盧方軍

(黑龍江省綏濱縣畜牧獸醫(yī)局,黑龍江綏濱 156200)

牛流行熱的流行、診斷和防制

盧方軍

(黑龍江省綏濱縣畜牧獸醫(yī)局,黑龍江綏濱 156200)

牛流行熱又稱三月熱、暫時(shí)熱,是由于牛流行熱病毒引起的一種急性、熱性傳染病。其特征為突發(fā)高熱,流淚,有泡沫狀流涎,鼻漏,呼吸促迫,后軀僵硬,跛行及明顯季節(jié)性。主要引起牛發(fā)病,尤以奶牛最易感染。

牛流行熱;診斷;防制

1 流行病學(xué)

本病主要侵害牛，各種年齡、性別、品種的牛均可感染發(fā)病，以3～5歲的壯齡乳牛、黃牛易感性為最高，懷孕牛和高產(chǎn)乳牛感染后癥狀為最重，死亡率也較高。本病的發(fā)生有明顯的季節(jié)性，主要在蚊蠅多的季節(jié)流行，北方于8～10月份，南方可提前，多在潮濕季節(jié)流行。病牛是本病的主要傳染源。吸血昆蟲（蚊、蠅）叮咬病牛后再叮咬易感的健康牛而傳播。本病傳染力強(qiáng)，傳播迅速，短期內(nèi)可使很多牛發(fā)病，呈大流行性或流行性，有明顯的周期性，約3～5年流行一次。

2 活體檢疫

本病的潛伏期為3～7d，多突然發(fā)病，體溫升高達(dá)40～42℃，持續(xù)2～3d。病牛肌肉震顫，皮溫不整，精神高度委頓。流淚，畏光，眼結(jié)膜充血，眼瞼水腫。鼻鏡干熱，呼吸促迫，病牛發(fā)出哼哼聲。食欲減退或廢絕，反芻停止。多數(shù)發(fā)病牛鼻流炎性分泌物，成線狀，后變?yōu)轲ば员翘?，流涎，口角有泡沫。乳牛的產(chǎn)奶量急劇下降，有的停止。病牛喜臥地上，不愿行動(dòng)，強(qiáng)迫行動(dòng)則跛行，步態(tài)不穩(wěn)，甚至倒地不能起立。多數(shù)病牛呈良性經(jīng)過，病程3～4d恢復(fù)，病死率為1～3%，若繼發(fā)感染，因跛行或癱瘓而淘汰。

3 肉尸檢疫

本病沒有特征性的病理變化。急性死亡的病例，可見明顯的肺間質(zhì)氣腫，有的肺充血與肺水腫。肺氣腫病例肺高度膨脹，間質(zhì)增寬，內(nèi)有氣泡，壓迫肺呈捻發(fā)音。肺水腫病例胸腔積有多量暗紅色液體，氣管和胸腔內(nèi)積有大量液體，淋巴結(jié)充血、腫脹和出血。

4 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

牛流行熱檢疫檢驗(yàn)方法有病原學(xué)檢查和血清學(xué)檢查。病原學(xué)檢查主要是將可疑病牛的血樣靜脈接種健康牛，或腦內(nèi)接種乳鼠盲傳，或在BHK21（或Vero）細(xì)胞上傳代，以接種動(dòng)物是否發(fā)病或細(xì)胞是否出現(xiàn)細(xì)胞病變來確診。目前比較實(shí)用的血清學(xué)方法是微量血清中和試驗(yàn)。

4.1 材料準(zhǔn)備

牛流行熱病毒株：用已適應(yīng)BHK21（或Vero）細(xì)胞的毒株（哈爾濱獸醫(yī)研究所保存）。犢牛血清：經(jīng)檢測(cè)無牛流行熱抗體，使用前經(jīng)56℃、30min滅活。被檢牛血清：試驗(yàn)前經(jīng)56℃、30min滅活。試驗(yàn)細(xì)胞：BHK21或Vero細(xì)胞。漢克氏平衡液、乳漢液、胰酶、乙二胺四乙酸二鈉細(xì)胞分散液：按常規(guī)方法配制?？咕厝芤海哼x用青霉素和鏈霉素，用滅菌的雙蒸餾水配制成1萬單位（μg/ml），分裝成小瓶，凍結(jié)保存。細(xì)胞培養(yǎng)液；70% 199液加入10%犢牛血清和20%乳漢液、1%抗菌素溶液，用8.8%碳酸氫鈉調(diào)pH7.2～7.5。細(xì)胞維持液：基本與細(xì)胞培養(yǎng)液相同，犢牛血清為3%。24孔或96孔平底帶蓋塑料培養(yǎng)板。

