姚德山，張振剛，龔開(kāi)政

（揚(yáng)州大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇揚(yáng)州225001）

生物體細(xì)胞基因組完整性受到諸多因素的威脅，包括DNA復(fù)制過(guò)程中DNA堿基錯(cuò)配、化學(xué)物質(zhì)產(chǎn)生的堿基加合物（adduct formation）和交叉鏈（cross-links）、紫外線誘導(dǎo)的堿基損傷、電離輻射導(dǎo)致的DNA單鏈或雙鏈斷裂等。DNA雙鏈斷裂（DNA double-strand break，DSB）被認(rèn)為是細(xì)胞毒性最強(qiáng)的DNA損傷。為了維持生物體各種生理性分子生物學(xué)穩(wěn)態(tài)，并將基因組信息完整精確的傳遞給子代，生物體進(jìn)化出精密的DNA損傷修復(fù)途徑，統(tǒng)稱(chēng)為DNA損傷反應(yīng)（DNA damage response，DDR），大多數(shù)情況下可以正確的修復(fù)這些損傷［1］。目前已知的DDR過(guò)程中，首先由磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）相關(guān)激酶（PI3K-related kinase，PIKK）蛋白家族的3個(gè)成員——DNA依賴(lài)性蛋白激酶（DNA-dependent protein kinase，DNA-PK）、ATM（ataxia-telangiectasia mutated）、ATR （ATM and RAD3-related）識(shí)別DNA損傷，通過(guò)激活細(xì)胞周期檢查點(diǎn)減緩或阻滯細(xì)胞周期以保證細(xì)胞有足夠的時(shí)間進(jìn)行DNA損傷修復(fù)，并且啟動(dòng)細(xì)胞信號(hào)級(jí)聯(lián)促進(jìn)DNA修復(fù)。值得注意的是，許多損傷DNA進(jìn)行復(fù)制時(shí)遇到DNA復(fù)制叉，損傷將更加嚴(yán)重，需要額外的DDR來(lái)修復(fù)才能使基因組精確復(fù)制傳遞給子代。而在多細(xì)胞生物中，為了防止?jié)撛谕蛔兗?xì)胞的增殖，具有廣泛DNA損傷的細(xì)胞會(huì)退出細(xì)胞周期，停止增殖或進(jìn)入凋亡程序，從而減少腫瘤和年齡相關(guān)性疾病的發(fā)生。

1 DNA-PK、ATM和ATR的相似性

1.1 結(jié)構(gòu)相似性 ATM、ATR和DNA-PK都是大分子多肽鏈，具有相似的結(jié)構(gòu)域和結(jié)構(gòu)特征。它們的激酶結(jié)構(gòu)域都定位在多肽鏈的C末端，上游連接一段FRAP-ATM-TRRAP（FAT）結(jié)構(gòu)域，下游連接一段PIKK調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域（PIKK regulatory domain，PRD）和FAT C末端（FAT C-terminal，F(xiàn)ATC）模體［2］。在FAT結(jié)構(gòu)域的N端，3種PIKKs形成不同長(zhǎng)度的巨大的螺線管形的HEAT-repeat結(jié)構(gòu)域，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)之間的相互作用［3］。

1.2 功能相似性 在ATM、ATR和DNA-PK的多肽鏈中具有相似的S/T-Q模體，這3種PIKKs都可以發(fā)生自身磷酸化。目前已證實(shí)DNA-PK具有多個(gè)自身磷酸化位點(diǎn)，大多都聚集在HEAT-repeat結(jié)構(gòu)域［4］。在人類(lèi)細(xì)胞中，DNA-PK的自身磷酸化位點(diǎn)S2056和T2609特異性用來(lái)評(píng)價(jià)其激酶活性。雖然DNA-PK激酶的活化并不需要S2056和T2609，但是最近的研究表明這2個(gè)自身磷酸化位點(diǎn)的激活可以引起DNAPK構(gòu)象的改變，促進(jìn)其從DSB位點(diǎn)脫離，從而使DNA末端連接，促進(jìn)DNA損傷修復(fù)［4］；第3個(gè)已知的自身磷酸化位點(diǎn)是T3950，當(dāng)DNA-PK完成磷酸化功能后，T3950位點(diǎn)磷酸化可以滅活DNA-PK的激酶活性［5］。而對(duì)于ATM和ATR的自身磷酸化位點(diǎn)目前有很大的爭(zhēng)議。之前S1981位點(diǎn)被認(rèn)為是ATM的自身磷酸化位點(diǎn)，在機(jī)體發(fā)生DDR時(shí)，該位點(diǎn)的磷酸化可以使ATM從不活躍的二聚體轉(zhuǎn)型成為活躍的單體而參與反應(yīng)［6］，但最近研究認(rèn)為S1981位點(diǎn)并不參與ATM的活化［7］，因此關(guān)于S1981位點(diǎn)的功能及其他ATM自身磷酸化位點(diǎn)的研究仍然有待進(jìn)一步研究。研究發(fā)現(xiàn)T1989是ATR的自身磷酸化位點(diǎn)［8］，但T1989是否在ATR的功能中起主要作用仍然存在爭(zhēng)議。

