鄧 博，鄧護軍，楊 飛，門 靖

西安萬隆制藥股份有限公司，西安 710119

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)檢測分析技術(shù)具有高效分離度和超高靈敏度的優(yōu)勢，可顯著提高數(shù)據(jù)分析與檢測的可靠性與耐用性，增強目標化合物的分析效率與準確度，是分析檢測領(lǐng)域內(nèi)的一種綜合性的分析手段[3-4]。近年來，UPLC-MS/MS分析技術(shù)在醫(yī)藥[5-6]、化工[7]、生物工程[8-9]、保健食品[10]、特種材料[11]等眾多領(lǐng)域應用廣泛，尤其是化工與醫(yī)藥產(chǎn)品的檢測與殘留分析憑借UPLC-MS/MS獲得了大幅度的提升與改進。

本文將重點綜述UPLC-MS/MS在中西醫(yī)藥品檢測與分析中的應用研究現(xiàn)狀，從人體化學藥品、動物體內(nèi)化學藥品、以及中醫(yī)藥分析與檢測三方面歸納UPLC-MS/MS最新應用研究進展。

1 UPLC-MS/MS應用于人體化學藥品的檢測

1.1 UPLC-MS/MS檢測抗菌藥物

泊沙康唑是一種三唑類廣譜抗真菌藥物，具有高效、廣譜、低毒等特點[11]。檢測該藥物在人體血漿中的濃度對監(jiān)測藥物吸收、指導臨床用藥安全尤為重要[12-13]。金鴻賓等[14]建立了一種特異性強、靈敏度高的UPLC-MS/MS法測定血漿中泊沙康唑濃度方法。其采用蛋白沉淀前處理方法進行試驗，結(jié)果顯示血漿中泊沙康唑線性范圍為0.1～10.0 μg/mL，定量下限為0.1 μg/mL，提取回收率96.44%～98.75%，該方法對于泊沙康唑藥物濃度監(jiān)測提供了參考價值[15]。

諾氟沙星是一種高效的第三代喹諾酮類抗菌藥，對細菌具有顯著的抑制作用，是腸炎痢疾等疾病的常規(guī)治療藥物[16]。但其副作用明顯，尤其具有一定得延緩未成年人骨骼形成，影響機體正常發(fā)育，故未成年人禁止服用該藥物[17]。檢測人體內(nèi)血漿中諾氟沙星的濃度十分重要。蔡娟等[18]運用UPLC-MS/MS測定了人體血漿中諾氟沙星的濃度。使用甲醇作為沉淀劑來預處理血漿樣本，結(jié)果表明諾氟沙星與峰面積比值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。批內(nèi)精密度RSD均≤3.35%，批間精密度RSD均≤5.12%。該測試方法簡便實用。

1.2 UPLC-MS/MS檢測降糖藥物

瑞格列奈屬于一種新型的非磺酰脲類、短效口服促胰島素分泌降糖藥。臨床治療用于飲食控制、體重減輕及運動鍛煉不能很好控制高血糖的成人2型糖尿病[19-20]。于洋等[21]建立了UPLC-MS/MS測定血漿中瑞格列奈濃度的方法，并開展了人體藥動學研究。選擇馬來酸依那普利做內(nèi)標，對健康志愿者采取單劑量口服瑞格列奈片的用藥條件，檢測服用后的血漿濃度。結(jié)果表明瑞格列奈在0.1～50 μg/mL范圍內(nèi)線性良好，定量下限為0.1 μg/mL。其建立的分析方法靈敏、準確，適用于瑞格列奈的人體藥動學研究，為臨床藥物的相互作用和患者用藥實踐兩個方面提供了方法學指導。

1.3 UPLC-MS/MS檢測HIV感染藥物

艾滋病(AIDS)是當前威脅全球健康的重要疾病之一，是通過感染艾滋病病毒(HIV)引起的，這種病毒可進攻人體免疫系統(tǒng)中關(guān)鍵的CD4T淋巴細胞[22]。有研究揭示人體頭發(fā)中藥物水平與高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療效果呈正相關(guān)性[23-24]。楚劉喜等[25]開發(fā)了一種利用UPLC-MS/MS可成功檢測頭發(fā)中洛匹那韋、利托那韋、齊多夫定、依法韋侖等4種抗HIV感染藥物含量的方法，該檢測方法靈敏性和選擇性均良好，為適應抗HIV感染的藥物研究作出鋪墊。

1.4 UPLC-MS/MS檢測非靶向小分子代謝物

非靶向代謝組學一般是憑借分析檢測手段，無偏向性的檢測細胞、組織、器官所有小分子的代謝物的微觀動態(tài)變化，并可針對性的分析過程中的差異代謝物，揭示其變化的生理機制[26-27]。馮靜等[28]建立了UPLC-MS/MS測定血漿中非靶向代謝組學的方法。首先對血漿樣品進行提取、復溶處理，采用Waters Acquity Hss T3色譜柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)，梯度洗脫，優(yōu)化實驗后結(jié)果表明血漿中相對分子質(zhì)量在100～1000之間的小分子代謝物檢出量為9 973個。該方法對于非靶向小分子代謝物的檢測范圍廣、準確度高，是人血漿中非靶向代謝組學研究的可靠檢測方法。

