張俊有 蔣家珍

摘要：本試驗(yàn)采用孢子萌發(fā)法進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，研究咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等5種殺菌劑在5個(gè)濃度下對芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的抑制效果，計(jì)算出5種殺菌劑對芒果炭疽菌的EC50，并進(jìn)行多重比較。結(jié)果表明咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等對芒果炭疽菌的EC50分別為4.493、1.596、180.438、12.830、181.810 mg/L，異菌脲抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的效果最好;采用半果接種法進(jìn)行活體試驗(yàn)，研究咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等5種殺菌劑在5個(gè)濃度下對芒果炭疽病的防治效果，并進(jìn)行多重比較，結(jié)果表明異菌脲對芒果炭疽病的防治效果最好。

關(guān)鍵詞：芒果炭疽病;生物測定;孢子萌發(fā)法;半果接種法;殺菌劑

中圖分類號： S436.67+9 ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A ?文章編號：1002-1302（2020）24-0102-06

芒果肉質(zhì)細(xì)膩，味道鮮美，深受消費(fèi)者的喜愛，是我國經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的水果。芒果炭疽病是芒果儲(chǔ)藏期的一種重要病害，常造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。芒果炭疽病的病原為膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides），果實(shí)在發(fā)病初期出現(xiàn)黑色斑點(diǎn)，之后病斑擴(kuò)大，形成黑色的圓形、橢圓形或不規(guī)則病斑，病斑處常凹陷，在潮濕環(huán)境下病斑處常產(chǎn)生紅色的孢子堆，最后整個(gè)果實(shí)變黑腐爛。使用化學(xué)殺菌劑是防治植物儲(chǔ)藏期病害的主要方法之一[1]。本試驗(yàn)利用發(fā)病芒果進(jìn)行病原菌的采集[2-6]、分離[6]、培養(yǎng)、轉(zhuǎn)接，并通過采用孢子萌發(fā)法[7-12]進(jìn)行室內(nèi)毒力測定來研究咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等5種殺菌劑在5個(gè)濃度下對芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的抑制效果，通過半果接種法進(jìn)行活體試驗(yàn)來研究咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯和鮮保A等5種殺菌劑在5個(gè)濃度下對芒果炭疽病的防治效果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株 從超市采購具有芒果炭疽病的病果，經(jīng)過一段時(shí)間的保濕培養(yǎng)會(huì)產(chǎn)生紅色的孢子堆，從孢子堆上即可獲得芒果炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）。獲得的芒果炭疽菌一部分轉(zhuǎn)接到馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基斜面上，另一部分配制成孢子懸浮液進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

1.1.2 供試殺菌劑

試驗(yàn)所用殺菌劑詳見表1，均來源于中國農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院應(yīng)用化學(xué)系。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 病原菌的培養(yǎng) 從超市中采購有芒果炭疽病癥狀的病果，將病果放入塑料盒中密閉保濕培養(yǎng)7 d左右，直到芒果表面產(chǎn)生紅色的孢子堆。

1.2.2 病原菌的采集

1.2.2.1 接種到PDA培養(yǎng)基斜面上 在滅菌后的超凈工作臺(tái)中，用接種針挑取病果上少量的紅色孢子堆，接種到PDA培養(yǎng)基斜面上，放入培養(yǎng)箱中保存。

1.2.2.2 配制孢子懸浮液 取出已經(jīng)產(chǎn)孢的病果，用柔軟的毛刷輕刷病果上紅色的孢子堆來獲取孢子，在無菌水中使之懸浮并進(jìn)行過濾，制成孢子懸浮液。在顯微鏡下鏡檢，觀察孢子形態(tài)以確認(rèn)。用無菌水對孢子懸浮液進(jìn)行稀釋，孢子懸浮液的濃度以在10×15倍顯微鏡下每個(gè)視野40～60個(gè)孢子為宜。

1.2.3 藥液的配制 將水溶性藥劑直接用無菌水溶解并用容量瓶定容，其他藥劑選用少量丙酮或二甲基亞砜（DMSO）等溶解，然后加入0.1%吐溫80，再用無菌水稀釋，有機(jī)溶劑最終含量不超過2%。

1.2.4 孢子萌發(fā)試驗(yàn)

1.2.4.1 藥劑處理與孢子萌發(fā)培養(yǎng) 吸取1 mL孢子懸浮液注入指形管中，再加入各濃度的1 mL殺菌劑并混合均勻，配成的孢子與藥劑混合液中藥劑的濃度分別為500.00、50.00、5.00、0.50、0.05 mg/L。吸取孢子與藥劑混合液，滴在凹玻片上，每個(gè)處理重復(fù)3次，以不加藥劑的孢子懸浮液作對照。在裝有淺層水的培養(yǎng)皿中保濕培養(yǎng)，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 h 后調(diào)查孢子萌發(fā)情況。把芽管長度達(dá)到孢子短徑長度1倍的視作萌發(fā)。

