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        水產(chǎn)養(yǎng)殖區(qū)抗生素的殘留特性研究

        2019-12-13 02:50:44史朝斌
        河南水產(chǎn) 2019年4期
        關(guān)鍵詞:檢測

        史朝斌

        (濟源市漁業(yè)技術(shù)推廣站 河南濟源459000 )

        由于人們對食品安全越來越重視,所以水產(chǎn)養(yǎng)殖中殘留的抗生素也受到了社會的廣泛關(guān)注。殘留在水產(chǎn)養(yǎng)殖區(qū)的抗生素,容易對生態(tài)環(huán)境造成破壞,而且危害人體健康。研究的目的,在于了解水產(chǎn)養(yǎng)殖的抗生素分布情況,為水產(chǎn)品的食用安全提供參考依據(jù)。

        1 獲取抗生素含量的方法

        1.1 采集樣品

        選擇水網(wǎng)密布、養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達的區(qū)域作為研究范圍,在定區(qū)域采集一定的樣品,樣品包括水體、魚類、飼料、沉積物等。對于所采集的魚類,要放在曝氣培養(yǎng)箱內(nèi);在采集的水樣中添加甲醇、硫酸,抑制微生物的活性。所有的采樣點采集3份沉積物,再將其混合為一個沉積物樣,放在車載冰柜內(nèi)[1]。樣品采集完畢后,沉積物和飼料樣品在-19℃的環(huán)境下保存;魚樣采用一次性注射器獲取魚尾靜脈血后,通過手術(shù)刀取3 g的肝臟、背部去皮肌肉,在-10℃的環(huán)境下保存。

        1.2 主要儀器設(shè)備和試劑

        設(shè)備美國的Agilent 1200高分離度快速高效液相色譜儀、Agilent 6460三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、冷凍離心設(shè)備、超純水設(shè)備、氮吹儀等。試劑包括色譜純甲醇、乙腈、硫酸、氫氧化鈉、乙二酸四乙酸二鈉、強弱陰離子交換小柱等[2]??股貥似穭t包括三十多種,如磺胺砒啶、磺胺醋酰、磺胺二甲嘧啶、磺胺噻唑等等、氧氟沙星、林可霉素等。

        先制備脫水紅霉素甲醇溶解紅霉素,通過添加4 mol/LH2SO4調(diào)整酸堿度,將其放置四個小時。內(nèi)標物包括了磺胺甲惡唑、紅霉素、環(huán)丙沙星等。

        1.3 樣品制備

        4L水樣通過0.7 um的濾膜進行過濾,再借助4 mol/L硫酸來調(diào)整其酸堿度,在其中添加2 g的依地酸二鈉。通過HLB過濾系統(tǒng)進行獲取。過濾之后的濾膜,在冷凍干燥之后稱重,減去濾膜的重量,得到顆粒物的質(zhì)量。將飼料和沉淀物進行冷凍之后,再研磨和過篩。取2 g,放置于50 ml的離心管內(nèi),添加酸堿度為3.0的檸檬酸緩沖物質(zhì)、乙腈各10 ml。超聲提取15 min之后進行離心,轉(zhuǎn)移至平底燒瓶中,此過程重復兩次。在55℃取上清液,促使提取液進行蒸發(fā),然后用超純水定容到200 ml,添加0.2 g的依地酸二鈉,攪拌均勻之后充分利用萃取設(shè)備來獲得樣品。

        魚類的肝臟、肌肉中含有基質(zhì)效應(yīng)的脂肪,在采集樣品時,要采用凈化柱去掉其中的脂肪。對于血液樣品,靜置取100 uL的上清液,放入500 ml的玻璃管中,添加0.5 g/L的依地酸二鈉。通過4 mol/LH2SO4來調(diào)整酸堿度,采用萃取設(shè)備來獲得樣品。對于肌肉、肝臟樣品,取2 g,放進15 ml的0.1mol/L的檸檬緩沖液中,再加15 ml甲醇,置于50 ml離心管內(nèi),超聲提取15 min。整個提取過程重復兩次,取上清液至平底燒瓶中,超純水定容到200 ml,添加0.2 g依地酸二鈉,攪拌均勻后萃取[3]。

