方志軍

摘要：目的 ?觀察應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)法檢測(cè)乙肝病毒DNA的效果，為臨床提高診斷乙型肝炎病毒的準(zhǔn)確性提供思路。方法 ?選取2015年11月～2018年7月于本院就診的458例乙型肝炎患者作為研究對(duì)象，所有患者均經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)的abbot藥盒檢測(cè)確診，其中大三陽(yáng)患者241例，小三陽(yáng)患者217例。患者入院后均采集空腹靜脈血，制樣本后采用酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)法和實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)，比較兩種檢驗(yàn)方法對(duì)患者乙肝類(lèi)型的陽(yáng)性檢出率。結(jié)果 ?實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)法對(duì)大三陽(yáng)的陽(yáng)性檢出率為95.43%，小三陽(yáng)的陽(yáng)性檢出率為69.58%，均高于酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)法的85.06%、55.76%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 ?實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)法可直觀的反映乙型肝炎病情狀況，具有較高的診斷效果，臨床醫(yī)師可在實(shí)際工作中根據(jù)患者經(jīng)濟(jì)、病情等綜合因素進(jìn)行選用。

關(guān)鍵詞：實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn);乙肝病毒DNA;酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)法;乙型肝炎

中圖分類(lèi)號(hào)：R446.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.22.062

文章編號(hào)：1006-1959（2019）22-0175-03

Evaluation of the Effect of Real-time Fluorescent PCR on Detection of Hepatitis B Virus DNA

FANG Zhi-jun

（1.Department of Clinical Laboratory，the Fourth Hospital of Huangshi，Huangshi 435006，Hubei，China;

2.Yiyang Medical Laboratory Of Huangshi，Huangshi 435006，Hubei，China）

Abstract：Objective ?To observe the effect of real-time fluorescent PCR assay for detecting hepatitis B virus DNA， and to provide ideas for clinical improvement of hepatitis B virus accuracy. Methods ?A total of 458 patients with hepatitis B who were admitted to our hospital from November 2015 to July 2018 were enrolled in the study. All patients were diagnosed by standard abbot kit. Among them， 241 patients with Dasanyang patients and 217 patients with Xiaosanyang patients. example. Fasting venous blood was collected from all patients after admission. After the samples were prepared， enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and real-time fluorescent PCR were used to compare the positive detection rates of the two test methods for patients with hepatitis B type. Results ?The positive detection rate of Dasanyang by real-time fluorescent PCR assay was 95.43%， and the positive detection rate of Xiaosanyang was 69.58%. Both were higher than 85.06% and 55.76% of the enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA），the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion ?Real-time fluorescent PCR assay can directly reflect the status of hepatitis B， and has a high diagnostic effect. Clinicians can choose according to the comprehensive factors such as patient's economy and condition in actual work.

Key words：Real-time fluorescent PCR test;Hepatitis B virus DNA;Enzyme-linked immunosorbent assay;Hepatitis B

近年來(lái)，隨著乙型肝炎（viral hepatitis type B）患者比例在世界各地的不斷增長(zhǎng)，使得乙肝疾病的診療受到越來(lái)越多的關(guān)注和重視。乙肝作為臨床常見(jiàn)的一類(lèi)慢性肝炎，具有較高的感染率和轉(zhuǎn)化率，患者感染乙肝病毒后，隨著肝臟炎性反應(yīng)過(guò)程的進(jìn)行可能發(fā)展為肝硬化或肝癌，對(duì)患者生命安全造成嚴(yán)重威脅，故需要在臨床中采用具有較高檢出率的方法對(duì)患者予以診斷。但由于乙型肝炎類(lèi)型較為復(fù)雜，臨床上無(wú)法對(duì)各類(lèi)抗原實(shí)現(xiàn)有效檢驗(yàn)，存在一定的漏診概率，影響患者后期診療進(jìn)度和效果[1，2]。因此，本研究通過(guò)比較應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)法及酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)法診斷乙型肝炎的效果，旨在為臨床提高診斷乙型肝炎的準(zhǔn)確性提供思路，特選取本院458例乙肝患者展開(kāi)研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 ?選取2015年11月～2018年7月于湖北省黃石市第四醫(yī)院接受診療的乙肝患者458例作為研究對(duì)象，經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)abbot藥盒檢測(cè)確診大三陽(yáng)患者241例，小三陽(yáng)患者217例。大三陽(yáng)患者中男135例，女106例，年齡19～45歲，平均年齡（32.08±4.21）歲，病程2～13年，平均病程（7.42±2.58）年，經(jīng)免疫學(xué)檢驗(yàn)后乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝核心抗體（抗HBC）三項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性;小三陽(yáng)患者中，男126例，女91例，年齡20～41歲，平均年齡（30.46±4.12）歲，病程1～11年，平均病程（6.15±2.34）年。大三陽(yáng)與小三陽(yáng)患者年齡、性別及病程比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），兩類(lèi)檢驗(yàn)法最終檢驗(yàn)結(jié)果可對(duì)比。

1.2檢驗(yàn)設(shè)備及儀器 ?實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)采用賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司生產(chǎn)的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢驗(yàn)儀，及配套檢驗(yàn)試劑。酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)法采用上海酶聯(lián)生物科技有限公司生產(chǎn)的人乙肝兩對(duì)半（HBV Casset）ELISA試劑盒。

