸氣蒸餾法和GC-MS技術(shù)鑒定了海南香露兜葉片揮發(fā)性成分，發(fā)現(xiàn)香露兜含有角鯊烯、葉綠醇等活性成分，在食品加工和制藥等領(lǐng)域有重要的開(kāi)發(fā)價(jià)值。近年來(lái)，尹桂豪等[3]、陳小凱等[10]利用超臨界CO2萃取法研究香露兜葉揮發(fā)性成分，結(jié)果也表明香露兜含角鯊烯、葉綠醇等揮發(fā)性物質(zhì)，但未鑒定出2-乙酰-1-吡咯啉。

目前，國(guó)內(nèi)外大部分研究局限于籠統(tǒng)地分析香露兜揮發(fā)性物質(zhì)組成，而關(guān)于香露兜不同葉位器官的揮發(fā)性成分組成變化規(guī)律尚不清楚，最佳采收葉片部位不確定。為了解香露兜不同葉位揮發(fā)性成分組成變化規(guī)律，本研究以香露兜不同葉位鮮葉為材料，采用超聲輔助無(wú)水乙醇溶劑提取和GC-MS技術(shù)分析香露兜鮮葉中的揮發(fā)性成分，以期確定香露兜的最佳采收葉位，為香露兜標(biāo)準(zhǔn)化采收提供理論依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 材料? 試驗(yàn)材料香露兜（Pandanus amaryllifolius Roxb.）采自海南興隆熱帶植物園，種植面積600 m2，栽培措施中未使用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。依據(jù)香露兜植物學(xué)形態(tài)特征[1]，將植株葉片自頂端至基部按葉位順序進(jìn)行排列，依次標(biāo)記為倒1葉位（L1）、倒2葉位（L2）、倒3葉位（L3）、倒4葉位（L4）、倒5葉位（L5）、倒6葉位（L6）、倒7葉位（L7）和倒8葉位（L8）。種植基地以“田”字型均等分為4個(gè)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)采集5株，采集植株無(wú)病蟲害和無(wú)機(jī)械損傷的葉位葉片，立即帶回實(shí)驗(yàn)室處理。

1.1.2? 試劑與儀器? 無(wú)水乙醇（含量≥99.7%），西隴科學(xué)股份有限公司;2-乙酰-1-吡咯啉標(biāo)準(zhǔn)品（純度95%），加拿大Toronto Research Chemicals公司;葉綠醇標(biāo)準(zhǔn)品（GC≥90%），上海源葉生物科技有限公司;角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品（GC≥98%），上海源葉生物科技有限公司;C7～C40正構(gòu)烷烴混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品（純度95%），上海安譜實(shí)驗(yàn)科技有限公司。Aglient-7890B/5977B氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國(guó)安捷倫公司。

1.2? 方法

1.2.1? 揮發(fā)性物質(zhì)的提取? 香露兜不同葉位新鮮葉片，用蒸餾水清洗葉面雜質(zhì)后，用白色紗布將水吸干靜置5 min，環(huán)境溫度為（22±3）℃，將其剪碎放置塑封袋。立即分別稱取5.0 g剪碎的鮮葉樣品于50 mL離心管，加入15 mL無(wú)水乙醇，在50 ℃、400 W、40 kHz條件下超聲萃取60 min，經(jīng)0.22 μm有機(jī)相針式濾器（尼龍）過(guò)濾，獲得提取液，上機(jī)檢測(cè)。

1.2.2? GC-MS分析條件? 色譜條件：色譜柱為DB-WAX（30 m×0.25 mm×0.25 μm）彈性石英毛細(xì)管柱，載氣為高純氦氣（99.999 %），載氣流量1 mL/min，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度250 ℃，接口溫度250 ℃，柱初始溫度50 ℃，保持2 min，以5 ℃/min升溫至100 ℃，再以6 ℃/min 升溫至250 ℃，保持5 min。

質(zhì)譜條件：離子源為EI;電壓70 eV;離子源溫度230 ℃;四極桿溫度150 ℃，進(jìn)樣口溫度為250 ℃，掃描質(zhì)量范圍30～450 amu。

1.3? 數(shù)據(jù)分析

1.3.1? 定性分析? 結(jié)合質(zhì)譜和保留指數(shù)（RI）對(duì)香露兜揮發(fā)性成分進(jìn)行定性，其中質(zhì)譜分析結(jié)果在NIST 2017譜庫(kù)進(jìn)行檢索，比對(duì)定性;使用C7～ C40正構(gòu)烷烴混標(biāo)，以相同條件進(jìn)行GC-MS 分析，根據(jù)其保留時(shí)間，按照線性方程計(jì)算各揮發(fā)性成分的保留指數(shù)RI[11]，與文獻(xiàn)對(duì)照進(jìn)行定性分析。

