陳 岑，黃柳倩，程巧鴛，周明昊，顏琳琦

(浙江省食品藥品檢驗研究院，浙江 杭州 310052)

硝基咪唑類藥物(NMZs)是一類具有抗原蟲感染和抗厭氧菌的硝基雜環(huán)類抗菌藥物，在臨床各個領(lǐng)域應(yīng)用廣泛[1-2]。由于該類藥物抗菌消炎效果較好，對皮膚炎癥具有一定治療作用，因此常被不法商家違法添加在宣稱具有“祛痘”或“除螨”的化妝品中，從而達(dá)到成本低、見效快的目的。然而，研究表明硝基咪唑類藥物具有細(xì)胞誘變性和動物致癌毒性[3]，其代表藥物甲硝唑被國際癌癥研究中心列為“人類可能的致癌物”(Group 2B)。我國《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)(以下簡稱“《規(guī)范》15版”)也明確將甲硝唑列入禁用物質(zhì)[4]。但目前《規(guī)范》15版收載的檢測方法中僅有甲硝唑的高效液相色譜檢測方法，其它品種的硝基咪唑類藥物和相應(yīng)檢測方法尚無明確收載。這也凸顯目前《規(guī)范》15版中收載大量禁限用物質(zhì)卻無相應(yīng)檢測方法的現(xiàn)實。因此，鑒于硝基咪唑類藥物的毒性及其在化妝品中的違法添加情況，迫切需要建立相應(yīng)的快速、方便、準(zhǔn)確、易于推廣的檢測方法。

現(xiàn)有文獻(xiàn)報道化妝品中硝基咪唑類禁用藥物的檢測方法主要有高效液相色譜法(HPLC)[5]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)[6]和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)[7-10]。其中LC-MS/MS具有準(zhǔn)確、靈敏和抗干擾強的優(yōu)勢，可應(yīng)用于硝基咪唑類禁用藥物的定性確證和定量分析。但以上文獻(xiàn)報道的檢測方法均僅限于單一化妝品基質(zhì)，而同時分析不同基質(zhì)類型化妝品中禁用藥物的報道較少，因此需要探討不同化妝品基質(zhì)對檢測硝基咪唑類藥物的差異性。此外，樣品提取和凈化技術(shù)也會影響方法的靈敏度和準(zhǔn)確性，尤其是化妝品基質(zhì)中既存在水溶性的聚乙二醇、丙三醇等，又存在脂溶性的表面活性劑成分，基質(zhì)效應(yīng)明顯，對檢測結(jié)果的影響大。目前化妝品前處理技術(shù)多以普通的固相萃取小柱凈化來實現(xiàn)[11]，但該方法實驗過程繁瑣、耗時長，操作不當(dāng)會導(dǎo)致結(jié)果的重現(xiàn)性較差，影響實驗的準(zhǔn)確度。QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)是2003年由Anastassiades 和Lehotay提出的一種主要應(yīng)用于農(nóng)藥殘留分析的前處理技術(shù)[12]，目前QuEChERS方法包括原創(chuàng)方法、美國分析化學(xué)家協(xié)會標(biāo)準(zhǔn)方法(AOAC 2007.01)[13]和歐洲標(biāo)準(zhǔn)化委員會標(biāo)準(zhǔn)方法(CEN法15662)[14]。由于其具有簡便、快速、環(huán)境友好、試劑消耗少等諸多優(yōu)點，已經(jīng)拓展應(yīng)用于多領(lǐng)域的檢測，在分析化妝品禁用物質(zhì)方面也獲得了較好的應(yīng)用[15-18]。