4.2 實(shí)驗(yàn)方法

（1）抗原制備：將培養(yǎng)36～48h生長良好的BHK21細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，加入維持液，按維持液量的10%加入10－2稀釋的病毒，37℃吸附1h。倒去溶液，用漢克氏液洗滌后，加維持液，37℃培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞病變出現(xiàn)達(dá)75%以上時(shí)，收獲培養(yǎng)物，-20℃保存。病毒抗原毒價(jià)測(cè)定：收獲的培養(yǎng)物凍融3次，以2000轉(zhuǎn)/min離心10min，吸取上清液，在微量板上用BHK21細(xì)胞測(cè)定其毒價(jià)。按改良的Reed-Meunch方法計(jì)算TCID50（抗原毒價(jià)應(yīng)在104以上）。測(cè)定合格的抗原分裝成小瓶置－40℃中保存?zhèn)溆?。保存期超過3個(gè)月應(yīng)重新測(cè)定毒價(jià)。使用時(shí)將病毒配制成每50μl含100個(gè)組織細(xì)胞培養(yǎng)半數(shù)感染量的病毒液。

（2）中和試驗(yàn)：A.被檢血清稀釋。取被檢血清70μl，加入210μl維持液，充分混合（此時(shí)血清稀釋度為1：4）。B.將稀釋的被檢血清滴加于微量板上，每份血清加5個(gè)孔，每孔50μl；抗原（病毒濃度為100個(gè)組織細(xì)胞培養(yǎng)半數(shù)感染量/50μl）分別加入前4個(gè)孔，余下的1孔補(bǔ)加維持液50μl為血清對(duì)照。C.設(shè)置對(duì)照。陽性、陰性血清對(duì)照孔：與被檢血清相同方法操作。正常細(xì)胞對(duì)照孔：不加血清和病毒抗原，補(bǔ)加100μl維持液。工作病毒對(duì)照孔：不加血清，補(bǔ)加維持液50μl。病毒回歸試驗(yàn)：將病毒做含毒量為1000個(gè)、100個(gè)、10個(gè)和1個(gè)組織細(xì)胞培養(yǎng)半數(shù)感染量四個(gè)稀釋度稀釋，每個(gè)稀釋度滴加4個(gè)孔，每孔50μl，補(bǔ)加50μl維持液。D.將試驗(yàn)板置微型振蕩器上混合，37℃中和lh，加入每毫升含1.5×105～2×105個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，每孔100μl，加蓋后置5%二氧化碳培養(yǎng)箱，37℃培養(yǎng)，96h判定結(jié)果。

4.3 結(jié)果判定

當(dāng)被檢血清對(duì)照、正常細(xì)胞對(duì)照正常，陰性血清對(duì)照各孔細(xì)胞都出現(xiàn)細(xì)胞病變，陽性血清對(duì)照各孔細(xì)胞全部被保護(hù)，病毒回歸試驗(yàn)成立，工作病毒量符合要求，本試驗(yàn)有效。陽性反應(yīng)：被檢血清4孔中，有2孔或2孔以上細(xì)胞沒有出現(xiàn)細(xì)胞病變。陰性反應(yīng)：被檢血清4孔或1孔細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞病變。

5 防制措施

自然病例恢復(fù)后有一定時(shí)期的免疫力?？稍囉门Ａ餍袩嵋呙缃臃N免疫，但效果不令人滿意。要早發(fā)現(xiàn)，早封鎖，早隔離，早治療。本病尚無特效藥物，病初可根據(jù)病情使用退熱藥及強(qiáng)心藥，并用抗菌素藥防止繼發(fā)感染。要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，防止牛舍潮濕，防止過勞，夏季防暑，保持牛體清潔衛(wèi)生，消滅蚊蠅等吸血昆蟲等，牛舍、運(yùn)動(dòng)場(chǎng)及用具用3～6%氫氧化鈉熱溶液嚴(yán)格消毒。有病變的內(nèi)臟作工業(yè)用或銷毀，無病變的內(nèi)臟經(jīng)高溫處理后出場(chǎng)。

[1] 張妙仙.奶牛流行熱的診斷和防制[J].浙江畜牧獸醫(yī)，2004，（4）：38-39.

[2] 侯太乾.淺談牛流行熱病的診治及體會(huì)[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘，2012，（9）：134-135.

盧方軍（1971—），男，獸醫(yī)師，本科。