亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        不同藥劑對(duì)茶赤葉斑病原菌的體外抑制效果

        2019-12-09 10:06:02董照鋒程光祿曹秀榮
        貴州農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年11期

        董照鋒, 程光祿, 曹秀榮

        (1.商洛市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心, 陜西 商洛 726000; 2.鎮(zhèn)安縣達(dá)仁鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)站, 陜西 鎮(zhèn)安 711507)

        商洛位于秦嶺南麓,地處暖溫帶向亞熱帶過(guò)渡帶,屬于暖溫帶半濕潤(rùn)季風(fēng)氣候,是中國(guó)最北端茶區(qū)。特殊的生態(tài)環(huán)境、立地條件和耕作方式,形成了獨(dú)特的有害生物群體。2016—2017年,筆者所在課題組對(duì)商洛茶區(qū)病蟲(chóng)害種類開(kāi)展普查,弄清了茶樹(shù)病蟲(chóng)害種類及主要病蟲(chóng)害發(fā)生規(guī)律[1],相繼開(kāi)展茶云紋葉枯病、茶輪斑病、茶芽枯病的防治試驗(yàn)[2]。茶赤葉斑病(病原PhyllostictatheicolaPetch)是商洛茶園的重要病害,該病為高溫高濕性的病害,在商洛常年5—6月發(fā)病,盛發(fā)期為7—8月,夏季高溫干旱、秋天多雨有利于病害的發(fā)生流行。目前,對(duì)該病防治技術(shù)研究的文獻(xiàn)較少,胡淑霞等[3-4]研究表明,茶樹(shù)益微TBM對(duì)茶赤葉斑病的抑制可達(dá)到66.28%,500倍多抗霉素對(duì)茶赤葉斑病的抑制率為51.90%。王瑾等[5]研究表明,糖苷類和順-3-己烯醇、水楊酸甲酯、苯甲醇、苯乙醇、芳樟醇氧化物、香葉醇和芳樟醇7類物質(zhì)對(duì)茶赤葉斑病菌都有明顯的抑制作用,其中香葉醇的抑制作用最強(qiáng),抑制率和物質(zhì)濃度有著明顯的線性關(guān)系。張華艷[6]研究表明,咖啡堿對(duì)茶赤葉斑病具有明顯的抑制,當(dāng)咖啡堿濃度在1~10 mg/mL,其抑制率為33.0%~100%。為有效控制茶赤葉斑病的危害,選取武夷菌素、多抗霉素、枯草芽孢桿菌、春雷霉素、戊唑醇5種藥劑開(kāi)展茶赤葉斑病病菌的體外抑制試驗(yàn),篩選優(yōu)質(zhì)、高效、低殘留的農(nóng)藥,以期為大田防治茶赤葉斑病提供有效依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 供試材料

        1.1.1 藥劑 2%武夷菌素AS,山東濰坊萬(wàn)勝生物農(nóng)藥有限公司,2018年5月10日生產(chǎn);3%多抗霉素AS,績(jī)溪農(nóng)華生物科技有限公司,2018年3月1日生產(chǎn);6%春雷霉素WP,山東利邦農(nóng)化有限公司,2018年6月23日生產(chǎn);100億芽孢/g枯草芽孢桿菌WP,德強(qiáng)生物股份有限公司,2018年2月22日生產(chǎn);430 g/L戊唑醇SC,西安鼎盛生物化工有限公司,2018年1月2日生產(chǎn)。

        1.1.2 培養(yǎng)基 1) 茶葉粉PDA培養(yǎng)基:自來(lái)水1 000 mL、馬鈴薯(去皮)200 g、葡萄糖20 g、茶葉粉(80目)15 g、瓊脂粉15 g。2) 清水瓊脂培養(yǎng)基:自來(lái)水1 000 mL、瓊脂粉15 g。

        1.1.3 菌種 供試的病原菌由商洛市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心實(shí)驗(yàn)室提供,于2017年10月23日從山陽(yáng)縣漫川鎮(zhèn)娘娘廟村賀家?guī)X萬(wàn)福茶廠千畝有機(jī)茶園采集的典型癥狀新鮮病葉,進(jìn)行室內(nèi)分離、培養(yǎng)、鑒定后于4℃保存,每3個(gè)月對(duì)菌種活化1次。