本研究基于改進(jìn)的QuEChERS前處理技術(shù)并結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)，建立了同時測定4種不同基質(zhì)類型化妝品中15種硝基咪唑類禁用藥物的定量方法。同時優(yōu)化了QuEChERS前處理條件和色譜-質(zhì)譜條件，并通過基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線，消除了不同類型化妝品中基質(zhì)效應(yīng)的影響，保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。該方法靈敏、簡便、快速，可為化妝品中硝基咪唑類禁用藥物的檢測提供有效的技術(shù)手段，極大提高化妝品的風(fēng)險檢測水平，也為國家化妝品相關(guān)檢驗方法的補充提供了依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1290高效液相色譜儀、Agilent 6460 三重四極桿質(zhì)譜儀(美國安捷倫科技有限公司)；XPE 205型電子天平(瑞士梅特勒-托麗多儀器公司)；KQ-300DB超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；Gen pure UV/UF超純水儀(美國Thermo Fisher公司)。

對照品：4-硝基咪唑(4-HMZ，純度99.6%，下同)、羥基甲硝唑(MNZOH，98.2%)、二甲硝咪唑(DMZ，99.4%)、洛硝噠唑(RNZ，99.1%)、異丙硝唑(IPZ，98.7%)，購自Dr.Ehrenstorfer GmbH公司；2-甲硝咪唑(MNI)、替硝唑(TNZ)、奧硝唑(ONZ)、甲硝唑(MNZ)，純度均為100.0%，購自中國食品藥品檢定研究院；羥基二甲硝咪唑(HMMNI，98.0%)、塞克硝唑(SNZ，98.0%)、氯甲硝咪唑(CMNI，96.0%)，購自CNW公司；特尼噠唑(TerNDZ，99.9%)、苯硝咪唑(NBI，99.5%)，購自WITEGA Laboratorien；羥基異丙硝唑(IPZOH，99.0%，Sigma公司)。

甲醇、乙腈(德國 Merck 公司)，甲酸(美國Sigma公司)，均為色譜純；DisQuE 萃取鹽包(內(nèi)含6 g硫酸鎂、1.5 g 乙酸鈉，AOAC法2007.01，美國 Waters 公司)；DisQuE 萃取鹽包(內(nèi)含4 g硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g檸檬酸鈉、0.5 g檸檬酸氫二鈉，CEN法15662，美國 Waters 公司);N-丙基乙二胺(PSA)、石墨化碳(GCB)、十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18)(天津博納艾杰爾科技有限公司)，超純水(18.2 MΩ·cm)由本實驗室純水儀制備，其他試劑均為分析純。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密稱取15種硝基咪唑類對照品10 mg置于10 mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度為1 000 mg/L的單標(biāo)儲備液，于4 ℃冰箱保存。

分別精密量取1.0 mL 單標(biāo)儲備液置于50 mL棕色量瓶中，用乙腈稀釋并定容，配制成質(zhì)量濃度為20 mg/L 的中間濃度混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

使用各種空白基質(zhì)提取液和中間濃度混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，配制成質(zhì)量濃度分別為5、10、50、100、500 μg/L的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液。

1.3 樣品前處理

乳液類化妝品：稱取樣品0.5 g(準(zhǔn)確至 0.001 g)于 50 mL 具塞離心管中，加入20 mL 0.1%甲酸-乙腈提取溶劑，渦旋振蕩1 min混合均勻，超聲提取30 min；然后加入鹽析劑6 g硫酸鎂、1.5 g乙酸鈉，渦旋均勻，4 000 r/min離心5 min。吸取1.5 mL上清液于凈化管中，加入凈化劑50 mg PSA，渦旋1 min，10 000 r/min 離心5 min，吸取上清液過 0.22 μm 濾膜，進(jìn)行HPLC-MS/MS分析。

水劑類化妝品：提取溶劑改為0.1%氨水-乙腈，凈化劑為100 mg PSA，其余步驟同“乳液類化妝品”。

散粉類化妝品：凈化劑改為50 mg PSA和50 mg C18，其余步驟同“乳液類化妝品”。

膏霜類化妝品：提取溶劑改為純乙腈，鹽析劑為4 g硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g檸檬酸鈉和0.5 g檸檬酸氫二鈉，其余步驟同“乳液類化妝品”。

