劉 敏 李 濤 吳克軍 劉增虎 羅順高 廖鵬飛 董占鵬

(云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所，云南蒙自 661101)

家蠶是一種經(jīng)過(guò)人工馴化并具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的昆蟲(chóng)，也是鱗翅目昆蟲(chóng)的模式生物，但其在飼養(yǎng)過(guò)程中經(jīng)常面臨病毒、細(xì)菌和真菌等多種病原的威脅。家蠶核型多角體病毒病，俗稱血液型膿病，由家蠶感染核型多角體病毒(Bombyxmorinucleopolyhedro virus，BmNPV)引發(fā)，一直是蠶業(yè)生產(chǎn)上危害最嚴(yán)重的病害之一，引起的蠶繭損失占蠶病損失總量的60%以上，而且其傳染性極強(qiáng)，一旦發(fā)病常給蠶桑生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。培育抗BmNPV蠶品種是應(yīng)對(duì)該病威脅最經(jīng)濟(jì)有效而又綠色環(huán)保的防病措施。

華康2號(hào)是中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所以秋豐、白玉為基礎(chǔ)蠶品種，通過(guò)導(dǎo)入對(duì)BmNPV具有高度耐受性的基因而育成的夏秋用家蠶新品種[2-3]，該品種對(duì)BmNPV多角體的半致死濃度(LC50)值超過(guò)109個(gè)/mL，比常規(guī)蠶品種對(duì)BmNPV多角體的LC50值高3～4個(gè)數(shù)量級(jí)，現(xiàn)已通過(guò)貴州省、廣西壯族自治區(qū)、河南省農(nóng)作物品種審定。華康2號(hào)已在浙江省海寧市[4]、陜西省勉縣[5]、貴州省黃平縣[6]、貴州省畢節(jié)市[7]、重慶市涪陵區(qū)[8]、貴州省清鎮(zhèn)市[9]、四川省宜賓縣[10]等地的蠶區(qū)完成了試養(yǎng)試驗(yàn)，表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗血液型膿病能力和地方適應(yīng)性。血液型膿病在云南省大部分蠶區(qū)均不同程度地暴發(fā)過(guò)，據(jù)調(diào)查，平均發(fā)病率在5.0%左右[11]，嚴(yán)重的蠶區(qū)發(fā)病率超過(guò)12.8%[12]，是導(dǎo)致云南省盒種產(chǎn)繭量偏低的主要原因。為解決這一問(wèn)題，2014年云南省部分蠶區(qū)開(kāi)始引進(jìn)華康2號(hào)進(jìn)行試養(yǎng)。本研究于2015年，對(duì)引進(jìn)的華康2號(hào)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行了抗性測(cè)定，并在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、沾益縣、保山市及元陽(yáng)縣等蠶區(qū)的農(nóng)村基點(diǎn)進(jìn)行了比較試驗(yàn)，旨在進(jìn)一步分析評(píng)價(jià)該品種的抗病力和經(jīng)濟(jì)性狀表現(xiàn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試蠶品種 試驗(yàn)蠶品種華康2號(hào)(正反交)，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所提供；對(duì)照蠶品種菁松×皓月(正反交)，由云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所提供。