1.3.2? 定量分析? 精密吸取2-乙酰-1-吡咯啉、葉綠醇、角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品，以及甲醇（色譜純），按照50、100、150、300、500 μg/mL的溶液濃度梯度分別進(jìn)行配制，按照樣品的色譜條件，標(biāo)準(zhǔn)品梯度濃度由低到高的順序依次進(jìn)樣，每個(gè)濃度進(jìn)樣3次，以各組分濃度為橫坐標(biāo)，3次測(cè)定峰面積的平均值為縱坐標(biāo)，得到各組分的定量線性關(guān)系。利用峰面積按照線性方程計(jì)算2-乙酰-1-吡咯啉、葉綠醇、角鯊烯的含量，再根據(jù)2-乙酰-1-吡咯啉含量對(duì)其他揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行半定量[12]，計(jì)算公式：

Xi = （ Ai /As） × Cs

其中：Xi為待測(cè)物質(zhì)含量;Cs為樣品中2-乙酰-1-吡咯啉含量;As為2-乙酰-1-吡咯啉的峰面積;Ai為待測(cè)物的峰面積。

1.3.3? 數(shù)據(jù)處理? 采用Bray-Curtis相似性檢驗(yàn)，判斷香露兜不同葉位揮發(fā)性成分組成間的相似性程度。采用ANOSIM非參數(shù)檢驗(yàn)，進(jìn)行不同葉位葉片揮發(fā)性成分組成的差異性分析。采用單因素方差分析（one-way ANOVA）進(jìn)行不同葉位共有化合物含量的差異分析。采用主成分分析（PCA）進(jìn)行不同葉位葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)成分組成分析。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用Windows的R軟件3.5.1版本進(jìn)行分析。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 香露兜不同葉位葉片揮發(fā)性成分種類分析

利用GC-MS技術(shù)對(duì)香露兜不同葉位葉片揮發(fā)性成分檢測(cè)，結(jié)果表明8個(gè)不同葉位共檢測(cè)出21種揮發(fā)性化合物，屬于吡咯類、醇類、酚類、呋喃類、呋喃酮類、醛類、酸類、酮類、烯烴類和酯類共10類（表1）。由圖1A可見(jiàn)，香露兜不同葉位葉片揮發(fā)性成分種類組成和數(shù)量均存在差異，L1至L8葉片由8～10類化合物組成，且L1至L8葉片揮發(fā)性成分豐富度為（13.75±1.28）種（n=8，值域?yàn)?1～15種）。

不同葉位葉片揮發(fā)性成分含量差異較大（圖1B）。其中，呋喃酮類揮發(fā)性成分相對(duì)含量高達(dá)（36.62±12.78）%（n=8，值域?yàn)?4.36%～62.02%），且由L1至L8整體呈現(xiàn)遞減的變化規(guī)律;其次為烯烴類化合物，占揮發(fā)性成分含量的（20.96± 8.09）%（n=8，值域?yàn)?.66%～33.69%），且L1～L8整體呈現(xiàn)遞增的變化規(guī)律;吡咯類化合物，占揮發(fā)性成分含量的（13.65±5.07）%（n=8，值域?yàn)?.23%～15.91%），L5葉片中吡咯類的含量是L1葉片的19.01倍，且L1至L8整體呈現(xiàn)遞增的變化規(guī)律。此外，呋喃類、酮類、酯類和醇類等化合物種類含量相對(duì)較高，分別為（11.19±2.47）%（n=8，值域6.03%～13.21%）、（8.15±2.08）%（n=8，值域?yàn)?.93%～11.89%）、（3.76±2.80）%（n=8，值域?yàn)?.72%～10.45%）和（3.70±2.21）%（n=8，值域?yàn)?.58%～8.14%）。然而，醛類、酚類和酸類等化合物種類含量均低于2%。

2.2? 香露兜不同葉位葉片揮發(fā)性成分組成分析

Bray-Curtis分析表明，香露兜不同葉位揮發(fā)性成分組成的Bray-Curtis指數(shù)為79.92%，且不同葉位間存在極顯著差異（ANOSIM，R=0.9993，P0.001），表明豐富的揮發(fā)性成分多樣性組成存在于香露兜不同葉位間。差異性檢驗(yàn)表明，3-甲基-2（5H）-呋喃酮、新植二烯、2-乙酰-1-吡咯啉、葉綠醇、2，3-二氫苯并呋喃、2，4-二叔丁基酚、羥基丙酮、棕櫚酸乙酯和亞油酸乙酯這9種共有揮發(fā)性成分含量在不同葉位之間差異顯著（圖2）。