1.4 儀器條件

1.4.1 色譜條件色譜柱:XSelect CSH C18(2.1 mm×150 mm，3.5 μm)；流動相：A為0.1%甲酸-乙腈,B為0.1%甲酸水溶液；梯度洗脫程序：0～2 min，5%A；2～17 min，5%～35%A；17～19 min，35%～95%A；19～20 min，95%A；20～20.1 min，95%～5%A；20.1～22 min，5%A，柱溫：35 ℃；流速：0.25 mL/min；進(jìn)樣體積：1 μL。

1.4.2 質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源(ESI+)；檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；干燥氣：氮氣，溫度 280 ℃，流速 14 L/min；輔助氣：氮氣，溫度350 ℃，流速11 L/min；毛細(xì)管電壓：3 000 V；離子駐留時間(Dwell time)：25 ms。相應(yīng)的監(jiān)測離子對(m/z)、碎裂電壓和碰撞能量參數(shù)見表 1。

表1 15種硝基咪唑類化合物的MRM模式優(yōu)化參數(shù)Table 1 MRM optimized parameters of 15 nitroimidazoles

*quantitation ion

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

2.1.1 色譜柱的選擇色譜柱的填料性質(zhì)及顆粒大小是影響樣品組分分離度的主要因素，為獲得更高的分離度、靈敏度和樣品通量，本實驗選擇了小顆粒填料、柱效較高的4種快速分離色譜柱進(jìn)行優(yōu)化：A柱為Waters XSelect CSH C18(2.1 mm×150 mm,3.5 μm)，B柱為Agilent ZORBAX Extend C18(2.1 mm×150 mm,1.8 μm)，C柱為Agilent ZORBAX SB C18(2.1 mm×100 mm,1.8 μm)，D 柱為Waters ACQUITY HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8 μm)。結(jié)果表明，在同等色譜條件下，15種硝基咪唑類藥物在A柱上的色譜峰形最優(yōu)，并且經(jīng)梯度洗脫獲得的分離效果最理想，如圖1所示，其余3種色譜柱均存在色譜峰分叉的情況。因此，最終選擇XSelect CSH C18柱為最佳色譜柱。

圖1 15種硝基咪唑類藥物的總離子流圖Fig.1 Total ion chromatogram of 15 nitroimidazolesthe number denoted was the same as that in Table 1

2.1.2 流動相的選擇基于硝基咪唑類藥物易溶于甲醇和乙腈，微溶于水的物理性質(zhì)，選擇了反相色譜常用的流動相體系甲醇-水和乙腈-水進(jìn)行考察?？紤]到在質(zhì)譜正離子模式下，甲酸可使目標(biāo)物預(yù)形成[M+H]+，有助于促進(jìn)質(zhì)子離子化，從而提高分析靈敏度。因此本實驗著重考察了甲醇-0.1%甲酸水、乙腈-0.1%甲酸水、0.1%甲酸甲醇-0.1%甲酸水、0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水為流動相時各待測物的分離效果。結(jié)果表明，0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水為流動相體系時效果最佳、靈敏度更高，且峰形尖銳對稱、分離度好。因此本實驗選用0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水作為最佳流動相體系。

2.1.3 流速的選擇在進(jìn)行LC-MS/MS分析時，流速對譜峰的分離及峰形方面起著重要的作用。流速過大(在色譜柱的耐受范圍之內(nèi))時，則色譜峰分離不完全；流速過小時，易造成峰形拖尾以及分析時間過長，從而降低工作效率。同時，流速的選擇還應(yīng)考慮離子化效率的問題。本研究分別考察了流速為0.2～0.4 mL時色譜峰的分離效果及峰形，結(jié)果表明，當(dāng)流速為0.25 mL/min時，各組分的色譜峰分離較好，峰形最優(yōu)，且有利于提高離子化效率。