1.3檢驗(yàn)方法 ?所有患者在入院第2天取清晨空腹?fàn)顟B(tài)肘靜脈血3～5 ml，離心機(jī)3000 r/min分離血清，血清樣本完成后儲(chǔ)存于設(shè)備箱中，備用。其后按照乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗體（HBeAb）、乙肝核心抗體（HBcAb）的順序?qū)λ谢颊哐鍢颖具M(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附與實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)。檢驗(yàn)操作需嚴(yán)格按照儀器及試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，避免檢驗(yàn)結(jié)果偏差[3]。

1.4觀察指標(biāo) ?比較兩種檢驗(yàn)方法對(duì)患者乙肝類(lèi)型的陽(yáng)性檢出率。大三陽(yáng)診斷指標(biāo)：HBsAg（+）、HBsAb（-）、HBeAg（+）、HBeAb（-）、HBcAb（+） ，表明患者處于乙肝急性或慢性期且病毒復(fù)制活躍，具有較高傳染性。小三陽(yáng)診斷指標(biāo)：HBsAg（+）、HBsAb（-）、HBeAg（-）、HBeAb（+）、HBcAb（+） ，表明患者處于急性乙肝病毒感染恢復(fù)期，且攜帶有慢性乙肝表面抗原。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 ?本研究數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)數(shù)資料用（n，%）表示，比較行？字2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)法對(duì)大三陽(yáng)、小三陽(yáng)患者的陽(yáng)性檢出率均高于酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

3討論

乙型肝炎作為一種具有較高傳染率的肝臟疾病，傳播途徑多種多樣，其中血液與母嬰傳播的感染率較高?；颊吒腥竞?，若無(wú)法及時(shí)診斷和治療，則極易在急性期轉(zhuǎn)化為慢性乙肝，加重患者病情。目前臨床中對(duì)于乙肝的診斷主要采用酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)法，通過(guò)試劑盒對(duì)患者血清進(jìn)行免疫反應(yīng)檢測(cè)，但僅可評(píng)估患者病情進(jìn)展，無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)實(shí)際病毒載量和傳染性的檢驗(yàn)，且易由于操作不當(dāng)影響檢驗(yàn)結(jié)果[4，5]。

本研究結(jié)果顯示，實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)法對(duì)大三陽(yáng)患者的陽(yáng)性檢出率為95.43%，小三陽(yáng)患者的陽(yáng)性檢出率為69.58%，均高于酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)法的85.06%、55.76%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。分析原因，實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)法對(duì)血清中各類(lèi)乙肝抗原、抗體進(jìn)行染色，利用熒光染料在檢驗(yàn)中表現(xiàn)出的特殊波長(zhǎng)，便于熒光探針對(duì)反應(yīng)信號(hào)的收集，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)患者乙肝抗原、抗體載量的實(shí)時(shí)檢測(cè)。除此之外，實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)法對(duì)于部分乙肝前期且未在酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)中檢出乙肝表面抗原的患者，具有較高的診斷特異性，提高診斷準(zhǔn)確性。實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)對(duì)患者體內(nèi)乙肝病毒的變異性具有較好的檢測(cè)效果，能夠?qū)Σ《镜母腥拘赃M(jìn)行有效評(píng)估，降低感染、傳染風(fēng)險(xiǎn)，且相較于傳統(tǒng)ELISA檢測(cè)法，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)可對(duì)乙肝病毒復(fù)制情況及數(shù)量進(jìn)行準(zhǔn)確反映。但是，該方法仍存在一定的缺陷，因?yàn)榧词乖贖BeAg指標(biāo)轉(zhuǎn)陰及患者肝功基本復(fù)常的情況下，患者體內(nèi)仍存在少量HBV-DNA，且HBV表達(dá)在實(shí)際檢驗(yàn)操作中受人體免疫等因素影響較為明顯，導(dǎo)致在實(shí)際應(yīng)用中，雖然實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)法可對(duì)乙肝各類(lèi)型及乙肝病毒載量進(jìn)行準(zhǔn)確反映，但無(wú)法對(duì)恢復(fù)期患者的乙肝病毒活躍性進(jìn)行檢測(cè)或受到患者自身健康狀況影響檢驗(yàn)結(jié)果缺乏可參考性，且檢測(cè)費(fèi)用相對(duì)較高，故需要在實(shí)際應(yīng)用中根據(jù)患者實(shí)際選取檢驗(yàn)方法。

乙肝治療的根本目的在于長(zhǎng)期持續(xù)抑制病毒的復(fù)制，阻止疾病進(jìn)展。在多個(gè)國(guó)家和地區(qū)的慢性乙肝防治指南中，均將實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)法檢測(cè)不到HBV-DNA作為停藥的重要指征。定量檢測(cè)血清中的HBV-DNA是乙肝抗病毒治療過(guò)程中療效評(píng)估和治療終點(diǎn)判定的關(guān)鍵因素，乙肝病毒DNA檢測(cè)對(duì)用藥的劑量、用藥時(shí)間、是否需要聯(lián)合用藥以及用藥效果等提供了重要參考依據(jù)。同時(shí)，乙肝病毒DNA檢測(cè)還可以反映病毒復(fù)制的活躍程度，間接反映機(jī)體的免疫應(yīng)答水平，對(duì)乙肝的治療起到輔助作用，可以增強(qiáng)患者的治療信心。

綜上所述，在臨床診斷中采用實(shí)時(shí)熒光PCR檢驗(yàn)法，可對(duì)患者乙肝病情相較為直觀的反映，且對(duì)患者病情具有較好的診斷效果，可在實(shí)際診療中根據(jù)患者經(jīng)濟(jì)、病情等綜合因素進(jìn)行選用。

參考文獻(xiàn)：

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收稿日期：2019-6-5;修回日期：2019-6-19

編輯/錢(qián)洪飛