        1.2 方法

        1.2.1 培養(yǎng)基的篩選 采用直接測(cè)量法測(cè)定菌落直徑,篩選最適宜的培養(yǎng)基。把菌種分別接種到PDA、茶葉粉5 g/L+PDA、茶葉粉10 g/L+PDA和茶葉粉15 g/L+PDA 4種培養(yǎng)基上。通過(guò)測(cè)量不同培養(yǎng)基菌絲直徑選出最適宜的培養(yǎng)基。

        1.2.2 藥劑試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)共6個(gè)處理,4次重復(fù),不同處理濃度按照藥劑使用說(shuō)明推薦用量確定。處理1:430 g/L戊唑醇SC 90 μg/mL;處理2:6%春雷霉素WP 100 μg/mL;處理3:枯草芽孢桿菌WP 500萬(wàn)芽孢/mL;處理4:2%武夷菌素AS 40 μg/mL;處理5:3%多抗霉素AS 60 μg/mL;處理6(CK):滅菌水對(duì)照。將茶赤葉斑病菌絲或孢子接種于不同處理配置的含藥培養(yǎng)基中,于25℃、濕度90%恒溫恒濕條件下培養(yǎng),測(cè)定5種藥劑對(duì)茶赤葉斑病菌絲及分生孢子的抑制效果。

        1.2.3 藥劑對(duì)茶赤葉斑病菌絲及分生孢子抑制效果的測(cè)定 采用菌絲生長(zhǎng)速率法[7-8]測(cè)定5種供試藥劑對(duì)菌絲的抑制作用。采用孢子萌發(fā)法[9-10]測(cè)定5種供試藥劑對(duì)孢子萌發(fā)的抑制作用。

        1.2.4 含藥培養(yǎng)基制備及菌絲接種 為避免培養(yǎng)基快速冷卻,確保每個(gè)培養(yǎng)皿中可以加入足夠多的含藥培養(yǎng)基,在實(shí)際操作時(shí),各處理一次性多配制2份含藥培養(yǎng)基。先將5個(gè)藥劑處理按照以下濃度配置,430 g/L戊唑醇SC 900 μg/mL、6%春雷霉素WP 1 000μg/mL、枯草芽孢桿菌5 000萬(wàn)芽孢/mL、2%武夷菌素AS 400 μg/mL、3%多抗霉素AS 600 μg/mL。準(zhǔn)備好已滅菌的燒杯、培養(yǎng)皿、PDA培養(yǎng)基,無(wú)菌環(huán)境下用10 mL一次性注射器注入稀釋好的藥液6 mL于100 mL燒杯中,當(dāng)PDA培養(yǎng)基冷卻到500C左右時(shí),再向燒杯中注入培養(yǎng)基54 mL,多次推拉注射器讓藥液充分混合均勻,最后用一次性注射器向9 cm培養(yǎng)皿中注入含藥培養(yǎng)基10 mL,制成含藥平板培養(yǎng)基,此時(shí)藥劑濃度為原濃度1/10??瞻讓?duì)照組為6 mL滅菌水和54 mL茶葉粉PDA培養(yǎng)基[11]。

        選取在25℃、濕度90%恒溫培養(yǎng)5 d的活化菌種,在菌落周邊生長(zhǎng)茂盛、均勻一致處用打孔器制備直徑6 mm菌餅,每皿1塊,植入茶葉粉PDA平板培養(yǎng)基中間位置,接種完畢,將各處理置入25 ℃、濕度90%恒溫恒濕條件下培養(yǎng),分別于72 h、96 h、120 h、144 h、168 h用十字交叉法測(cè)量各皿菌落直徑,計(jì)算菌絲生長(zhǎng)擬制率。

        菌絲生長(zhǎng)抑制率=[(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑) ]×100%

        1.2.5 孢子懸浮液制備及接種 取蒸餾水600 mL于1 000 mL燒杯中,用棉塞塞好并用繩子包扎好于121℃高壓蒸氣滅菌30 min,保存?zhèn)溆?。選用培養(yǎng)好的茶赤葉斑病原菌(培養(yǎng)20 d,已產(chǎn)生分生孢子)平板培養(yǎng)物1~2皿,在無(wú)菌環(huán)境下,用一次性注射器注入10 mL滅菌水。用一次性接種鏟輕刮菌落表面,用力按壓分生孢子器讓其破裂。將2張擦鏡紙放在滅過(guò)菌口徑為7 cm的小漏斗上,將孢子懸浮液過(guò)濾在滅菌的50 mL錐形瓶?jī)?nèi),重復(fù)過(guò)濾2次。在顯微鏡下觀察孢子懸浮液的孢子量,加滅菌水調(diào)節(jié)孢子濃度,當(dāng)每個(gè)視野能觀察到80~100個(gè)孢子時(shí),孢子懸浮液制備完成[12]。