2.1.4 柱溫的選擇色譜柱溫度的選擇不僅要考慮色譜峰的分離效果，還要考慮填料和樣品的性質(zhì)。分別考察了20 ℃、30 ℃、40 ℃ 時色譜峰的分離效果。結(jié)果顯示，溫度對15種硝基咪唑類藥物分離效果的影響不明顯。綜合考慮，選擇30 ℃作為最佳色譜柱溫度。

優(yōu)化條件下,15種硝基咪唑類藥物的提取離子色譜圖見圖2。

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

將對照品混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液用甲醇稀釋成質(zhì)量濃度為500 μg/L的溶液，采用MRM模式對待測物進(jìn)行質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化。15種硝基咪唑類藥物及其代謝物均含有氮原子，在ESI+模式下進(jìn)行全掃描，可獲得理想的準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+。以準(zhǔn)分子離子峰為母離子，調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)牧呀怆妷?，選擇響應(yīng)值較高的兩個碎片作為子離子和母離子組成離子對，同時分別優(yōu)化各離子對的碰撞能量、毛細(xì)管電壓、霧化氣、輔助氣等參數(shù)，最終獲得如表1所示的質(zhì)譜條件。

2.3 樣品前處理條件的優(yōu)化

2.3.1 提取溶劑的選擇硝基咪唑類藥物的極性較強，常用的提取溶劑主要有甲醇、乙腈、乙酸乙酯等。考慮到甲醇和乙酸乙酯的鹽析效果較差，不利于后續(xù)采用 QuEChERS 方式凈化樣液，因此選用乙腈作為提取溶劑作進(jìn)一步考察。

圖3 不同提取溶劑對4-硝基咪唑提取效率的影響Fig.3 Effects of different extraction solvents on extraction efficiencies of 4-HMZ

圖4 鹽析劑配方對硝基咪唑類藥物提取效率的影響Fig.4 Effect of salting-out agent formulation on extraction efficiencies of nitroimidazolesA:water aqua；B:cream

由于硝基咪唑類藥物具有酸堿兩性化學(xué)性質(zhì)，在弱酸性條件下呈質(zhì)子化狀態(tài)，在弱堿性條件下呈游離分子狀態(tài)，因此酸堿條件對硝基咪唑類化合物的提取率影響較大。本實驗選取市售陰性空白樣品(水劑類、散粉類、乳液類和膏霜類)各6份，向每份空白樣品中各加入400 μL 20 μg/L的15種硝基咪唑類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋振蕩混勻。向每1類化妝品中分別加入 0.1%甲酸-乙腈、純乙腈、0.1%氨水-乙腈溶液，每2份為一組平行樣品，渦旋振蕩混勻，定容至20 mL，經(jīng)QuEChERS方式凈化、過濾后，進(jìn)行HPLC-MS/MS分析?？疾炝瞬煌釅A條件下目標(biāo)化合物的提取效率。結(jié)果顯示，在不同樣品基質(zhì)中，同一提取溶劑對目標(biāo)化合物的提取效率有較大差異，以4-HMZ為例(圖3)，在水劑類空白加標(biāo)樣品中，0.1%氨水-乙腈的提取效率較高，在散粉類和乳液類空白加標(biāo)樣品中，0.1%甲酸-乙腈的提取效率遠(yuǎn)高于其余兩種。在膏霜類空白加標(biāo)樣品中，雖然3種提取溶劑對4-HMZ的提取效率差別不大，但對另外幾種化合物的提取效率差別較大，其中以純乙腈的萃取效率較佳。因此，綜合考慮3種提取溶劑下15種硝基咪唑類藥物的提取效率，水劑類樣品選擇0.1%氨水-乙腈作為提取溶劑，散粉類和乳液類樣品選擇0.1%甲酸-乙腈作為提取溶劑，膏霜類樣品選擇純乙腈作為提取溶劑。