正常細(xì)胞內(nèi)，PIKKs受到嚴(yán)格監(jiān)管調(diào)控，防止其異常激活導(dǎo)致毒性DNA修復(fù)、細(xì)胞周期停滯、衰老或凋亡。發(fā)生DNA損傷時(shí)，為確保這些激酶被準(zhǔn)確穩(wěn)定地募集到損傷位點(diǎn)，每種激酶都需要一種輔助因子協(xié)助，形成ATM-Nijmegen斷裂綜合征蛋白1（Nijmegen breakage syndrome protein 1，NBS1）［9］、ATR-ATR相互作用蛋白（ATR-interacting protein，ATRIP）［10］和DNA-PK-Ku80［11］。雖然每種激酶的輔助因子都不相同，但NBS1、ATRIP和Ku80都具有相似的C末端模體，與PIKKs上的HEAT-repeat結(jié)構(gòu)域相互作用［9］，確保每種激酶可以被穩(wěn)定地募集到損傷位點(diǎn)。

2 ATM——細(xì)胞內(nèi)DSB反應(yīng)調(diào)節(jié)器

2.1 ATM在DSB中作用機(jī)制 當(dāng)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生DNA雙鏈斷裂時(shí)，首先激活A(yù)TM，使多種底物蛋白磷酸化啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)修復(fù)機(jī)制，包括細(xì)胞周期檢查點(diǎn)活化、DNA修復(fù)、凋亡、衰老、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)改變等［12］。ATM也可以通過(guò)磷酸化激活其他蛋白激酶使更多的底物磷酸化，如ATM可以使細(xì)胞周期檢查點(diǎn)激酶2（checkpoint kinase 2，CHK2）的T68位點(diǎn)磷酸化而激活這條信號(hào)通路［13］。研究［14］發(fā)現(xiàn)，敲減胸腺細(xì)胞中CHK2基因表達(dá)后，細(xì)胞對(duì)紫外線誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡抗性明顯增強(qiáng)；外源性轉(zhuǎn)入野生型CHK2基因可以恢復(fù)細(xì)胞對(duì)紫外線的敏感性，細(xì)胞凋亡增加；當(dāng)外源性轉(zhuǎn)入依賴(lài)ATM/ATR的CHK2磷酸化位點(diǎn)突變的基因后，細(xì)胞對(duì)紫外線的敏感性不能恢復(fù)，損傷的DNA不能被識(shí)別，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生［9］。

發(fā)生DSB時(shí)，活化的ATM通過(guò)與染色體上的MRE11-RAD50-NBS1（MRN）復(fù)合物中NBS1的C末端結(jié)合，被募集到DNA損傷位點(diǎn)［15］。研究發(fā)現(xiàn)，在體外MRN復(fù)合物可以直接激活A(yù)TM激酶活性，參與ATM信號(hào)傳遞［16］。因此我們可以認(rèn)為MRN復(fù)合物既可以募集ATM到DNA損傷位點(diǎn)，又可以在該位點(diǎn)激活A(yù)TM激酶活性。但是MRN激活A(yù)TM的具體機(jī)制目前仍不清楚。