1.1.2 病毒來(lái)源 BmNPV為云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所收集于云南省蒙自市草壩鎮(zhèn)蠶區(qū)，病毒原液的病毒多角體濃度為1.21×109個(gè)/mL。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 華康2號(hào)對(duì)BmNPV的抗性檢測(cè) 2015年秋季在云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所品種選育實(shí)驗(yàn)室，以華康2號(hào)為試驗(yàn)蠶品種，菁松×皓月為對(duì)照蠶品種，進(jìn)行蠶品種對(duì)BmNPV的抗性檢測(cè)試驗(yàn)，每個(gè)蠶品種的正反交分別調(diào)查。試驗(yàn)設(shè)定5級(jí)濃度梯度及1個(gè)空白對(duì)照，各級(jí)濃度梯度以6倍依次向下逐級(jí)稀釋，華康2號(hào)最高病毒多角體添毒濃度為1.21×109個(gè)/mL，菁松×皓月最高病毒多角體添毒濃度低于華康2號(hào)1個(gè)數(shù)量級(jí)，為1.21×108個(gè)/mL；每個(gè)病毒多角體添毒濃度各設(shè)3個(gè)重復(fù)試驗(yàn)小區(qū)，每區(qū)飼養(yǎng)50頭家蠶。2齡起蠶添毒，每區(qū)添食0.2 mL病毒液，將0.2 mL病毒液均勻涂抹在直徑為1 cm的5片桑葉上進(jìn)行添食，以0.2 mL滅菌水均勻涂抹在直徑為1 cm的5片桑葉上進(jìn)行添食作為空白對(duì)照，待家蠶把帶毒桑葉食盡后再飼喂新鮮的普通無(wú)毒桑葉，3齡第3天調(diào)查血液型膿病發(fā)病率，采用SPSS20.0軟件計(jì)算LC50[13]。

1.2.2 華康2號(hào)農(nóng)村基點(diǎn)飼養(yǎng)比較試驗(yàn) 2015年春季分別在云南省陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、沾益縣、保山市及元陽(yáng)縣等地以菁松×皓月為對(duì)照蠶品種，開(kāi)展華康2號(hào)的飼養(yǎng)比較試驗(yàn)。在相同環(huán)境條件下飼養(yǎng)試驗(yàn)蠶品種華康2號(hào)和對(duì)照蠶品種菁松×皓月，每個(gè)品種正反交分開(kāi)飼養(yǎng)，4齡時(shí)每個(gè)品種正反交各設(shè)置4個(gè)重復(fù)試驗(yàn)小區(qū)，每區(qū)飼養(yǎng)400頭家蠶。飼養(yǎng)過(guò)程中調(diào)查4齡、5齡期病死蠶頭數(shù)。分區(qū)上蔟，采繭后調(diào)查每區(qū)蔟中病死蠶、不結(jié)繭蠶、薄皮繭、上繭、下繭、雙宮繭數(shù)以及產(chǎn)繭量和盒種產(chǎn)繭量，削繭調(diào)查全繭量、繭層量并計(jì)算繭層率。調(diào)查結(jié)束后每個(gè)品種正反交混合抽樣1.6 kg，送蒙自市鴻雁繭絲綢有限公司進(jìn)行絲質(zhì)檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 “華康2號(hào)”對(duì)BmNPV的抗性檢測(cè)情況

從圖1可以看出，BmNPV多角體添毒濃度為1.21×109個(gè)/mL時(shí)，試驗(yàn)蠶品種華康2號(hào)正交、反交的發(fā)病率分別為41.33%、37.33%，都低于50%；對(duì)照蠶品種菁松×皓月和皓月×菁松在BmNPV多角體添毒濃度為3.35×106個(gè)/mL時(shí)，發(fā)病率就分別達(dá)到了72.00%和74.00%，遠(yuǎn)高于50%。對(duì)調(diào)查的數(shù)據(jù)進(jìn)行LC50分析，從表1可以看出，華康2號(hào)正交、反交對(duì)BmNPV多角體的LC50值都達(dá)到了109數(shù)量級(jí)，菁松×皓月和皓月×菁松對(duì)BmNPV多角體的LC50值只有105數(shù)量級(jí)，華康2號(hào)(正反交)對(duì)BmNPV多角體的LC50值比菁松×皓月(正反交)對(duì)BmNPV多角體的LC50值高出4個(gè)數(shù)量級(jí)，表明華康2號(hào)對(duì)BmNPV多角體的抗性遠(yuǎn)強(qiáng)于菁松×皓月。

圖1 華康2號(hào)不同BmNPV多角體添食濃度的發(fā)病率

表1 華康2號(hào)對(duì)BmNPV多角體的半致死濃度(LC50)

