趙艷嬌，李豐田

（遼寧省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)基地建設(shè)工程中心，遼寧 遼陽 111000）

冰水混合物是水的一種特殊狀態(tài)，其內(nèi)部溫度為0℃，融化成水時需要吸收大量熱量變成同溫度的水，再吸收熱量使水的溫度升高，比0℃水吸收的熱量高；反之，在其轉(zhuǎn)化成冰的過程中，首先需要釋放出大量的熱才能轉(zhuǎn)化為同溫度的冰，然后再釋放熱量使冰的溫度繼續(xù)降低。冰水混合物向兩個方向轉(zhuǎn)化的過程中存在二次吸熱或放熱，其溫度才能夠比其他狀態(tài)時更為穩(wěn)定。利用這一規(guī)律開展了冰水混合物保存絨山羊液態(tài)精液的試驗，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與飼養(yǎng)管理

選用遼寧絨山羊成年公羊3只，采集精液，經(jīng)檢測合格后制成混合精液。根據(jù)《遼寧絨山羊飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)范（Y／T2893—2016）》，在采精前1個月增強(qiáng)公羊的運動，每天運動2次，每次2～3 km／h，飼料精粗比調(diào)整到3∶7，日糧中粗蛋白水平保持在16%。采精期間加喂雞蛋2個、胡蘿卜0.4 kg，每天采精1～2次［1］。

1.2 試驗器材

恒溫水浴鍋1臺、酒精溫度計5支、羊用假陰道3套、雙聯(lián)球1個、調(diào)溫冰箱1臺、500 mL燒杯2個、200 mL燒杯4個、低溫保存柜1臺，200～600倍帶恒溫板的光學(xué)顯微鏡1臺等。

1.3 試驗分組

以4～5℃水保存精液為對照組，以0℃冰水混合物保存精液為試驗組。正式試驗前對所有公羊進(jìn)行為期20 d的排精操作，排除死精子以提高精子活力，每周排精3～4次。3只公羊精液全部達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)（活力≥60%）時開始正式試驗。每次試驗3只公羊的精液均達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)后進(jìn)行混合，以消除公羊個體之間的差異。精液共成功采集3次，每組每次檢測15份，試驗組和對照組分別檢測45份精液。

1.4 保溫介質(zhì)的制備

1.4.1 4～5℃水的制備 將冰箱溫度調(diào)整到4～5℃，再用500 mL燒杯盛裝300 mL水放入冰箱中降溫，直到水溫穩(wěn)定在4～5℃，備用。

1.4.2 0℃冰水混合物的制備 使用干凈塑料袋裝入300 mL水，系嚴(yán)袋口（不漏水）；放入調(diào)溫后的冰箱冷凍區(qū)內(nèi)，冷凍區(qū)的制冷溫度調(diào)到－5℃；待塑料袋中的水一半凍成冰時取出，將冰壓碎，與同溫度的水放入燒杯中，再放入冰箱0℃保鮮區(qū)，放入酒精溫度計，直至冰水混合物的溫度為0℃，備用。

1.5 精液稀釋

精液采集后立即進(jìn)行等溫稀釋（33℃）。精液稀釋液配方：葡萄糖3.0 g，檸檬酸鈉3.0 g，卵黃20 mL，雙蒸水100mL。取精液稀釋液80mL，加青霉素1×105IU、鏈霉素1×105IU［1］。

1.6 精液降溫保存

將稀釋后的精液從集精杯內(nèi)移入同溫度的試管內(nèi)，放入33℃的150 mL溫水中，再放入0℃冰箱中繼續(xù)降溫，當(dāng)水與精液的溫度都達(dá)到0℃時，再放入150 mL 0℃冰水混合物中。

1.7 測定項目及方法

原精稀釋后檢查精子的活動狀態(tài)，測定指標(biāo)包括精子活力、畸形率、存活時間。采用全自動精子分析系統(tǒng)檢測精子活力、畸形率；精子存活時間是指精子處于低溫狀態(tài)時的存活時間，至全部死亡為止。

將0℃冰水混合物保存和4～5℃水保存精液分別放置在0℃、4～5℃低溫保存柜中進(jìn)行鏡檢，去掉顯微鏡恒溫板，觀察精子的活動狀態(tài)。

1.8 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析

組間數(shù)據(jù)采用t檢驗法進(jìn)行檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 精子活動狀態(tài)觀察

0℃冰水混合物保存的精液在0℃恒溫保存柜中鏡檢（顯微鏡、蓋玻片、載玻片提前預(yù)冷至0℃），精子全部處于靜止?fàn)顟B(tài)。4～5℃保存的精液在4～5℃低溫柜中鏡檢發(fā)現(xiàn)，仍有一部分精子在慢速蠕動。說明4～5℃條件下精子仍在消耗能量；0℃條件下精子處于完全休眠狀態(tài)，不消耗能量。

2.2 精液參數(shù)指標(biāo)

結(jié)果見表1。

從表1可以看出，試驗組與對照組的精子畸形率無顯著差異，試驗組低溫存活時間顯著高于對照組。說明0℃冰水混合物保存絨山羊液態(tài)精液的效果好于4～5℃保存。

表1 0℃冰水混合物保存和4～5℃水保存的精液參數(shù)指標(biāo)測定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

1）精液稀釋后低溫保存，低溫環(huán)境能夠降低精子的新陳代謝［2］，減少精子的能量消耗，從而延長精子的存活時間。從本試驗結(jié)果來看，在0℃條件下精子運動才完全停止；而4～5℃條件下精子有微弱的運動，仍在消耗一定的能量，進(jìn)行著新陳代謝。這可能是0℃條件下精子存活時間高于4～5℃的原因之一。

2）以水作為保存精液的介質(zhì)時，0℃冰水混合物的吸熱和放熱緩沖范圍大，導(dǎo)致溫度變化幅度小，溫度變化所需要的時間更長，從而使保存精液的溫度更加具有穩(wěn)定性和安全性，這可能是0℃保存精子存活時間高于4～5℃的原因之二。

3）由于試驗時間和試驗條件的限制，本試驗仍有很多內(nèi)容沒有開展，如在0℃冰、0℃水及其他吸放熱數(shù)值較大的介質(zhì)中保存等，從而決定了本試驗不具有系統(tǒng)性，只是系統(tǒng)試驗的一個組成部分，起到拋磚引玉的作用，需在以后進(jìn)一步開展相關(guān)試驗研究。

4）0℃冰水混合物制作簡單，成本低廉，精液保存效果好，安全系數(shù)高，可在精液運輸、保存時采用。