ATM主要參與同源重組（homologous recombination，HR）修復(fù)過(guò)程。發(fā)生DSB后，MRN復(fù)合物被迅速募集到損傷DNA位點(diǎn)，啟動(dòng)DNA末端切除，形成不穩(wěn)定的單鏈DNA（single-stranded DNA，ssDNA），不穩(wěn)定的ssDNA迅速與復(fù)制蛋白A（replication protein A，RPA）結(jié)合，穩(wěn)定ssDNA片段。在BRCA2-DSS1復(fù)合物輔助下募集重組酶RAD51與RPA-ssDNA結(jié)合，在重組酶RAD51的幫助下進(jìn)行同源搜尋，然后侵入同源染色體，以此為模板加工產(chǎn)生位移環(huán)（displacement loop，D-loop）重組中間體，以侵入鏈的3′端作為引物，通過(guò)增殖細(xì)胞核抗原鉗位和DNA聚合酶延伸D-loop，直到DSB的另外一端［17］。

DNA末端切除是DSB選擇HR修復(fù)方式的關(guān)鍵。而與MRN相互作用的蛋白CtIP是這個(gè)過(guò)程啟動(dòng)的關(guān)鍵因素，ATM通過(guò)直接磷酸化CtIP蛋白而啟動(dòng)DNA末端切除［18］。當(dāng)斷裂DNA處形成折疊復(fù)制叉時(shí)，ATM介導(dǎo)的CtIP磷酸化可以及時(shí)將輔助因子Ku從DSB末端切除，使D-loop繼續(xù)延伸，從而使HR的后續(xù)階段繼續(xù)進(jìn)行［19］。雖然如此，但是ATM對(duì)HR并不是不可缺少的，HR在其缺乏的情況下也可以進(jìn)行。

2.2 ATM啟動(dòng)并維持基于染色質(zhì)的DDR信號(hào)傳遞 活化的ATM使組蛋白H2AX的C末端S139位點(diǎn)磷酸化形成γH2AX，啟動(dòng)基于染色質(zhì)的信號(hào)傳遞修飾，包括磷酸化、泛素化和其他轉(zhuǎn)錄后修飾［20］。MDC1（mediator of DNA damage checkpoint 1）可以特異性識(shí)別γH2AX，通過(guò)C末端兩個(gè)串聯(lián)的BRCT（BRCA1 C-terminal）結(jié)構(gòu)域特異性的使γH2AX結(jié)合到DSB位點(diǎn)［21］。ATM可以使MDC1的T4位點(diǎn)磷酸化，使MDC1穩(wěn)定結(jié)合在染色質(zhì)上［22］。CHK2可以使MDC1的S964位點(diǎn)磷酸化，通過(guò)與NBS1上FHA（forkhead-associated）-BRCT結(jié)構(gòu)域識(shí)別，促進(jìn)MDC1-MRN保留在染色質(zhì)上，使γH2AX持續(xù)聚集在損傷位點(diǎn)［23］。MDC1通過(guò)與MRN上NBS1結(jié)合被募集到損傷位點(diǎn)，MRN又可以募集更多的ATM，使更多的γH2AX聚集在損傷位點(diǎn)，形成MDC1-MRN-ATM循環(huán)，使DSB的信號(hào)沿染色質(zhì)擴(kuò)散，增強(qiáng)DDR信號(hào)傳遞。

在DSB位點(diǎn)，ATM使MDC1上T-Q-X-F模體發(fā)生磷酸化，而這個(gè)位點(diǎn)可以被FHA結(jié)構(gòu)域上的泛素連接酶RNF8識(shí)別，因此可以促進(jìn)RNF8聚集到損傷位點(diǎn)［24-25］。在泛素結(jié)合酶UBC13的作用下，RNF8使連接組蛋白H1發(fā)生泛素化修飾，泛素化修飾的組蛋白H1可以被另外一種泛素連接酶RNF168識(shí)別［26］。RNF168可以使組蛋白H2A的K15位點(diǎn)發(fā)生泛素化修飾形成H2AK15Ub，而DDR因子p53結(jié)合蛋白1（p53 binding protein 1，53BP1）借助其泛素化依賴(lài)的招募識(shí)別序列與H2AK15Ub結(jié)合，使機(jī)體選擇非同源末端連接（non-homologous end joining，NHEJ）進(jìn)行DSB修復(fù)［27］。ATM可以使53BP1的N端不同位點(diǎn)發(fā)生磷酸化，募集更多的蛋白質(zhì)，如PTIP和RIF1，形成包含PTIP、RIF1、REV7/MAD2L2等分子的53BP1復(fù)合物，促進(jìn)機(jī)體選擇NHEJ進(jìn)行DSB修復(fù)，但是具體的機(jī)制仍不清楚［28］。而53BP1也能誘導(dǎo)ATM信號(hào)下游分子CHK2的T68位點(diǎn)磷酸化激活DDR信號(hào)通路。