2.2 華康2號(hào)農(nóng)村基點(diǎn)試驗(yàn)的飼養(yǎng)成績(jī)

試驗(yàn)蠶品種華康2號(hào)在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、沾益縣、保山市及元陽(yáng)縣6個(gè)農(nóng)村基點(diǎn)飼養(yǎng)。從表2可以看出，與對(duì)照蠶品種菁松×皓月相比，試驗(yàn)蠶品種華康2號(hào)在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、沾益縣4個(gè)基點(diǎn)飼養(yǎng)時(shí)5齡經(jīng)過(guò)及全齡經(jīng)過(guò)都比菁松×皓月短；全繭量在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣3個(gè)基點(diǎn)都比菁松×皓月高，在沾益縣比菁松×皓月稍低，最高為2.190 g(鶴慶縣)，最低為1.561 g(沾益縣)；繭層量和繭層率除了陸良縣的稍高于菁松×皓月外，其余地方均略低于菁松×皓月；蟲(chóng)蛹率普遍比菁松×皓月高(沾益縣華康2號(hào)因?yàn)榘l(fā)生少量細(xì)菌病，導(dǎo)致其蟲(chóng)蛹率只有95.98%，比菁松×皓月的99.17%低)；萬(wàn)蠶收繭量在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣都比菁松×皓月高，在鶴慶縣最高，為22.12 kg，在沾益縣比菁松×皓月稍低。從農(nóng)村基點(diǎn)的飼養(yǎng)成績(jī)可以看出，華康2號(hào)在各試驗(yàn)基點(diǎn)的產(chǎn)繭量和強(qiáng)健性都表現(xiàn)出了一定的優(yōu)勢(shì)，但由于試驗(yàn)農(nóng)戶都沒(méi)遇到血液型膿病暴發(fā)的情況，所以華康2號(hào)抗BmNPV的特性和優(yōu)勢(shì)在這4個(gè)試驗(yàn)基點(diǎn)表現(xiàn)得不明顯。

表2 華康2號(hào)在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、沾益縣農(nóng)村基點(diǎn)試驗(yàn)的飼養(yǎng)成績(jī)

祥云縣由于實(shí)驗(yàn)戶及調(diào)查人員疏忽實(shí)驗(yàn)區(qū)片遺失，未調(diào)查死籠率及蟲(chóng)蛹率。

在保山市和元陽(yáng)縣開(kāi)展品種農(nóng)村基點(diǎn)飼養(yǎng)試驗(yàn)時(shí)不同程度地遇到了血液型膿病，從表3可以看出，在保山市試驗(yàn)蠶品種華康2號(hào)的盒種產(chǎn)繭量達(dá)到55.0 kg， 而對(duì)照蠶品種菁松×皓月只有38.6 kg，華康2號(hào)比菁松×皓月的盒種產(chǎn)繭量增加了42.5%；在元陽(yáng)縣華康2號(hào)的盒種產(chǎn)繭量為31.5 kg，而菁松×皓月只有22.3 kg，華康2號(hào)的盒種產(chǎn)繭量比菁松×皓月增加了41.3%，所以在血液型膿病暴發(fā)的地區(qū)飼養(yǎng)華康2號(hào)其抗病增產(chǎn)優(yōu)勢(shì)更為明顯。

表3 華康2號(hào)在保山市及元陽(yáng)縣農(nóng)村基點(diǎn)試驗(yàn)的飼養(yǎng)成績(jī)

蠶繭價(jià)格為39元/kg。元陽(yáng)縣只調(diào)查了2個(gè)品種的產(chǎn)量及產(chǎn)值，未調(diào)查全齡經(jīng)過(guò)和公斤繭顆數(shù)等數(shù)據(jù)。

2.3 華康2號(hào)農(nóng)村基點(diǎn)試驗(yàn)蠶繭的繅絲成績(jī)