3-甲基-2（5H）-呋喃酮是香露兜“焦糖”風(fēng)味的主要特征揮發(fā)性物質(zhì)。由圖2A可見(jiàn)，不同葉位間3-甲基-2（5H）-呋喃酮含量差異極顯著（F7，16=512.62，P0.001），其平均含量為（241.18± 68.80）μg/g（值域?yàn)?62.86～333.24 μg/g）。其中，L1葉位3-甲基-2（5H）-呋喃酮含量高達(dá)（327.38± 8.04）μg/g，是L8葉位3-甲基-2（5H）-呋喃酮含量[（162.86±1.44）μg/g]的2倍，且由L1至L8葉位呈遞減變化規(guī)律。

由圖2B可見(jiàn)，與3-甲基-2（5H）-呋喃酮變化規(guī)律相反，新植二烯含量由L1至L8葉位呈遞增變化趨勢(shì)，不同葉位間新植二烯含量差異極顯著（F7，16=109.70，P0.001），其平均含量為（59.58±19.97）μg/g（值域?yàn)?5.16～97.69 μg/g）。其中L8葉位新植二烯含量最高[（97.69±2.07）μg/g]，是L1葉位含量[（35.16±4.86）μg/g]的2.78倍。

由圖2C可見(jiàn)，2-乙酰-1-吡咯啉是香露兜“粽香”風(fēng)味的主要特征揮發(fā)性物質(zhì)。不同葉位間2-乙酰-1-吡咯啉含量差異極顯著（F7，16=1226.73，P0.001），其平均含量為（94.00±36.66）μg/g（值域?yàn)?.47～122.99 μg/g）。其中，L5葉位含量最高[（122.99±3.48）μg/g]，而L1葉位含量最低[（6.47± 0.70）μg/g]，且由L1至L8葉位呈現(xiàn)先升后降的變化規(guī)律。同時(shí)，葉綠醇、2，3-二氫苯并呋喃和2，4-二叔丁基酚揮發(fā)性物質(zhì)含量由L1至L8葉位均呈先升后降的變化規(guī)律，其中L5葉位含量最高，分別為（46.91±0.38）μg/g、（107.22±1.25）μg/g和（12.11±0.45）μg/g。

由圖2D可見(jiàn)，不同葉位間羥基丙酮、棕櫚酸乙酯和亞油酸乙酯平均含量分別為（52.28± 14.91）μg/g（F7，16=320.27，P0.001）、（14.85± 9.25）μg/g（F7，16=158.67，P0.001）和（7.59± 1.54）μg/g（F7，16=61.53，P0.001），其中L7葉位羥基丙酮含量最高[（80.55±1.68）μg/g]，而L1葉位棕櫚酸乙酯和亞油酸乙酯含量最高，分別為（35.74±2.61）μg/g和（9.25±0.17）μg/g，但不同葉位間羥基丙酮、棕櫚酸乙酯和亞油酸乙酯含量整體未呈現(xiàn)明顯的變化規(guī)律。

此外，十一烯醛、2-甲基-1-戊烯-3-酮和甲酸庚酯3個(gè)化合物僅在L1葉位檢測(cè)到，含量分別為（1.62±0.03）μg/g、（6.16±0.23）μg/g和（10.23±0.41）μg/g;2-環(huán)戊酮化合物僅在L2葉位檢測(cè)到，含量為（2.95±0.14）μg/g;3-羥基丁酮化合物僅在L7、L8葉位檢測(cè)到，含量分別為（4.24±0.62）μg/g和（3.89±0.07）μg/g，而2-十四醇、十一醛、反-2-十二烯醛、2-十三（碳）烯醛和亞油酸等5個(gè)化合物零星分布于L2至L8葉位。