        在進行萃取時,用甲醇以及超純水對HLB柱進行激化。萃取結(jié)束之后,采用10 ml超純水淋洗HLB柱,采用甲醇以及乙酸乙酯來對HLB柱進行清洗。定容完成后還要通過針頭式過濾設(shè)備對定容后的樣品進行篩選,放進容器中,準備分析和檢測。

        1.4 配置標準品溶液

        將10 mg抗生素標品放入100 ml的甲醇中, 在含有0.5%的1 mol/L氫氧化鈉的甲醇中,放入氟喹諾酮。同時在100 ml的超純水內(nèi)放入β-內(nèi)酰胺物質(zhì),保存環(huán)境為5℃,7 d換一次,另外的儲備液則在-20℃環(huán)境下保存。

        1.5 標準曲線

        在對樣品進行研究時,要采用兩種不同的標準曲線,一種是高濃度的,一種是低濃度的。前者的范圍是10-200 ug/L,R2>0.995,后者的范圍是。對于回收的數(shù)據(jù),要對養(yǎng)殖場的飼料、魚類、水體等進行加標,其中加標的范圍是100 ng/L,100 ng/g,100 ug/g。水體、血液、肝臟、肌肉中抗生素回收率范圍則在60%~180%之間,其種類達到了32、38、35、33種。分析樣品時,每7種樣品進行一次抗生素檢測,標樣濃度變化范圍不能大于±21%,設(shè)備也不能波動太大[4]。

        2 檢測結(jié)果

        2.1 顆粒物、水體、飼料、沉積物中的抗生素分布

        在通過上述方法進行檢測之后,得出了水體、飼料、沉積物中的抗生素分布情況。其中總共檢測出35種抗生素中的7種,比如林可霉素、諾氟沙星、磺胺嘧啶、北里霉素等。殘留量最高的是脫水紅霉素,因為這是水產(chǎn)養(yǎng)殖中最常用的一種抗生素。

        表1 非生物樣品內(nèi)的抗生素分布

        2.2 魚體組織中的抗生素殘留

        魚體抗生素含量的殘留情況如下表所示,共檢測出35種抗生素中的9種,包括了恩諾沙星、林可霉素、恩諾沙星、氧氟沙星、培氟沙星等。

        表2 魚體組織中的抗生素情況

        從上表可以看出魚體組織中的抗生素分布情況,脫水紅霉素的殘留量最高,魚肝臟、魚血液、魚肌肉中均檢測出了大量脫水紅霉素。因為紅霉素藥效好,成本低,所以被廣泛使用在水產(chǎn)養(yǎng)殖中。含量較高的還有環(huán)丙沙星、諾氟沙星、甲氧咔啶等,這些抗生素流入人口密集的流域,造成了環(huán)境污染。

        2.3 水產(chǎn)品的飲食風險

        以上水產(chǎn)品含有大量的抗生素,容易給人們的健康帶來威脅[5]。因為人們常常食用魚體肌肉部分,所以這次研究中主要針對的是魚體。其中檢測出含量超過50%的抗生素有脫水紅霉素、甲氧咔啶、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、培氟沙星。體重正常的成人在食用了這些魚類產(chǎn)品之后,間接攝入大量抗生素,甚至超過了每日允許值。這些魚類產(chǎn)品未達到安全食用的標準,有的甚至超過允許殘留量的20%,極有可能給人的健康帶來一定的風險[6]。

        3 討論

        抗生素作為水產(chǎn)養(yǎng)殖中抗菌性藥物,由于抗生素特有的藥留和耐藥性,已經(jīng)嚴重影響水產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展,為防止抗生素耐藥性的產(chǎn)生,應(yīng)科學合理用藥,下一步應(yīng)研發(fā)新一代替代品,希望有關(guān)職能部門做到嚴格的監(jiān)控和限制,減輕抗生素殘留危害,嚴格執(zhí)行休藥期制度,嚴格檢測和限制藥殘超標水產(chǎn)品進入市場,確保市民吃上安全的水產(chǎn)品。

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