1.5 UPLC-MS/MS檢測小肽類禁用藥物

肽類激素結(jié)構(gòu)上是由氨基酸通過肽鍵聯(lián)接而成，其分泌器官是丘腦下部及腦垂體，可通過刺激腎上腺皮質(zhì)生長、紅細胞生成等途徑，來促進機體的生長、發(fā)育。若大量攝入會降低自身內(nèi)分泌水平，不利于身體健康，嚴重的情況可導致心血管疾病、糖尿病等[29]。

常巍等[30]建立了UPLC-MS/MS測定人體尿液中34種小肽類禁用藥品的測定方法。尿樣經(jīng)Oasis WCX 固相萃取小柱前處理，洗脫液經(jīng)氮干燥、復溶，使用電噴霧離子源以正離子動態(tài)多反應監(jiān)測模式進行掃描。該測試方法對于34種小肽類禁用物質(zhì)擁有良好的選擇性、高穩(wěn)健度良，特異性、靈敏度均可滿足世界反興奮劑機構(gòu)(WADA)技術(shù)文件要求，目前北京興奮劑檢測實驗室已引進該中該技術(shù)。

1.6 UPLC-MS/MS檢測非甾體類抗炎藥物

尼美舒利屬于一種非甾體類抗炎藥，可用于慢性關(guān)節(jié)炎疼痛、手術(shù)和急性創(chuàng)傷后的疼痛、原發(fā)性痛經(jīng)的癥狀治療[31-32]。杜萍等[33]建立了UPLC-MS/MS測定血漿中尼美舒利濃度的方法。方法用Waters XBridge C18(2.1 mm×50.0 mm, 3.5 μm)色譜柱，流速為0.45 mL/min，進樣時間為5 min。測試顯示人血漿中尼美舒利在1～2 000 ng/mL內(nèi)線性關(guān)系良好，精密度和準確度均在±15%的范圍內(nèi)。該方法可高效、可靠地檢測與分析人血漿中尼美舒利的濃度。

1.7 UPLC-MS/MS檢測毒性除草劑

百草枯屬于一種快速的滅生性除草劑，該物質(zhì)毒性極高、對人體健康危害重大，且無特效解毒藥[34]。馬婧等[35-36]建立了UPLC-MS/MS測定血清中百草枯的檢測方法，并探討了其在大鼠體內(nèi)毒代謝動力學試驗研究。測試表明動力學參數(shù)藥峰濃度 為(46.50±5.11)mg/L，達峰時間為0.167 h，半衰期T1/2為(63.2±16.2)h。該檢測方法靈敏度高、結(jié)果可靠。

2 UPLC-MS/MS應用于動物體內(nèi)化學藥品的檢測

2.1 UPLC-MS/MS檢測頭孢類藥物

貝亦江等[37]開發(fā)了一種UPLC-MS/MS檢測魚肉中頭孢類抗生素的殘留方法。實驗首先采用乙腈提取魚肉基質(zhì)，經(jīng)固相萃取小柱凈化。再采用Accucore C18 RP-MS色譜柱(2.1 mm×100 mm，2.7 μm)，流動相：乙腈、乙酸水溶液，流速：0.4 mL/min，柱溫：30 ℃。外標法檢測表明：頭孢類藥物在0～75 μg/kg范圍內(nèi)線性良好，檢測方法穩(wěn)定可靠。

2.2 UPLC-MS/MS檢測同化激素類藥物

同化激素 ，也被稱為蛋白同化激素，是一種可增強細胞生長與分化能力，促使肌肉擴增，大多數(shù)的同化激素是通過睪酮的活動而產(chǎn)生效用的[38]。目前，豬肉中常常添加該類物質(zhì)來達到快速生長的目的，若豬肉中此類物質(zhì)含量超標，人體長期應用可引起水鈉潴留、有時引起肝內(nèi)毛細膽管膽汁郁積而發(fā)生黃疸、腎炎、心力衰竭和肝功能不良者慎用[39]。張家華等[40]建立了一種安全、高效的UPLC-MS/MS檢測豬肉中睪酮、甲睪酮、黃體酮等多種同化激素的殘留方法。豬肉樣品的預處理方法：在試管中精確稱取2 g勻漿好的肌肉，加入適量的乙酸乙酯，經(jīng)超聲提取、離心，該提取液降溫至-20 ℃下放置1.5 h，體系上清液經(jīng)水浴旋轉(zhuǎn)蒸餾，加定量的30%乙腈溶解即可。在實驗濃度范圍內(nèi)，11種目標分析物的基質(zhì)匹配標準曲線線性良好，該方法靈敏度高，特異性強。