1.2.4.2 鏡檢時(shí)間 當(dāng)對照組孢子萌發(fā)率達(dá)到90% 及以上時(shí)，檢查各個(gè)處理的孢子萌發(fā)情況。每個(gè)處理隨機(jī)觀察3個(gè)及以上視野，調(diào)查孢子總數(shù)200個(gè)以上，分別記錄孢子萌發(fā)數(shù)和孢子總數(shù)。計(jì)算半最大效應(yīng)濃度（EC50）并進(jìn)行多重比較。

1.2.4.3 記錄與計(jì)算方法

孢子萌發(fā)率=萌發(fā)孢子數(shù)檢驗(yàn)孢子數(shù)×100%;

校正萌發(fā)率=處理萌發(fā)率對照萌發(fā)率×100%;

抑制率=100%-校正萌發(fā)率。

1.2.5 半果接種試驗(yàn)

1.2.5.1 病原菌的轉(zhuǎn)接 用記號筆標(biāo)記出芒果的正反兩面。無菌對照芒果正面噴施無菌水，接菌對照芒果正面噴施孢子懸浮液，藥液處理芒果正面先噴施孢子懸浮液，之后在正面噴施藥液，每個(gè)處理重復(fù)4次。將接種的果實(shí)放入保濕桶中，或直接放入保鮮袋中，在溫度為25 ℃條件下培養(yǎng);保濕18 h后，解除保濕環(huán)境，將果實(shí)晾干，然后再次放入保鮮袋中培養(yǎng)。

1.2.5.2 病情指數(shù)與防治效果的計(jì)算 觀察發(fā)病后的病斑，測量估算各果實(shí)的病斑面積與果實(shí)總面積。當(dāng)加菌液且未進(jìn)行藥劑處理的對照組發(fā)病率達(dá)到80%左右時(shí)，調(diào)查所有藥劑處理組的發(fā)病率與病情指數(shù)，進(jìn)而計(jì)算防治效果。發(fā)病情況分級如下：0級為無病;1級為病斑面積占果實(shí)面積的5%以下;3級為病斑面積占果實(shí)面積的6%～15%;5級為病斑面積占果實(shí)面積的16%～25%;7級為病斑面積占果實(shí)面積的26%～50%;9級為病斑面積占果實(shí)面積的51%及以上。

病情指數(shù)按公式（1）進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算結(jié)果保留2位小數(shù)。

病情指數(shù)=∑（各級病果數(shù)×對應(yīng)級數(shù)值）調(diào)查總果數(shù)×9×100。

防治效果按公式（2）進(jìn)行計(jì)算。

式中：CK0為空白對照不噴藥液的病情指數(shù);CK1為空白對照噴藥液的病情指數(shù);PT0為處理組不噴藥液的病情指數(shù);PT1為處理組噴藥處理的病情指數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 21.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 離體試驗(yàn)

5種殺菌劑對芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的抑制效果見表2，咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等對芒果炭疽菌的毒力回歸方程分別為Y=1.823X-8.464、Y=1.494X-7.267、Y=2.395X-9.720、Y=1.546X-6.623、Y=2.598X-10.732，相關(guān)系數(shù)均表現(xiàn)為極顯著相關(guān)。咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等對芒果炭疽菌的EC50分別為4.493、1.596、180.438、12.830、181.810 mg/L，可見咪鮮胺、異菌脲、吡唑醚菌酯抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的效果較好，抑霉唑、鮮保A抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的效果較差。

從表3可以看出，5 mg/L濃度下咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等對芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的抑制率分別為52.20%、68.83%、30.25%、43.43%、31.75%。5 mg/L濃度下異菌脲對芒果炭疽菌的孢子萌發(fā)抑制率最高，抑霉唑?qū)γ⒐烤揖逆咦用劝l(fā)抑制率最低。

從表4可以看出，方差齊次性檢驗(yàn)的顯著性值為0.180，方差齊次，數(shù)據(jù)可進(jìn)行F測驗(yàn)。

從表5可以看出，F(xiàn)為18.526，P<0.01，濃度為5 mg/L時(shí)5種殺菌劑在抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)方面有著極顯著性差異。

