令狐穎，胡德峰，岳鳳娟，趙汝波，續(xù) 華

(貴州省人民醫(yī)院健康管理體檢中心，貴州 貴陽 550002)

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma， NPC)是起源于鼻咽部上皮細胞的惡性腫瘤，他在我國南方地區(qū)的發(fā)病率呈逐年升高趨勢。亦是一種與遺傳密切相關(guān)的多基因參與、環(huán)境因素影響而形成的惡性腫瘤。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌的發(fā)生也與EB病毒(EBV)的感染十分相關(guān)[1]。盡管鼻咽癌的發(fā)病率在逐年升高，但鼻咽癌的發(fā)病機制仍然不是十分明確。目前臨床上關(guān)于鼻咽癌的診斷主要以針刺活檢進行病理學(xué)檢查為主。隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，對高危人群進行血清EBV-DNA及EBV抗體的檢測也可以作為早期診斷的重要方法。近年來，表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域7(Epidermal growth factor-like domain 7, EGFL7)是內(nèi)皮細胞分泌的特異性因子，EGFL7在內(nèi)皮細胞生長、黏附及血管床結(jié)構(gòu)改變中起到了重要的作用。近幾年來，多項研究發(fā)現(xiàn)EGFL7在喉癌、乳腺癌、肺癌、肝癌及胃癌等腫瘤類型中均高表達[2]。EGFL7作為一個新的腫瘤標(biāo)志物，在肺癌、胃癌等方面的診斷、療效評估研究較多。然而其在鼻咽癌中的診斷作用報道較少。本研究通過對鼻咽癌患者腫瘤轉(zhuǎn)移前后血清中的EGFL7、EBV-DNA和血清病毒衣殼蛋白抗原IgA (viralcapsid antigen-IgA, VCA-IgA) 的水平進行檢測，探討其在鼻咽癌診斷中的意義。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取我院腫瘤科2015年3月～2017年4月在診斷并治療的鼻咽癌復(fù)發(fā)患者38例。所有患者均經(jīng)過病理及鼻內(nèi)鏡確診。其中未轉(zhuǎn)移的患者為20例，轉(zhuǎn)移的患者為18例。另選取我科健康體檢者20例，其中，男10例，女10例，年齡32～50歲，平均(36.5±5.4)歲，將其作為對照組。再選取我院耳鼻喉科治療的人群，且EBV抗體陽性，且未患鼻咽癌的患者30例，如鼻出血、眩暈、耳鳴、耳炎患者等，將其作為EBV陽性組。抽取每名研究對象外周血10 ml，分離血清后置于-70 ℃冰箱中冷凍并保存待檢。

1.2檢測方法：采用艾博抗上海貿(mào)易有限公司的ELISA試劑盒檢測VCA/IgA和EGFL7的表達，并采用北京普朗酶標(biāo)儀進行定量分析，在450 nm波長處檢測吸光度值。結(jié)果判斷：VCA-IgA的測定值S/CO>1.0判定為陽性。EGFL7采用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得到定量結(jié)果。采用廣州達健生物科技有限公司的PCR試劑檢測EBV-DNA水平，擴增EBV基因的BamHI-W片段。當(dāng)擴增結(jié)果>500拷貝/ml為EBV-DNA陽性。

2 結(jié)果

2.1各組EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平的比較：三組患者的EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平如表1所示。可見鼻咽癌組患者的EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平均顯著高于其余兩組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2鼻咽癌轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移之間EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平比較：對鼻咽癌轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移患者之間的EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平進行了分析，結(jié)果顯示，有轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者，其血清EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平均顯著高于未轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。但未轉(zhuǎn)移組上述三個指標(biāo)仍顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 各組EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平比較

表2 鼻咽癌轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移之間EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平比較

2.3三組患者血清VCA-IgA和EGFL7表達水平的相關(guān)分析：三組患者血清VCA-IgA和EGFL7表達水平的相關(guān)分析如表3所示，可見鼻咽癌組患者血清VCA-IgA和EGFL7表達呈顯著正相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而EBV陽性組和對照組患者血清VCA-IgA和EGFL7表達則無明顯相關(guān)性，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表3 各組患者血清VCA-IgA和EGFL7表達水平的相關(guān)分析

3 討論

鼻咽癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，其以低分化的鱗癌為主要病理類型。盡管鼻咽癌的臨床與基礎(chǔ)研究已有數(shù)十年，但其早期癥狀較為復(fù)雜，發(fā)生機制也較為復(fù)雜。EB病毒感染被認(rèn)為是鼻咽癌發(fā)病的重要影響因素之一。當(dāng)患者存在一些鼻咽癌的相關(guān)癥狀和臨床表現(xiàn)時，常采用EB病毒學(xué)檢測來評估患者是否需要進一步確診鼻咽癌。EB病毒血清學(xué)的檢測有助于指導(dǎo)臨床進一步的診斷及治療。VCA-IgA檢測現(xiàn)在仍然作為鼻咽癌血清學(xué)診斷的常規(guī)方法，并廣泛應(yīng)用于鼻咽癌高危人群的篩查[3]。

鼻咽癌的生長、浸潤及轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為與腫瘤細胞自身無限增殖能力有關(guān)，需要從周圍組織中攝取足夠的營養(yǎng)物質(zhì)來維持。在腫瘤生長的早期，營養(yǎng)物質(zhì)可通過擴散等方式來維持腫瘤的生長，但隨著腫瘤體積的不斷增大，這種擴散供能的模式逐漸退化，轉(zhuǎn)而需要新生血管來維持腫瘤生長。

近年來，許多研究表明，新生血管的形成是腫瘤生長、浸潤及轉(zhuǎn)移的必要條件，腫瘤內(nèi)新生血管的形成則為腫瘤細胞進入循環(huán)系統(tǒng)及遠處轉(zhuǎn)移提供了條件[4]。表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域7是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種分泌型蛋白，其結(jié)構(gòu)中包含兩個表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域 (Epidermal growth factor-like domain) 并在進化中高度保守。EGFL7被證實在胚胎血管發(fā)育中起到了重要的作用。近年來的研究發(fā)現(xiàn)EGFL7能夠顯著增強成纖維細胞及內(nèi)皮細胞的運動遷移能力，其在胚胎組織中EGFL7高水平表達，在成熟組織中幾乎不表達，而在腫瘤等增殖性組織中呈高度上調(diào)[5]。

本研究通過對EBV感染常用檢測指標(biāo)和新的腫瘤標(biāo)志物結(jié)合分析發(fā)現(xiàn)，Egfl7蛋白在鼻咽癌的診斷和預(yù)后判斷中具有一定的臨床價值。通過研究發(fā)現(xiàn)鼻咽癌組患者的EGFL7、EBV-DNA和VCA-IgA和水平均顯著高于其余兩組。有轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者，其血清EGFL7、EBV-DNA和VCA-IgA水平均顯著高于未轉(zhuǎn)移的患者。并且在鼻咽癌患者中，其EGFL7與VCA-IgA的水平呈顯著正相關(guān)。孫琦等對鼻咽癌患者治療前后對比研究，認(rèn)為檢測血漿EBV-DNA和VCA-IgA含量對監(jiān)測鼻咽癌患者放療后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移有重要的臨床意義[3-5]。

綜上所述，檢測血清中EBV-DNA和EGFL7蛋白在鼻咽癌的早期診斷，以及EGFL7蛋白判斷鼻咽癌是否轉(zhuǎn)移中有一定價值。EGFL7蛋白是否可以用來作為鼻咽癌的預(yù)后評估指標(biāo)，還需進一步研究。