        分生孢子采用水瓊脂培養(yǎng)法。為避免培養(yǎng)基快速冷卻,各處理制成4份含藥培養(yǎng)基。用一次性注射器吸取稀釋好的藥液4 mL于100 mL已滅菌的燒杯中,加入經(jīng)高壓蒸氣滅菌并冷卻到50 ℃左右的清水瓊脂培養(yǎng)基36 mL,讓藥液充分混合均勻,然后用一次性注射器吸取10 mL含藥培養(yǎng)基2份,分別注入2個(gè)滅菌的9 cm培養(yǎng)皿中,制成含藥平板培養(yǎng)基。空白對(duì)照組為4 mL滅菌水和36 mL清水瓊脂培養(yǎng)基,按上述方法制作2個(gè)對(duì)照平板培養(yǎng)基。平板培養(yǎng)基制好后,在每個(gè)培養(yǎng)皿背面用記號(hào)筆畫3個(gè)小圓圈標(biāo)記孢子懸浮液滴入點(diǎn)位置以便觀察。在3個(gè)小圈內(nèi),每點(diǎn)滴1滴孢子懸浮液,即為3次重復(fù)。將各處理置于25 ℃、濕度90%恒溫恒濕條件下培養(yǎng),在對(duì)照組80%~90%孢子萌發(fā)時(shí),將對(duì)應(yīng)處理組全部取出立即放入4 ℃冰箱冷藏,終止孢子繼續(xù)萌發(fā)。然后逐一取出鏡檢統(tǒng)計(jì)各處理孢子萌發(fā)情況。每個(gè)點(diǎn)(即1個(gè)重復(fù))檢查3個(gè)視野,并對(duì)孢子萌發(fā)狀況進(jìn)行顯微拍照。

        孢子萌發(fā)率=(孢子萌發(fā)數(shù)量/觀察孢子數(shù)量)×100%

        孢子萌發(fā)抑制率=[(對(duì)照孢子萌發(fā)率-處理孢子萌發(fā)率)/ (對(duì)照孢子萌發(fā)率) ]×100%

        1.2.6 殺菌劑不同濃度處理對(duì)菌絲的抑制試驗(yàn) 根據(jù)不同藥劑對(duì)茶赤葉斑病菌絲和分生孢子的抑制效果,篩選出抑菌效果較好的武夷菌素、枯草芽孢桿菌2種藥劑進(jìn)行濃度梯度試驗(yàn),測(cè)定篩選藥劑的抑制作用。

        1) 不同濃度武夷菌素對(duì)菌絲的抑制作用。試驗(yàn)共設(shè)置6個(gè)處理,各處理4次重復(fù)。處理A:65 μg/mL;處理B:40 μg/mL;處理C:30 μg/mL;處理D:20 μg/mL;處理E:10 μg/mL;處理F(CK):滅菌水對(duì)照。含藥培養(yǎng)基的配制參照1.2.4進(jìn)行。

        1.4 觀察指標(biāo) ①根據(jù)Barthel指數(shù)和Harris髖關(guān)節(jié)評(píng)分比較患者干預(yù)前后功能康復(fù)情況[2]。②根據(jù)視覺(jué)模擬疼痛評(píng)分(VAS評(píng)分)比較患者干預(yù)前后疼痛程度[3]。③根據(jù)焦慮自評(píng)量表(SAS評(píng)分)、抑郁自評(píng)量表(SDS評(píng)分)比較患者心理狀態(tài)[4]。

        2) 不同濃度枯草芽孢桿菌對(duì)菌絲抑制作用。試驗(yàn)共設(shè)置6個(gè)處理,4次重復(fù)。處理a:500萬(wàn)芽孢/mL;處理b:400萬(wàn)芽孢/mL;處理c:300萬(wàn)芽孢/mL;處理d:200萬(wàn)芽孢/mL;處理可e:100萬(wàn)芽孢/mL;處理f(CK):滅菌水對(duì)照。含藥培養(yǎng)基的配制參照1.2.4進(jìn)行。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 適宜培養(yǎng)基

