齊彪，李穎，張曉利,劉志勇，項(xiàng)愛(ài)麗

（1.唐山市畜牧獸醫(yī)研究所 河北唐山 063004；2.唐山市食品藥品綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心 河北唐山 063006）

牛支原體病是由牛支原體（M. bovis）引起的一種牛的常見(jiàn)疾病，該病在牛場(chǎng)中普遍存在。美國(guó)人Hale 于1961 年從患有乳腺炎病牛的牛乳中分離到牛支原體。牛支原體病在歐洲、亞洲、美洲等地均普遍存在。歐洲犢牛肺炎中有30%左右是由牛支原體引起的，美國(guó)部分牛場(chǎng)由牛支原體引發(fā)的牛呼吸系統(tǒng)疾病和乳腺疾病接近70%，英國(guó)牛呼吸道疾病中近四分之一是由支原體引發(fā)。我國(guó)于2008 年在患?jí)乃佬苑窝兹馀Ｖ惺状畏蛛x到牛支原體，并引起廣泛關(guān)注。目前我國(guó)多個(gè)省份均有牛支原體病報(bào)道，對(duì)我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)健康發(fā)展造成嚴(yán)重危害。

1 病原特征

牛支原體無(wú)細(xì)胞壁，可在無(wú)細(xì)胞活性的培養(yǎng)基中自行繁殖，顯微鏡下通常呈球形、絲狀或桿狀、螺旋體、顆粒狀，基因結(jié)構(gòu)為雙股DNA。牛支原體基因組較小，最適培養(yǎng)pH 值為7.9±0.1，其對(duì)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)要求較高，需要加入血清等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為其提供生長(zhǎng)必需的脂肪酸和膽固醇等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。牛支原體在固體或液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)均較慢，通常在5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)5～7d，可形成較小菌落，呈“油煎蛋”樣，邊緣整齊圓滑，四周較薄、中央較厚，瑞氏染色呈淡紫色，吉姆薩染色呈藍(lán)色。牛支原體對(duì)環(huán)境抵抗力較弱，在高溫或普通消毒劑作用下可迅速滅活。在冷藏牛乳中可存活兩個(gè)月以上，在-20℃冷凍條件下可存活半年以上，但在70℃ 1min 或65℃ 2min 作用下可失去活性。

2 流行病學(xué)

不同日齡、品種的牛均可感染牛支原體，肉牛和奶牛易感，2～6月齡犢牛更容易感染，且死亡率較高，成年牛一般呈陰性感染，臨床表現(xiàn)不明顯。患病?？赏ㄟ^(guò)呼吸道、乳汁、尿液等傳播疾病，感染途徑主要為呼吸道。長(zhǎng)途運(yùn)輸、飼養(yǎng)環(huán)境的改變可誘發(fā)該病，由于牛支原體病可導(dǎo)致免疫抑制，從而引起繼發(fā)感染，造成較大經(jīng)濟(jì)損失。

3 臨床癥狀

牛支原體病是由牛支原體引起的重要疾病，可引起牛肺炎、乳腺炎、關(guān)節(jié)炎、中耳炎、眼結(jié)膜炎等多種疾病。

3.1 肺炎

病牛表現(xiàn)為食欲減退、體溫升高、體形消瘦、被毛雜亂、呼吸困難，伴有咳嗽，患病初期鼻腔部流鼻涕，后期轉(zhuǎn)為黏性或膿性鼻液[1]。病變主要集中在胸腔肺部，以壞死性肺炎為特征，肺部形成白色結(jié)節(jié)，可見(jiàn)干酪樣壞死灶，胸腔下有淺綠色膠凍樣物浸潤(rùn)，支氣管、肺泡周圍有大量白細(xì)胞聚集。

3.2 中耳炎

病牛生產(chǎn)緩慢，耳朵左右搖晃，站立不穩(wěn)，摩擦欄桿，嚴(yán)重時(shí)從耳道流出膿性分泌物。

3.3 關(guān)節(jié)炎

臨床表現(xiàn)為跪地不起，關(guān)節(jié)腫脹，不愿走動(dòng)，關(guān)節(jié)軟組織出現(xiàn)干酪樣壞死。

3.4 結(jié)膜炎

眼角有大量分泌物，結(jié)膜潮紅，視力嚴(yán)重受損。

3.5 乳腺炎

乳房腫脹發(fā)熱，內(nèi)有塊狀物，乳汁呈水樣，后期含有絮狀物，

4 診斷

4.1 細(xì)菌學(xué)診斷

采集患病牛肺組織等病料，無(wú)菌條件下接種PPLO 固體培養(yǎng)基，在37℃、5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)2～3d，在低倍光學(xué)顯微鏡下觀察菌落呈“煎蛋樣”形態(tài)，PPLO 培養(yǎng)基由紅色變成黃色渾濁樣，再結(jié)合生化試驗(yàn)可進(jìn)行初步診斷。

4.2 分子生物學(xué)檢測(cè)

通常采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）進(jìn)行檢測(cè)，該方法簡(jiǎn)便、高效、特異性強(qiáng)。早期我國(guó)對(duì)M. bovis 進(jìn)行分析研究，發(fā)現(xiàn)M. bovis 和M. agalactiae（無(wú)乳支原體）均含有p81 蛋白，我國(guó)部分學(xué)者根據(jù)P81 基因引物建立了PCR方法[2]，為國(guó)內(nèi)首次建立的牛支原體PCR 高效、快速檢測(cè)方法。隨著PCR 技術(shù)的發(fā)展，熒光定量PCR 和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）逐步成熟應(yīng)用到牛支原體檢測(cè)中，大大縮短檢測(cè)時(shí)間，便捷高效，且成本低。

4.3 血清學(xué)檢測(cè)

該方法針對(duì)血清中牛支原體抗體進(jìn)行檢測(cè)分析，可有效區(qū)分感染牛和免疫牛[3]。常用檢測(cè)方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、間接血凝試驗(yàn)（HA）、膠體金層析試驗(yàn)等。

5 防控措施

1）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。牛舍保持干燥衛(wèi)生，及時(shí)清理污水糞便，牛舍通風(fēng)，養(yǎng)殖密度適宜，合理搭配飼料，定期到運(yùn)動(dòng)場(chǎng)活動(dòng)。

2）做好檢疫。新購(gòu)進(jìn)牛時(shí)，做好檢疫工作，防止引進(jìn)帶菌牛，混群前進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，確認(rèn)無(wú)問(wèn)題后再混養(yǎng)。定期對(duì)牛舍進(jìn)行消毒，消除病原生存環(huán)境。

3）及時(shí)處置發(fā)病牛。發(fā)現(xiàn)患病牛后，立即隔離飼養(yǎng)，消毒飼養(yǎng)環(huán)境，按照輪換用藥和交叉用藥原則，使用恩諾沙星、大觀霉素等抗生素進(jìn)行治療，防止發(fā)生繼發(fā)感染和產(chǎn)生耐藥性。

6 結(jié)語(yǔ)

牛支原體病是牛的一種重要疾病，給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大危害。該病的致病機(jī)理尚未研究清楚，無(wú)有效商業(yè)化疫苗，因此應(yīng)堅(jiān)持預(yù)防為主的方針，采用高效便捷的檢測(cè)方法和有效措施進(jìn)行防控。