2.3? 香露兜不同葉位葉片揮發(fā)性成分主成分分析

香露兜8個(gè)不同葉位與10個(gè)揮發(fā)性物質(zhì)種類（圖3A）和21種揮發(fā)性成分（圖3B）的PCA分析表明，PC1和PC2前兩個(gè)限制性軸的排序特征分別占總變異的97.73%和98.15%。由圖3可見(jiàn)，香露兜8個(gè)不同葉位分為4類，L1葉位屬于I類，L2、L3、L4葉位屬于Ⅱ類，L5屬于Ⅲ類，L6、L7和L8葉位屬于Ⅳ類。其中，以3-甲基-2（5H）-呋喃酮為主的呋喃酮類和棕櫚酸乙酯、甲酸庚酯為主的酯類與I類揮發(fā)性特征正相關(guān);Ⅱ類富含葉綠醇、2-丁基-1-辛醇、3-甲基-2（5H）-呋喃酮、2-乙酰-1-吡咯啉、2，3-二氫苯并呋喃、新植二烯、角鯊烯、棕櫚酸乙酯、亞油酸乙酯、2，4-二叔丁基酚等醇類、呋喃酮類、吡咯類、呋喃類、烯烴類、酯類、酚類等化合物，但不具有顯著的特征揮發(fā)性成分;Ⅲ類揮發(fā)性特征主要由以3-甲基-2（5H）-呋喃酮為主的呋喃酮類、2-乙酰-1-吡咯啉為主的吡咯類、2，3-二氫苯并呋喃為主的呋喃類和角鯊烯、新植二烯為主的烯烴類化合物組成;而Ⅳ類主要由角鯊烯和新植二烯為主的烯烴類、2-乙酰-1-吡咯啉為主的吡咯類、2，3-二氫苯并呋喃為主的呋喃類、羥基丙酮為主的酮類等揮發(fā)性組分正相關(guān)。

3? 討論

香露兜為典型的熱帶香料作物，有“東方人的香草”之美譽(yù)，其特征揮發(fā)性物質(zhì)2-乙酰-1-吡咯啉具有“粽香”風(fēng)味，廣泛用于面包、糖果、冰淇淋、奶酪和茶飲等食品行業(yè)[8， 13]。揮發(fā)性風(fēng)味是衡量香露兜品質(zhì)的重要指標(biāo)。本研究以香露兜不同葉位葉片為材料，采用超聲輔助無(wú)水乙醇浸提方法和GC-MS檢測(cè)技術(shù)鑒定表明，香露兜揮發(fā)性物質(zhì)由呋喃酮類、烯烴類、吡咯類、呋喃類、酮類、醇類、酯類、醛類、酚類和酸類10類化合物組成，這與Jiang[7]、Yahya等[14]和Laohakunjit等[8]的研究結(jié)果基本一致。同時(shí)，本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，呋喃酮類、烯烴類、吡咯類和呋喃類這4類揮發(fā)性成分相對(duì)含量約達(dá)80%，是香露兜揮發(fā)性物質(zhì)組成的主要化合物種類。其中，呋喃酮類化合物揮發(fā)性成分相對(duì)含量約為36.62%，由L1至L8葉位整體呈現(xiàn)遞減的變化規(guī)律;烯烴類和吡咯類揮發(fā)性成分相對(duì)含量分別為20.96%和13.65%，由L1至L8葉位整體呈現(xiàn)遞增的趨勢(shì);呋喃類揮發(fā)性成分相對(duì)含量約為11.19%，由L1至L8葉位整體呈現(xiàn)先上升后下降的變化規(guī)律。