        在溫度25℃,濕度90%條件下培養(yǎng)168 h,PDA 培養(yǎng)基、茶葉粉5 g/L+PDA培養(yǎng)基、茶葉粉10 g/L+PDA培養(yǎng)基和茶葉粉15 g/L+PDA培養(yǎng)基4個(gè)處理的茶赤葉斑病菌的菌落直徑分別為45.4 mm、49.3 mm、43.9 mm和44.8 mm,經(jīng)差異顯著性分析,茶葉粉5 g/L+PDA培養(yǎng)基的菌落直徑極顯著高于其余處理,該處理的菌落生長(zhǎng)最快、長(zhǎng)勢(shì)最好。因此,茶葉粉5 g/L+PDA培養(yǎng)基為最優(yōu)組合,后續(xù)的試驗(yàn)采用該培養(yǎng)基組合。

        2.2 5種殺菌劑對(duì)茶赤葉斑病菌絲的抑制作用

        從表1可知,處理1的抑制作用持久、穩(wěn)定、效果最好,72~168 h抑制率均為100%。處理3對(duì)菌絲抑制效果隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)呈增強(qiáng)趨勢(shì),在168 h的抑制率達(dá)94.43%。處理4在72~168 h抑制作用比較穩(wěn)定,抑制率為66.21%~69.57%。處理2和處理5的抑制作用較差。72~168 h,處理2和處理6(CK)的抑制作用差異均不顯著,與其余處理間的差異極顯著,處理1、3、4、5間的差異極顯著。

        2.3 5種殺菌劑對(duì)茶赤葉斑病菌分生孢子的抑制作用

        從表2看出,接種后22 h,處理6(CK)的孢子萌發(fā)率為55.07%。5個(gè)藥劑處理中,處理2對(duì)茶赤葉斑病菌分生孢子的抑制效果最好,抑制率為89.01%,萌發(fā)率為6.05%,與其余處理差異極顯著。處理5、處理1、處理3和處理4對(duì)茶赤葉斑病菌分生孢子的抑制率分別為47.90%、29.96%、28.57%和5.36%,抑制作用較差。處理2與其余處理分生孢子萌發(fā)率的差異達(dá)極顯著水平,處理1和3、處理4和6間差異不顯著。

        表1 5種殺菌劑對(duì)茶赤葉斑病菌絲的抑制率

        注:同列不同大小字母分別表示0.01、0.05水平差異顯著,下同。

        Note: Different capital and lowercase letters in the same column indicate different difference at 0.01 and 0.05 levels respectively. The same below.

        表2 5種殺菌劑對(duì)茶赤葉斑病菌分生孢子的抑制作用(接種22 h)

        2.4 不同濃度武夷菌素和枯草芽孢桿菌對(duì)茶赤葉斑病菌絲的抑制作用

        2.4.1 武夷菌素 從表3可知,5個(gè)濃度武夷菌素隨著時(shí)間的推移對(duì)茶赤葉斑病菌絲的抑制率呈逐漸下降趨勢(shì),均在用藥72 h的抑制率最高,處理A、B和 C的抑制率都在60%以上。168 h 時(shí),處理A、B、C、D、E的抑制率分別為69.55%、59.32%、48.82%、41.47%和35.70%,處理A的菌落直徑與其余處理差異極顯著??傮w而言,高濃度的武夷菌素對(duì)菌絲抑制效果較好,但已超出了推薦使用的濃度。

        表3 不同濃度武夷菌素和枯草芽孢桿菌對(duì)茶赤葉斑病菌絲的抑制率

        2.4.2 枯草芽孢桿菌 5個(gè)濃度的枯草芽孢桿菌對(duì)茶赤葉斑病菌絲的抑制率隨著時(shí)間的推移呈增強(qiáng)趨勢(shì),在168 h達(dá)到最高。在168 h,處理a、b、c、d和e對(duì)茶赤葉斑病菌絲的抑制率分別為94.49%、93.96%、93.44%、93.44%和92.39%,都具有較好的抑制作用。且5個(gè)處理的菌落直徑與對(duì)照差異極顯著,處理a和處理b差異不顯著;處理b、c和d間差異不顯著,與處理e差異顯著。