乳腺癌1型易感蛋白（breast cancer type 1 susceptibility protein，BRCA1）由乳腺癌和卵巢癌抑癌基因編碼，可以抑制53BP1的某些功能。發(fā)生DNA損傷時(shí)，ATM可以使BRCA1多個(gè)位點(diǎn)發(fā)生磷酸化，ATM突變會(huì)導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生［29］。BRCA1通過(guò)組成不同的蛋白復(fù)合物參與維持基因組穩(wěn)定的不同過(guò)程，但是它主要的功能是在53BP1調(diào)節(jié)NHEJ功能缺失時(shí)促進(jìn)同源重組修復(fù)［30］。但是53BP1和BRCA1在機(jī)體中維持基因組穩(wěn)定過(guò)程中功能相互拮抗，而ATM如何調(diào)控這些過(guò)程及之后的細(xì)胞周期調(diào)控目前仍不清楚。

3 ATR與DNA復(fù)制應(yīng)激

3.1 ATR調(diào)節(jié)細(xì)胞周期信號(hào) ATR是DNA復(fù)制應(yīng)激反應(yīng)信號(hào)通路的頂端激酶，可以使多種底物蛋白磷酸化，參與損傷修復(fù)。但是與ATM和DNA-PK不同，ATR在正常的細(xì)胞增殖過(guò)程中發(fā)揮重要作用，這就阻礙了ATR在癌癥治療中的開(kāi)發(fā)研究。正常細(xì)胞具有完整的G1和S/G2細(xì)胞周期檢查點(diǎn)，細(xì)胞受到遺傳毒性刺激后，通過(guò)ATM激活G1和S/G2細(xì)胞周期檢查點(diǎn)［31］。而 ATR/細(xì)胞周期檢查點(diǎn)激酶 1（checkpoint kinase 1，CHK1）可以獨(dú)立激活 P38，活化的 P38與CHK1聯(lián)合防止復(fù)制叉失速后的進(jìn)一步分裂［32］。但是腫瘤細(xì)胞缺乏依賴(lài)ATM/P53的G1細(xì)胞周期檢查點(diǎn)的激活，僅能依賴(lài)ATR/CHK激活的S/G2細(xì)胞周期檢查點(diǎn)修復(fù)DNA損傷［31］。因此，抑制腫瘤細(xì)胞中ATR表達(dá)可以加重腫瘤細(xì)胞基因毒性損傷和致死性分裂的累積，而具有功能性G1細(xì)胞周期檢查點(diǎn)的正常細(xì)胞可以不受基因毒性的影響。

在細(xì)胞周期中，ATR可以激活CHK1，磷酸化的CHK1促進(jìn)CDC25A蛋白酶體降解。而CDC25A的主要功能是解除細(xì)胞周期素依賴(lài)性激酶（cyclin-dependent kinase，CDK）的抑制性修飾，使細(xì)胞周期正常運(yùn)行［33］。當(dāng)發(fā)生遺傳毒性應(yīng)激時(shí)，ATR激活CHK1，使CDC25A蛋白酶體降解，減弱CDK的活性，減緩或阻止細(xì)胞周期進(jìn)展，使細(xì)胞有充足的時(shí)間進(jìn)行DNA修復(fù)，不會(huì)過(guò)早進(jìn)入有絲分裂；若損傷嚴(yán)重，可以激活細(xì)胞衰老或凋亡途徑。因此ATR-CHK1-CDC25A通路對(duì)細(xì)胞存活至關(guān)重要［34］。

除了防止細(xì)胞過(guò)早進(jìn)入有絲分裂，ATR可以通過(guò)多種機(jī)制參與調(diào)節(jié)DNA復(fù)制體的穩(wěn)定性。首先，ATR通過(guò)抑制CDK活性，抑制復(fù)制起點(diǎn)啟動(dòng)，有效避免修復(fù)因子的過(guò)度消耗，尤其是RPA［35］；其次，SMARCAL1參與形成的復(fù)制叉可以被SLX4/MUS81核酸酶復(fù)合物識(shí)別切割，破壞復(fù)制叉的穩(wěn)定，而ATR可以直接靶向SMARCAL1，限制它的螺旋酶的活性，防止復(fù)制叉的破壞［36］；再者，發(fā)生DNA損傷后，ATR通過(guò)上調(diào)核糖核苷酸還原酶亞基RRM2的表達(dá)，調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物細(xì)胞脫氧核糖核苷酸的可利用性［37］。