近年來(lái)，關(guān)于香露兜風(fēng)味品質(zhì)的研究主要集中在揮發(fā)性成分的鑒定分析。相關(guān)研究表明，香露兜地理分布、提取方法等因素影響揮發(fā)性成分的組成[15-16]。Wakte等[17]利用HS-SPME/GC-FID對(duì)香露兜鮮葉樣品鑒定發(fā)現(xiàn)，2-已烯醛（21.87%）、壬醛（10.50%）、2-乙酰-1-吡咯啉（8.52%）和植醇（5.28%）等化合物是香露兜的主要揮發(fā)性成分。尹桂豪等[3]利用超臨界CO2萃取技術(shù)鑒定香露兜揮發(fā)油，發(fā)現(xiàn)香露兜含有角鯊烯（21.03%）、β-谷甾醇（12.66%）等15種揮發(fā)性物質(zhì)。任竹君等[4]采用正己烷蒸餾法鑒定出香露兜揮發(fā)性成分18種，主要揮發(fā)性成分是亞油酸甲酯（24.08%）和葉綠醇（18.85%），但未鑒定出2-乙酰-1-吡咯啉。同時(shí)，Mar等[5]采用水蒸餾法提取香露兜精油，結(jié)果表明植醇是主要的揮發(fā)性成分，含量高達(dá)21.35%，其次是檜酚酮（18.64%）、十二烷醇（12.55%）、正十四烷醇（8.93%）、乙酸芐酯（8.08%），但也未鑒定出2-乙酰-1-吡咯啉。與上述研究結(jié)果類似，本研究利用超聲輔助無(wú)水乙醇提取法和GC-MS鑒定香露兜揮發(fā)性成分發(fā)現(xiàn)，香露兜富含2-乙酰-1-吡咯啉、3-甲基-2（5H）-呋喃酮、角鯊烯、植醇等。同時(shí)，本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，香露兜不同葉位葉片揮發(fā)性成分組成和含量存在一定差異。其中，倒1葉位揮發(fā)性主要由3-甲基- 2（5H）-呋喃酮、羥基丙酮、2-甲基-1-戊烯-3-酮、葉綠醇、亞油酸、2，4-二叔丁基酚、棕櫚酸乙酯、甲酸庚酯等呋喃酮類、酮類、醇類、酸類、酚類和酯類化合物組成;倒2、3、4葉位富含葉綠醇、2-丁基-1-辛醇、3-甲基-2（5H）-呋喃酮、2-乙酰-1-吡咯啉、羥基丙酮、新植二烯、角鯊烯、棕櫚酸乙酯、亞油酸乙酯、2，4-二叔丁基酚等呋喃類、吡咯類、烯烴類、醇類、酮類、酯類、酚類等化合物，特征揮發(fā)性成分不明顯;倒5葉位揮發(fā)性成分主要由以2-乙酰-1-吡咯啉為主的吡咯類、2，3-二氫苯并呋喃為主的呋喃類和角鯊烯、新植二烯為主的烯烴類化合物組成;而倒6、7和8葉位揮發(fā)性成分主要與角鯊烯和新植二烯為主的烯烴類、2-乙酰-1-吡咯啉為主的吡咯類、2，3-二氫苯并呋喃為主的呋喃類、羥基丙酮為主的酮類等揮發(fā)性組分正相關(guān)。

相關(guān)研究表明，2-乙酰-1-吡咯啉是“粽香”風(fēng)味的主要貢獻(xiàn)物質(zhì)，在香稻[18]、香芋南瓜[19]、香水椰子[20]等植物以及爆米花[21]、面包[22]等加工食品中均有分布。2-乙酰-1-吡咯啉也是香露兜的主要揮發(fā)性成分[23]。本研究表明，不同葉位間2-乙酰-1-吡咯啉含量存在顯著差異，其平均含量約（94.00±36.66）μg/g，遠(yuǎn)高于優(yōu)質(zhì)香稻（Yuliangyou）的含量（414.87～734.18 ng/g）[24]。本研究也檢測(cè)到香露兜富含角鯊烯和植醇化合物。Maynard等[25]研究表明，角鯊烯具有增強(qiáng)細(xì)胞的活力及免疫力、抑制癌細(xì)胞生成及防止癌細(xì)胞擴(kuò)散等作用。植醇是維生素E和維生素K1合成的基本原料，也是有機(jī)體氧化代謝的重要能量來(lái)源，具有良好的抗氧化作用，是用于預(yù)防癌癥的潛在膳食化合物[26-27]。本研究發(fā)現(xiàn)，香露兜不同葉位角鯊烯含量為0～118.47 μg/g，且由倒1葉位至倒8葉位呈逐漸遞增的變化趨勢(shì)，倒8葉位含量高達(dá)（118.47±2.61）μg/g，與小米糠胚制油中的角鯊烯含量（102.45～126.22 μg/g）相當(dāng)[28]。同時(shí)，香露兜不同葉位植醇含量為5.78～46.91 μg/g，且由倒1葉位至倒8葉位呈先升后降的變化規(guī)律，倒5葉位含量高達(dá)（46.91±0.38）μg/g。

綜上所述，香露兜不同葉位之間的揮發(fā)性成分組成及含量均存在顯著差異，植株葉片自頂端葉位（L1）至基部葉位（L8），其烯烴類、吡咯類揮發(fā)性成分含量呈遞增的變化趨勢(shì)，呋喃酮類化合物含量則呈遞減變化趨勢(shì)。各葉位含量最高的揮發(fā)性成分為呋喃酮類、吡咯類和烯烴類化合物。其中，倒5葉位為不同葉位特征揮發(fā)性成分變化的分界點(diǎn)，倒5、6、7、8葉位葉片富含較高的2-乙酰-1-吡咯啉、角鯊烯、新植二烯、植醇等特征揮發(fā)性化合物，應(yīng)為香露兜采收的最佳葉位，也是風(fēng)味品質(zhì)最佳部位，適合食用和加工，以上研究結(jié)果將為香露兜標(biāo)準(zhǔn)化采收提供依據(jù)。

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