多重比較結(jié)果（表6）顯示，第1列有抑霉唑、鮮保A對應(yīng)的孢子萌發(fā)抑制率，第2列有吡唑醚菌酯、咪鮮胺對應(yīng)的孢子萌發(fā)抑制率，第3列有異菌脲對應(yīng)的孢子萌發(fā)抑制率。因此，當(dāng)顯著性水平為0.05時(shí)，在5 mg/L濃度下，在抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的效果方面，抑霉唑與鮮保A之間無顯著性差異，抑霉唑與吡唑醚菌酯、咪鮮胺、異菌脲之間有顯著性差異，鮮保A與吡唑醚菌酯、咪鮮胺、異菌脲之間有顯著性差異，吡唑醚菌酯與咪鮮胺之間無顯著性差異，吡唑醚菌酯與異菌脲之間有顯著性差異，咪鮮胺與異菌脲之間有顯著性差異。異菌脲抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的效果最好。

由多重比較結(jié)果（表7）可知，第1列有抑霉唑、鮮保A、吡唑醚菌酯對應(yīng)的孢子萌發(fā)抑制率，第2列有吡唑醚菌酯、咪鮮胺對應(yīng)的孢子萌發(fā)抑制率，第3列有異菌脲對應(yīng)的孢子萌發(fā)抑制率。因此，當(dāng)顯著性水平為0.01時(shí)，在5 mg/L濃度下，在抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的效果方面，抑霉唑與鮮保A、吡唑醚菌酯之間無極顯著性差異，抑霉唑與咪鮮胺、異菌脲之間有極顯著性差異，鮮保A與吡唑醚菌酯之間無極顯著性差異，鮮保A與咪鮮胺、異菌脲之間有極顯著性差異，吡唑醚菌酯與咪鮮胺之間無極顯著性差異，吡唑醚菌酯與異菌脲之間有極顯著性差異，咪鮮胺與異菌脲之間有極顯著性差異。異菌脲抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的效果最好。

2.2 芒果活體試驗(yàn)

5種殺菌劑對芒果炭疽病的防治效果見表8。500.00 mg/L濃度下，咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等對芒果炭疽病的防治效果分別為84.4%、89.5%、54.8%、82.5%、47.4%;50.00 mg/L濃度下，咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等對芒果炭疽病的防治效果分別為75.5%、84.9%、41.8%、72.5%、44.8%;5.00 mg/L濃度下，咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等對芒果炭疽病的防治效果分別為52.3%、64.3%、27.2%、42.6%、28.1%;0.50 mg/L濃度下，咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等對芒果炭疽病的防治效果分別為32.9%、25.2%、25.5%、16.8%、25.5%;0.05 mg/L濃度下，咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等對芒果炭疽病的防治效果分別為14.1%、17.7%、10.4%、6.5%、7.6%。

從表9可以看出，在5 mg/L濃度下，咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等對芒果炭疽病的防治效果分別為52.34%、64.31%、27.16%、42.56%、28.08%。5 mg/L濃度下異菌脲對芒果炭疽病的防治效果最好，抑霉唑?qū)γ⒐烤也〉姆乐涡Ч畈睢?/p>

從表10可以看出，方差齊次性檢驗(yàn)的顯著性值為0.392，方差齊次，數(shù)據(jù)可進(jìn)行F測驗(yàn)。

從方差分析結(jié)果（表11）可知，F(xiàn)為18.303，P<0.01，5 mg/L濃度時(shí)，5種殺菌劑在對芒果炭疽病防治效果方面有著極顯著性差異。

由多重比較結(jié)果（表12）可知，第1列有抑霉唑、鮮保A對應(yīng)的防治效果，第2列有吡唑醚菌酯、咪鮮胺對應(yīng)的防治效果，第3列有異菌脲對應(yīng)的防治效果。因此，當(dāng)顯著性水平為0.05時(shí)，在5 mg/L濃度下，在芒果炭疽病防治效果方面，抑霉唑與鮮保A之間無顯著性差異，抑霉唑與吡唑醚菌酯、咪鮮胺、異菌脲之間有顯著性差異，鮮保A與吡唑醚菌酯、咪鮮胺、異菌脲之間有顯著性差異，吡唑醚菌酯與咪鮮胺之間無顯著性差異，吡唑醚菌酯與異菌脲之間有顯著性差異，咪鮮胺與異菌脲之間有顯著性差異。異菌脲對芒果炭疽病的防治效果最好。