3.2 ATR的活化機(jī)制 ATM和DNA-PK是由DSB激活，但是細(xì)胞中只要發(fā)生遺傳毒性應(yīng)激就可以激活A(yù)TR。這是因?yàn)閾p傷DNA的各種核溶解產(chǎn)物和未結(jié)合在停滯復(fù)制叉上的解旋酶-聚合酶都可以產(chǎn)生大量的RPA，RPA包裹ssDNA形成RPA-ssDNA復(fù)合物，使ssDNA趨于穩(wěn)定［38］。而ATR通過(guò)與其伴侶蛋白ATRIP結(jié)合，可以延伸RPA包裹ssDNA，促進(jìn)修復(fù)過(guò)程［10］。

僅靠RPA-ssDNA募集ATR并不能完全激活A(yù)TR的激酶活性，還需要輔助因子和ssDNA-雙鏈DNA（double-stranded DNA，dsDNA）連接結(jié)構(gòu)輔助。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶結(jié)合蛋白1（DNA topoisomerasebinding protein 1，TopBP1）是最主要的輔助因子，通過(guò)與ATRIP及ATR上PRD結(jié)構(gòu)域的C端連接，特異性激活A(yù)TR激酶活性［39］。與ATR功能相似，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，TopBP1缺失或其激活A(yù)TR激酶活性的結(jié)構(gòu)域突變時(shí)都是致死性的［40］。TopBP1可以與環(huán)狀三聚體RAD9-RAD1-HUS1（9-1-1）復(fù)合物上RAD9亞基C末端結(jié)合，該復(fù)合物通過(guò)與RAD17-RFC結(jié)合定位到RPA-ssDNA/dsDNA連接處［10］。與此相似，MRN和BLM也參與 TopBP1的募集［41］。因此，TopBP1被募集到DNA損傷位點(diǎn)的機(jī)制是復(fù)雜的，在細(xì)胞周期不同階段需要大量不同的蛋白直接相互作用。

ETAA1是新近發(fā)現(xiàn)的另一種ATR激活蛋白，它含有與TopBP1相似的ATR激活結(jié)構(gòu)域［42］。與TopBP1不同的是，ETAA1可以直接與RPA結(jié)合，被募集到RPA-ssDNA處，激活A(yù)TR。因此可以推測(cè)，TopBP1和ETAA1可以被募集到不同類(lèi)型的損傷DNA位點(diǎn)，激活A(yù)TR激酶活性。

4 DNA-PK啟動(dòng)NHEJ促進(jìn)DNA損傷修復(fù)

在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，DNA雙鏈斷裂損傷主要通過(guò)NHEJ進(jìn)行修復(fù)，只有遇到DNA復(fù)制叉時(shí)才優(yōu)先選擇HR修復(fù)。在淋巴系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中，免疫球蛋白和T細(xì)胞受體位點(diǎn)會(huì)發(fā)生DSB，以便于產(chǎn)生免疫受體多樣性，這些DSB數(shù)量多，因此選擇修復(fù)效率高的NHEJ進(jìn)行修復(fù)［43］。NHEJ進(jìn)行損傷 DNA修復(fù)時(shí)不需要模板，所以被認(rèn)為錯(cuò)誤率高，易導(dǎo)致突變，但實(shí)際上NHEJ也是一種精確且高效的修復(fù)方式［44］。

當(dāng)發(fā)生DSB時(shí)，DNA-PK在Ku80的輔助下被募集到DSB處，啟動(dòng)并促進(jìn)非同源末端連接［4］。但是DNA-PK是通過(guò)自身磷酸化參與NHEJ過(guò)程，還是通過(guò)使其他蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化激活信號(hào)通路，目前仍不確定。有研究發(fā)現(xiàn)抑制DNA-PK活性雖然并不能阻止其下游分子如LIG4的募集，但是會(huì)阻斷損傷DNA末端的連接［45］。