        3 結(jié)論與討論

        茶赤葉斑病菌的最佳培養(yǎng)基為茶葉粉5 g/L+PDA。430 g/L戊唑醇SC 90 μg/mL對(duì)茶赤葉斑病菌絲抑制作用最明顯,對(duì)病害控制見(jiàn)效快、效果明顯,在72~168 h抑制率均為100%。500萬(wàn)芽孢/mL和400萬(wàn)芽孢/mL枯草芽孢桿菌對(duì)菌絲抑制率達(dá)94.49%和93.96%,兩者之間差異不顯著。2%武夷菌素AS 65 μg/mL對(duì)菌絲抑制率為69.55%,也具有較好的抑制作用。6%春雷霉素WP 100 μg/mL對(duì)孢子抑制效果最好,22 h時(shí)抑制率達(dá)89.01%。春雷霉素主要用于茶赤葉斑病的早期預(yù)防,戊唑醇和枯草芽孢桿菌用于發(fā)病茶園的防治。對(duì)于茶赤葉斑病重發(fā)茶園,建議使用430 g/L SC戊唑醇90 μg/mL與6%春雷霉素WP 100 μg/mL混配進(jìn)行防治。董照鋒[12]研究表明,春雷霉素與枯草芽孢桿菌混配會(huì)降低枯草芽孢桿菌對(duì)菌絲的抑制作用,建議在茶赤葉斑病重發(fā)茶園防治時(shí)可采用400萬(wàn)芽孢/mL枯草芽孢桿菌與6%春雷霉素WP 100 μg/mL間隔10~15 d交替使用。

        在試驗(yàn)中90 μg/mL戊唑醇430 g/L SC抑制率達(dá)100%,由于試驗(yàn)濃度遠(yuǎn)低于推薦使用濃度,因此未對(duì)其開(kāi)展梯度試驗(yàn)。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),多抗霉素水劑對(duì)茶赤葉斑病的分生孢子有致畸作用,其畸形率達(dá)16.66%,主要表現(xiàn)為芽管明顯偏短,部分芽管嚴(yán)重畸形,局部膨大似水葫蘆狀,關(guān)于其機(jī)理還需要進(jìn)一步試驗(yàn)研究。雖然高濃度的武夷菌素對(duì)茶赤葉斑病菌絲抑制作用較好,由于超出了推薦使用濃度,生產(chǎn)中不建議使用。茶赤葉斑病原菌體外抑制試驗(yàn)是在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的,因此,篩選出的防治藥劑或配方還需大田進(jìn)一步試驗(yàn)。

        亚洲av综合国产av日韩| 美女超薄透明丝袜美腿| 国产精品爽黄69天堂a| 国产精品第一二三区久久蜜芽| 91精品综合久久久久m3u8| 亚洲美女一区二区三区三州| 男女性杂交内射女bbwxz| 公粗挺进了我的密道在线播放贝壳| YW亚洲AV无码乱码在线观看| 日韩乱码精品中文字幕不卡| 亚洲综合精品亚洲国产成人| 狠狠综合久久av一区二区| 亚洲免费黄色| 日本在线中文字幕一区| 亚洲毛片在线免费视频| 国产女人高潮叫床免费视频| 国产成人精选在线不卡| 人妻av不卡一区二区三区| 国产在线视频一区二区天美蜜桃| 午夜精品久久久久久久| 国产女主播喷水视频在线观看| 亚洲国产香蕉视频欧美| 亚州中文字幕乱码中文字幕| 少妇夜夜春夜夜爽试看视频 | 97影院在线午夜| 国内视频一区| 午夜视频一区二区三区四区| 国产精品多人p群无码| 亚洲av理论在线电影网| 亚州精品无码人妻久久| 一区二区三区夜夜久久| 午夜无码一区二区三区在线观看| 日本高清色倩视频在线观看| 无码区a∨视频体验区30秒| 久久人妻中文字幕精品一区二区| 国产精品嫩草99av在线| 国产va在线观看免费| 成人国产永久福利看片| 日本一区二区三区丰满熟女| 成人免费a级毛片| 亚洲一区二区综合色精品|