由多重比較結(jié)果（表13）可知，第1列有抑霉唑、鮮保A、吡唑醚菌酯對應(yīng)的防治效果，第2列有吡唑醚菌酯、咪鮮胺對應(yīng)的防治效果，第3列有咪鮮胺、異菌脲對應(yīng)的防治效果。因此，當(dāng)顯著性水平為0.01時(shí)，在5 mg/L濃度下，在芒果炭疽病防治效果方面，抑霉唑與鮮保A、吡唑醚菌酯之間無極顯著性差異，抑霉唑與咪鮮胺、異菌脲之間有極顯著性差異，鮮保A與吡唑醚菌酯之間無極顯著性差異，鮮保A與咪鮮胺、異菌脲之間有極顯著性差異，吡唑醚菌酯與咪鮮胺之間無極顯著性差異，吡唑醚菌酯與異菌脲之間有極顯著性差異，咪鮮胺與異菌脲之間無極顯著性差異。異菌脲對芒果炭疽病的防治效果最好。

3 結(jié)論與討論

咪鮮胺、異菌脲、抑霉唑、吡唑醚菌酯、鮮保A等對芒果炭疽菌的EC50分別為4.493、1.596、180.438、12.830、181.810 mg/L。咪鮮胺、異菌脲、吡唑醚菌酯等抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的效果較好，抑霉唑、鮮保A等抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的效果較差。

當(dāng)顯著性水平為0.05時(shí)，在5 mg/L濃度下，在抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的效果方面，抑霉唑與鮮保A之間無顯著性差異，抑霉唑與吡唑醚菌酯、咪鮮胺、異菌脲之間有顯著性差異，鮮保A與吡唑醚菌酯、咪鮮胺、異菌脲之間有顯著性差異，吡唑醚菌酯與咪鮮胺之間無顯著性差異，吡唑醚菌酯與異菌脲之間有顯著性差異，咪鮮胺與異菌脲之間有顯著性差異;當(dāng)顯著性水平為0.01時(shí)，在5 mg/L濃度下，在抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的效果方面，抑霉唑與鮮保A、吡唑醚菌酯之間無極顯著性差異，抑霉唑與咪鮮胺、異菌脲之間有極顯著性差異，鮮保A與吡唑醚菌酯之間無極顯著性差異，鮮保A與咪鮮胺、異菌脲之間有極顯著性差異，吡唑醚菌酯與咪鮮胺之間無極顯著性差異，吡唑醚菌酯與異菌脲之間有極顯著性差異，咪鮮胺與異菌脲之間有極顯著性差異。異菌脲抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)的效果最好。

在半果接種法試驗(yàn)中，當(dāng)顯著性水平為0.05時(shí)，在5 mg/L濃度下，在芒果炭疽病防治效果方面，抑霉唑與鮮保A之間無顯著性差異，抑霉唑與吡唑醚菌酯、咪鮮胺、異菌脲之間有顯著性差異，鮮保A與吡唑醚菌酯、咪鮮胺、異菌脲之間有顯著性差異，吡唑醚菌酯與咪鮮胺之間無顯著性差異，吡唑醚菌酯與異菌脲之間有顯著性差異，咪鮮胺與異菌脲之間有顯著性差異;當(dāng)顯著性水平為0.01時(shí)，在 5 mg/L 濃度下，在芒果炭疽病防治效果方面，抑霉唑與鮮保A、吡唑醚菌酯之間無極顯著性差異，抑霉唑與咪鮮胺、異菌脲之間有極顯著性差異，鮮保A與吡唑醚菌酯之間無極顯著性差異，鮮保A與咪鮮胺、異菌脲之間有極顯著性差異，吡唑醚菌酯與咪鮮胺之間無極顯著性差異，吡唑醚菌酯與異菌脲之間有極顯著性差異，咪鮮胺與異菌脲之間無極顯著性差異。異菌脲對芒果炭疽病的防治效果最好。

防治芒果炭疽病推薦使用異菌脲，一方面異菌脲對芒果炭疽病的防治效果較好，另一方面異菌脲在水中的分散性好，水溶液較為均勻穩(wěn)定。

室內(nèi)毒力測定試驗(yàn)結(jié)果表明，異菌脲、咪鮮胺抑制芒果炭疽菌孢子萌發(fā)效果較好，半果法活體試驗(yàn)結(jié)果表明，異菌脲、咪鮮胺對芒果炭疽病防治效果較好。異菌脲、咪鮮胺等對芒果炭疽病防治效果較好的原因之一可能是能有效抑制芒果炭疽菌孢子的萌發(fā)。后續(xù)試驗(yàn)中，可以進(jìn)一步測定咪鮮胺、異菌脲等殺菌劑對芒果炭疽菌菌絲生長的抑制作用[13]，也可以進(jìn)行咪鮮胺和異菌脲的復(fù)配毒力測定篩選出藥效較好的復(fù)配比例。

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