金婕妤 喻正源（通訊作者）

（1 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床檢測中心 江蘇 蘇州 215000）

（2 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科 江蘇 蘇州 215000）

伯樂微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)平臺由于其操作簡單，檢測靈敏度高，可絕對定量等優(yōu)點(diǎn)日益在分子檢測技術(shù)中扮演越來越重要的角色[1]。針對表皮生長因子受體陽性的肺癌靶向藥物絡(luò)氨酸激酶抑制劑由于其療效好副作用小已經(jīng)成為晚期肺癌患者的首選藥物[2]。表皮生長因子的敏感陽性突變有多種變異形式包括點(diǎn)突變，插入缺失突變等。其中L861Q突變幾乎占表皮生長因子受體的敏感突變的10%，所以對L861Q突變進(jìn)行分子檢測具有重大臨床意義。本研究對80例晚期肺癌患者穿刺活檢樣本以及匹配的外周血樣本在伯樂微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)平臺上對EGFR的L861Q突變進(jìn)行檢測，并研究相關(guān)檢測結(jié)果，以探討伯樂微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)平臺在血液cfDNA中檢測L861Q突變的可行性。

1.樣本來源及檢測方法

1.1 采集病人樣本

收集2017年3月—2019年4月期間在蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科病理診斷為肺腺癌患者的活檢石蠟組織80例，臨床分期均為Ⅳ期。80例樣本中女性42例，男性38例。平均年齡62歲。同時(shí)采集這80例患者的外周血標(biāo)本。采用10ml的cell free DNA采血管（德國QIAGEN公司）對病人外周血進(jìn)行收集，外周血在采取后半小時(shí)內(nèi)進(jìn)行1900g離心，離心時(shí)間為11min。小心吸取上層血漿轉(zhuǎn)移至2ml離心管，1800g離心18min，再次小心吸取上層無渾濁物的血漿，并轉(zhuǎn)移至新的2ml離心管，迅速放置于-80度冰箱保存。準(zhǔn)備下一步cfDNA的提取。

1.2 提取血液中cfDNA

cfDNA的提取采用cfDNA提取試劑盒（美國Thermo Fisher Scientific公司）。使用qubit進(jìn)行cfDNA濃度定量（美國Thermo Fisher Scientific公司）。

1.3 L861Q突變檢測

采用微滴式數(shù)字PCR平臺的 QX200 PCR儀（美國Bio-Rod公司）及伯樂公司L861Q突變檢測試劑盒檢測樣本中L861Q突變。參照說明書判斷檢測結(jié)果。

2.結(jié)果

2.1 80 例肺癌患者cfDNA及對應(yīng)組織中L861Q突變檢測結(jié)果：80例晚期肺癌病人穿刺組織樣本中采用伯樂數(shù)字PCR儀檢測到8例L861Q突變陽性，72例陰性。cfDNA中伯樂數(shù)字PCR儀檢測到7例L861Q突變陽性，73例陰性。穿刺樣本和對應(yīng)的晚期肺癌患者血液中cfDNA突變檢測一致率為87.5%。見表。

表 活檢組織與血漿cfDNA微滴式數(shù)字PCR平臺L861Q突變檢測結(jié)果

3.討論

近年來，精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)飛速發(fā)展，特別在腫瘤的臨床治療上，隨著分子生物學(xué)和基因組學(xué)的研究不斷取得突破性成果，晚期腫瘤病人的治療手段已經(jīng)漸漸從單純的化療放療發(fā)展到現(xiàn)在的精準(zhǔn)治療時(shí)代。而對靶點(diǎn)的精準(zhǔn)檢測也在精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)上扮演越來越重要的角色[3-4]。我們使用微滴式數(shù)字PCR平臺在80例病人血漿cfDNA標(biāo)本檢測到7例L861Q突變，73例陰性；相對應(yīng)的穿刺樣本中檢測到8例L861Q突變，72例陰性，一致率為87.5%。這個(gè)結(jié)果證明微滴式數(shù)字PCR平臺在cfDNAL861Q突變檢測上已經(jīng)接近了穿刺樣本的檢測結(jié)果，相信在以后隨著對cfDNA提取工藝的改進(jìn)，微滴式數(shù)字PCR平臺的靈敏度提高，相關(guān)靶點(diǎn)檢測試劑盒的優(yōu)化，微滴式數(shù)字PCR平臺在分子檢測上會(huì)起到越來越重要的作用。