丁 飛 李師師 匡利平

（佳和農(nóng)牧股份有限公司， 湖南長沙 410016）

樣品采集是非洲豬瘟疫病監(jiān)測(cè)過程中十分重要的一項(xiàng)內(nèi)容，樣品的質(zhì)量好壞會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果。為保證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，本文從檢測(cè)樣品的采樣前準(zhǔn)備、采樣方法、樣品采集與處理、樣品的保存與運(yùn)輸?shù)燃夹g(shù)環(huán)節(jié)進(jìn)行介紹，以供廣大畜牧獸醫(yī)工作者參考和借鑒。

1 采樣原則

非洲豬瘟的采樣需要關(guān)注以下4 個(gè)方面：①樣本來源全面；②采樣方式安全可靠；③采樣時(shí)間間隔科學(xué)合理；④采樣數(shù)量分批分段。

1.1 樣本來源

非洲豬瘟威脅時(shí)期，檢測(cè)對(duì)象不僅包括豬只，還應(yīng)包括豬場(chǎng)環(huán)境（如大門、走廊、用具、欄舍、出豬臺(tái)等），場(chǎng)內(nèi)工作人員及外來人員、車輛、物資等，通過全方位無死角嚴(yán)格監(jiān)控，讓PCR 檢測(cè)結(jié)果充當(dāng)“顯微鏡”“放大鏡”。樣本來源一般可分為豬只、環(huán)境、人員、車輛、物資等5 大類。

1.2 采樣方式

豬只樣本采集主要包括鼻拭子、豬血液、唾液、組織等，環(huán)境、車輛、人員、物資的采樣可通過棉拭子蘸取生理鹽水后采樣。

1.3 采樣時(shí)間間隔

非洲豬瘟病毒感染的潛伏期為4～19 d，如果在日常監(jiān)測(cè)過程中血液樣本中沒有檢出非洲豬瘟病毒陽性，并不代表豬群絕對(duì)安全，有可能正處于疾病潛伏階段，建議在豬群正常的情況下，采集豬的唾液樣本進(jìn)行PCR檢測(cè)，每隔21 d 采樣檢測(cè)1 次。

1.4 采樣數(shù)量及采樣頻率

不同監(jiān)測(cè)類別、采樣對(duì)象、樣品類型及采樣時(shí)間見表1。

2 采樣前的準(zhǔn)備和采樣

檢測(cè)非洲豬瘟病毒需要采集的樣本一般分為棉拭子樣本和非棉拭子樣本2 大類，從外部環(huán)境、車輛、人員、物資采集的樣本多為棉拭子樣本；檢測(cè)豬只時(shí)，采集的樣本有棉拭子、血樣、唾液、組織等。

表1 不同監(jiān)測(cè)類別、 采樣對(duì)象、 樣品類型及采樣時(shí)間

2.1 采樣前準(zhǔn)備

2.1.1 采樣人員準(zhǔn)備

采樣人員必須洗手消毒，戴上一次性PE 手套、一次性口罩，穿上一次性防護(hù)服、一次性鞋套，帶上采樣所需的所有物品到達(dá)洗消點(diǎn)。

2.1.2 采樣物品準(zhǔn)備

醫(yī)用無菌棉簽、裝有生理鹽水的1.5 mL 離心管、真空采血管、不褪色油性記號(hào)筆、離心管盒、手術(shù)剪、鑷子、75%酒精棉球、噴壺、樣品箱、樣品密封袋、冰袋、消毒桶等。

2.2 采樣方法

2.2.1 環(huán)境樣本

不同環(huán)境樣本采樣點(diǎn)/區(qū)域及采樣后處理方法見表2。

2.2.2 人員樣本

人員樣本采樣點(diǎn)/區(qū)域、采樣方法及采樣后處理方法見表3。

2.2.3 車輛及駕駛?cè)藛T采樣

車輛及駕駛?cè)藛T采樣點(diǎn)/區(qū)域、采樣方法及采樣后處理方法見表4。

2.2.4 豬群的采樣

豬群采樣點(diǎn)/區(qū)域、采樣方法見表5。

2.2.5 物資樣本

物資樣本采樣點(diǎn)/區(qū)域、采樣方法及采樣后處理方法見表6。

表2 不同環(huán)境樣本采樣點(diǎn)/區(qū)域及采樣后處理方法

表3 人員樣本采樣點(diǎn)/區(qū)域、 采樣方法及采樣后處理方法

表4 車輛及駕駛?cè)藛T采樣點(diǎn)/區(qū)域、 采樣方法及采樣后處理方法

表5 豬群采樣點(diǎn)/區(qū)域、 采樣方法

表6 物資樣本采樣點(diǎn)/區(qū)域、 采樣方法及采樣后處理方法

3 樣品的保存和運(yùn)輸

樣品采集后須以最快最直接的途徑送往實(shí)驗(yàn)室。如果樣品能在采集后24 h 內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，則可放在4℃左右的容器中運(yùn)送。若在24 h 內(nèi)不能將樣品送往實(shí)驗(yàn)室，需將樣品放置于 -20℃以下凍結(jié)保存數(shù)小時(shí)后再送檢，并且保證運(yùn)輸過程中的低溫狀態(tài)（可將樣品放置于含有冰袋的保溫箱或泡沫箱中密封）。