2.3 UPLC-MS/MS檢測廣譜殺蟲劑

氟蟲腈屬于高效、廣譜的苯基吡唑類殺蟲劑，其作用機制在于阻礙昆蟲γ-氨基丁酸控制的氯化物代謝，對害蟲有很高的殺蟲活性，對作物無藥害，同時滅害效果持效期長[41]。徐俊等[42]建立了一種UPLC-MS/MS測定畜禽毛發(fā)中氟蟲腈及代謝物殘留量的方法。動物毛發(fā)經(jīng)1%十二烷基硫酸鈉或5%吐溫80進行預處理，經(jīng)乙腈水混合溶液提取、超聲、分散凈化，檢測結(jié)果說明氟蟲腈及其代謝物在毛發(fā)中線性關(guān)系良好，相對標準偏差均小于6.8%，檢出限和定量限分別為0.2和0.5 μg/kg。

3 UPLC-MS/MS應用于傳統(tǒng)中醫(yī)藥的分析與檢測

3.1 UPLC-MS/MS檢測雷公藤有效成分

雷公藤屬于衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，藥用部分為其根、葉及花，具有殺蟲、消炎、解毒之功效，在炎癥性疾病或自身免疫性疾病中展現(xiàn)出優(yōu)異的臨床價值[43-44]。胡峻等[45]建立了UPLC-MS/MS測定中藥材雷公藤5種有效成分的方法，實驗顯示有效成分在各自線性范圍內(nèi)呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系(r>0.997 8)，加樣回收率在96.72%～103.2%，相對標準偏差(RSD)為1.0%～2.4%。測試結(jié)果同時揭示了不同來源的雷公藤藥材中成分含量差異明顯，須加強該藥材的產(chǎn)品指標控制以保證臨床藥用安全。

3.2 UPLC-MS/MS檢測當歸芍藥散有效成分

當歸芍藥散，出自《金匱要略》，具有養(yǎng)血調(diào)肝，健脾利濕之功效。主治婦人妊娠或經(jīng)期，肝脾兩虛，腹中拘急，綿綿作痛等癥狀[46-47]。宋禎彥等[48]使用UPLC-MS/MS測定當歸芍藥散提取物及含藥血清中3種活性成分含量。以甲醇-水體積比為1∶1溶液溶解，經(jīng)離心、凈化提取物樣品后，稀釋血清樣品，過膜后，使用該方法測定。表明當歸芍藥散中阿魏酸、芍藥苷和茯苓酸在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。此研究方法具有操作簡便、偏差小。

3.3 UPLC-MS/MS檢測白蘇子中黃曲霉毒素

魏俊德等[49-50]建立了UPLC-MS/MS測定中藥白蘇子中黃曲霉毒素G2、G1、B2、B1的方法。試驗樣品首先經(jīng)有機溶劑提取和免疫親和柱凈化，采用Agilent C18(2.1 mm×100 mm,1.8 μm)為色譜柱，流動相為甲醇-[4 mmol/L醋酸銨-0.1%甲酸]水溶液(pH 3.0)，流速0.3 mL/min，質(zhì)譜條件為電噴霧離子源，正離子模式檢測，測試表明黃曲霉毒素G2、G1、B2、B1的定量分析離子m/z分別為331/313、329/243、315/287、313/241，該方法具備靈敏、快速、準確之特點，專屬性強。

3.4 UPLC-MS/MS鑒定與分析清熱涼血方的成分

銀屑病即牛皮癬，屬于一種病程長、易復發(fā)、治愈率低的一種慢性炎癥性皮膚病。中醫(yī)對其治療具有獨特的治療機理和臨床療效，可大大緩解人體癥狀[51-52]。北京中醫(yī)藥大學劉文靜[53]憑借UPLC-MS/MS檢測技術(shù)鑒定了清熱涼血方的成分，同時對其含量進行測試。研究發(fā)現(xiàn)清熱涼血方的成分主要包括落新婦苷、梓醇、綠原酸和對香豆酸，測試條件下各個物質(zhì)的響應度高、分離度好，為清熱涼血方中4種成分的藥代動力學研究提供指導。

4 展望

UPLC-MS/MS檢測分析技術(shù)擁有高效的分離度、靈敏度以及良好的可靠性與耐用性，可增強目標化合物的分析效率與準確度，在化工與醫(yī)藥領(lǐng)域受到很大的青睞。UPLC-MS/MS在人體化學藥品、動物體內(nèi)化學藥品、以及中醫(yī)藥分析與檢測三方面獲得了廣泛的認可與應用，為醫(yī)藥產(chǎn)品檢測與分析、臨床藥物應用、藥物警戒提供了新的指導思路。運用UPLC-MS/MS檢測化學品殘留、中成藥、中藥材是今后的發(fā)展方向。相信UPLC-MS/MS檢測技術(shù)發(fā)展會越來越好。