試驗(yàn)蠶品種華康2號(hào)在云南省陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、沾益縣、保山市及元陽(yáng)縣等農(nóng)村基點(diǎn)開(kāi)展了試驗(yàn)示范并收集樣繭進(jìn)行絲質(zhì)檢測(cè)(其中沾益縣的樣繭遺失，元陽(yáng)縣未收集樣繭，故沾益縣和元陽(yáng)縣未進(jìn)行絲質(zhì)檢測(cè))。從表4可以看出，華康2號(hào)的上車?yán)O率在幾個(gè)農(nóng)村基點(diǎn)都比對(duì)照蠶品種菁松×皓月高，在保山市的上車?yán)O率為97.02%，比菁松×皓月的93.81%高3.21個(gè)百分點(diǎn)；從陸良縣的蠶繭絲質(zhì)成績(jī)可以看出，華康2號(hào)的繭層率、粒繭質(zhì)量、繭絲長(zhǎng)、解舒絲長(zhǎng)、解舒率都比菁松×皓月高，只是繭絲纖度比菁松×皓月稍粗，表現(xiàn)出一定的優(yōu)勢(shì)；從鶴慶縣、祥云縣和保山市的蠶繭絲質(zhì)成績(jī)可以看出，華康2號(hào)的繭層率、粒繭質(zhì)量、繭絲長(zhǎng)、解舒絲長(zhǎng)、解舒率與菁松×皓月相差不大，繭絲質(zhì)相當(dāng)。

表4 華康2號(hào)在陸良縣、鶴慶縣、祥云縣、保山市農(nóng)村基點(diǎn)試驗(yàn)蠶繭的絲質(zhì)鑒定成績(jī)

由于祥云縣及保山市樣繭為當(dāng)?shù)乜壗z廠檢查，有些數(shù)據(jù)未進(jìn)行調(diào)查。

3 小結(jié)與討論

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的抗性測(cè)定結(jié)果表明，試驗(yàn)蠶品種華康2號(hào)(正反交)對(duì)BmNPV多角體的LC50值均達(dá)到109數(shù)量級(jí)，較對(duì)照蠶品種菁松×皓月高出4個(gè)數(shù)量級(jí)，這與徐安英等[1]的試驗(yàn)結(jié)果一致，說(shuō)明華康2號(hào)具有較強(qiáng)的抗血液型膿病能力。在保山市等地試養(yǎng)，剛好遇到血液型膿病暴發(fā)，華康2號(hào)較少發(fā)生血液型膿病，產(chǎn)量穩(wěn)定，盒種產(chǎn)繭量最高，比菁松×皓月高出40%以上，抗血液型膿病優(yōu)勢(shì)非常明顯。在沒(méi)有血液型膿病發(fā)生的地區(qū)試養(yǎng)，與菁松×皓月相比，華康2號(hào)蠶繭偏小，產(chǎn)量略低，未能表現(xiàn)出其抗血液型膿病的優(yōu)勢(shì)。但是為了整個(gè)蠶區(qū)的穩(wěn)產(chǎn)，保山市蠶區(qū)自2016年開(kāi)始已經(jīng)全面推廣華康2號(hào)；陸良縣也于2017年引進(jìn)了華康2號(hào)原種，加大了該品種在陸良縣的推廣力度，2017年生產(chǎn)的幾萬(wàn)盒華康2號(hào)蠶種在當(dāng)?shù)爻霈F(xiàn)了供不應(yīng)求的局面，可見(jiàn)在血液型膿病多發(fā)、華康2號(hào)表現(xiàn)明顯抗病增產(chǎn)優(yōu)勢(shì)的地區(qū)，華康2號(hào)受到了廣大蠶農(nóng)的普遍歡迎。本研究結(jié)果表明，華康2號(hào)抗血液型膿病能力強(qiáng)，經(jīng)濟(jì)性狀總體表現(xiàn)較好，在血液型膿病發(fā)生較多的季節(jié)和蠶區(qū)推廣應(yīng)用，其品種的抗病增產(chǎn)優(yōu)勢(shì)更為明顯，建議擴(kuò)大其在云南省的推廣應(yīng)用。