5 ATM、ATR和DNA-PK之間的聯(lián)系

DNA損傷誘導(dǎo)的G1/S、S期和G2/M的檢查點(diǎn)信號(hào)相似，這3個(gè)檢查點(diǎn)的目的都是抑制CDK的活性，延緩或阻止細(xì)胞周期進(jìn)行。而DSB在G1期沒(méi)有被切除，不會(huì)產(chǎn)生大量的RPA-ssDNA，不能被ATR激活，因此認(rèn)為G1/S檢查點(diǎn)主要由ATM調(diào)控；而S期、G2/M期，ATM可以切除DNA末端，形成RPA-ssDNA復(fù)合物，募集激活A(yù)TR［46］。這種依賴(lài)ATM的ATR的激活是PIKK家族成員之間功能相輔相成的一個(gè)重要例子。之前討論到ATM和ATR可以激活DNA-PK，參與DNA損傷修復(fù)，最近研究表明DNA-PK是非同源末端連接途徑的組成部分，通過(guò)ATM的磷酸化負(fù)性調(diào)節(jié)ATM的活性［47］。

6 小分子抑制劑

在腫瘤發(fā)生早期，致癌基因誘導(dǎo)的復(fù)制應(yīng)激或端?？s短等DNA損傷可以激活DDR，表明PIKK信號(hào)激活導(dǎo)致的細(xì)胞周期停滯或細(xì)胞死亡可以作為腫瘤發(fā)生的屏障［48］。人ATM基因突變導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，細(xì)胞逃避正常的凋亡程序，腫瘤的發(fā)生率明顯增加［49］。腫瘤細(xì)胞具有迅速無(wú)限增殖、基因組不穩(wěn)定的特性，更加容易受到復(fù)制應(yīng)激、外源性DNA損傷的影響，這很大程度上解釋了放射治療和各種DNA損傷化療對(duì)腫瘤治療的療效，并解釋了新出現(xiàn)的DDR酶抑制劑的抗腫瘤特性［50］。目前已有多種小分子抑制劑作用于PIKK家族成員，并已作為單藥或與放療/化療聯(lián)合進(jìn)行Ⅰ期或Ⅱ期臨床試驗(yàn)［51］。ATR是一個(gè)理想的抗癌治療靶標(biāo)，因?yàn)榘┘?xì)胞復(fù)制頻率高，更加依賴(lài)ATR的激酶活性促進(jìn)癌細(xì)胞存活，這為ATR抑制劑在多種類(lèi)型的癌癥中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)，也解釋了ATR本身雖然能夠維持基因組穩(wěn)定性，但并不是一個(gè)強(qiáng)的腫瘤抑制劑，不能抑制癌細(xì)胞的生存［52］。許多腫瘤基因組不穩(wěn)定是由某些DNA修復(fù)途徑（如HR）缺陷引起的，這為抗腫瘤治療提供了一個(gè)新的思路。當(dāng)細(xì)胞中某條信號(hào)通路被阻斷，細(xì)胞就會(huì)更加依賴(lài)另一個(gè)信號(hào)通路。在HR功能缺陷的腫瘤細(xì)胞中，腫瘤細(xì)胞對(duì)多腺苷二磷酸核糖聚合酶［poly（ADP-ribose）polymerase，PARP］抑制劑的敏感性明顯增加［53］。值得注意的是，當(dāng)ATM和其他DDR因子缺失時(shí)，腫瘤細(xì)胞對(duì)PARP抑制劑的敏感性明顯增加［54］。

7 展望

雖然發(fā)現(xiàn)ATM、ATR和DNA-PK已有20多年，我們對(duì)他們的認(rèn)識(shí)有了長(zhǎng)足的長(zhǎng)進(jìn)，但是仍然有許多問(wèn)題并不清楚，其中最關(guān)鍵的是對(duì)DDR-PIKK的精密結(jié)構(gòu)仍不清楚。新興技術(shù)，如超分辨率顯微鏡、低溫電子顯微鏡、CRISPR-Cas9和高通量測(cè)序等，無(wú)疑將幫助我們解決這些問(wèn)題。隨著PIKK抑制劑的發(fā)現(xiàn)，我們將進(jìn)一步的了解正常細(xì)胞和患病細(xì)胞中PIKK的功能，從而尋找更好的方法治療癌癥、基因組不穩(wěn)定或PIKK功能異常的疾病。