近日,中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所大豆育種技術(shù)創(chuàng)新與新品種選育創(chuàng)新團隊,利用改造后的CRISPR 基因組編輯系統(tǒng),率先實現(xiàn)了大豆基因的單堿基替換,并獲得了表型穩(wěn)定的純合突變系。該研究是大豆單堿基替換研究工作的首例報道,為精準修飾和利用單核苷酸多態(tài)性(SNP)改良大豆農(nóng)藝性狀提供了新技術(shù)、新方法。相關(guān)研究成果在線發(fā)表在《植物生物技術(shù)雜志(Plant Biotechnology Journal)》上。
據(jù)侯文勝研究員介紹,作為一種簡單有效的基因組編輯工具,CRISPR 已在多種重要作物中實現(xiàn)了基因定點敲除、等位基因單堿基替換和外源DNA 片段定點整合,而在大豆中的成功實踐還很少見。
該研究通過組合Cas9n 切口酶、大鼠胞苷脫氨酶和尿嘧啶糖基化酶抑制劑,建立了大豆單堿基編輯技術(shù)體系,并成功實現(xiàn)了大豆開花調(diào)控關(guān)鍵基因GmFT2a 和GmFT4 的單堿基定向替換,效率分別為18.2%和6.0%。在GmFT2a 靶位點實現(xiàn)了C→T 和C→G 兩種類型的單堿基替換,在GmFT4 靶位點實現(xiàn)了C→G 單堿基替換。單堿基替換突變可穩(wěn)定遺傳,篩選獲得的GmFT2a 單堿基替換純合突變系,在16 小時光照/8 小時黑暗和12 小時光照/12 小時黑暗的2種日照條件下均表現(xiàn)出晚花表型。這是該團隊利用CRISPR 基因組編輯系統(tǒng)率先實現(xiàn)大豆基因定點敲除、DNA 區(qū)段刪除、多基因突變后,在大豆基因組編輯技術(shù)應(yīng)用中取得的新進展,進一步拓展了大豆基因組編輯工具應(yīng)用范圍和農(nóng)藝性狀改良手段。