2.3.2 鹽析劑種類與用量的確定QuEChERS前處理過程中加入鹽析劑有利于有機相與水相分層，從而防止樣品中的水分及雜質(zhì)進(jìn)入提取液，以提高目標(biāo)物的回收率。目前QuEChERS常見的市售鹽析劑配方包括經(jīng)典法(4 g硫酸鎂+1.5 g乙酸鈉)、AOAC法(6 g硫酸鎂+1.5 g乙酸鈉)、CEN法(4 g硫酸鎂+1 g氯化鈉+1 g檸檬酸鈉+0.5 g檸檬酸氫二鈉)。

本實驗選取市售陰性空白樣品(水劑類、散粉類、乳液類和膏霜類)各3份，向每份空白樣品中各加入400 μL 20 mg/L的15種硝基咪唑類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋振蕩混勻。向每份樣品中分別加入經(jīng)典法、AOAC法和CEN法的鹽析劑配方，渦旋振蕩混勻，定容至20 mL，經(jīng)QuEChERS方式凈化、過濾后，進(jìn)行HPLC-MS/MS分析?？疾炝瞬煌}析劑配方下目標(biāo)化合物的提取效率。結(jié)果顯示，在水劑類、散粉類和乳液類基質(zhì)中使用AOAC法鹽析劑配方的提取效率較高，而在膏霜類基質(zhì)中使用CEN法鹽析劑配方的提取效率較高(見圖4)。綜合考慮各種鹽析劑的提取效率，選擇在水劑類、散粉類和乳液類基質(zhì)中加入AOAC法鹽析劑配方，在膏霜類基質(zhì)中加入CEN法鹽析劑配方。

2.3.3 吸附劑的選擇QuEChERS的原理是利用固體吸附劑選擇性吸附雜質(zhì)從而達(dá)到凈化樣品的目的，因此吸附劑的選擇是一個重要的考察因素。常用吸附劑包括C18、PSA和石墨化碳(GCB)，其中C18填料是一種憎水硅膠基吸附劑，對非極性化合物具有很強的吸附性能；GCB具有六元環(huán)結(jié)構(gòu)，與平面分子具有很強的親和力，適用于多種有機化合物的提取和凈化，特別適用于從基質(zhì)中分離和除去有色物質(zhì)和固醇類等；PSA 是同時含有伯胺和仲胺基團(tuán)的高純硅膠基質(zhì)類極性吸附劑，具有極性作用和弱陰離子交換作用，可有效地去除提取液中的有機酸、脂肪酸和極性色素等水溶性雜質(zhì)。

以苯硝咪唑為例，考察了單獨使用C18、PSA和GCB吸附劑對15種目標(biāo)化合物的提取回收率。結(jié)果表明，無論何種化妝品基質(zhì)，使用GCB吸附劑的提取效率遠(yuǎn)低于其余兩種凈化劑。其原因可能是由于苯硝咪唑結(jié)構(gòu)中含有苯環(huán)，GCB的六元環(huán)結(jié)構(gòu)對其具有很強的親和力，從而造成提取回收率下降。因此本實驗不使用GCB作為吸附劑。進(jìn)一步考察C18和PSA在不同組合(1∶2、1∶1、2∶1)下15種目標(biāo)化合物的提取回收率，并和單獨使用C18和PSA的提取回收率進(jìn)行比較。結(jié)果表明，水劑類、乳液類和膏霜類基質(zhì)單獨使用PSA時的提取效果較好，而散粉類基質(zhì)使用比例為1∶1的C18和PSA混合吸附劑時提取回收率較高。

實驗還對比了不同 PSA 吸附劑用量(50、100、200 mg)對目標(biāo)化合物回收率的影響。結(jié)果表明，在水劑類和乳液類基質(zhì)中，不同 PSA 吸附劑用量對硝基咪唑類藥物的回收率無明顯影響，而在復(fù)雜的膏霜類基質(zhì)中，PSA吸附劑用量為50 mg時，部分化合物的回收率明顯較高。因此，綜合各種吸附劑種類和用量的比對結(jié)果，水劑類化妝品選擇100 mg PSA，散粉類化妝品選擇50 mg PSA和50 mg C18，乳液類和膏霜類化妝品選擇50 mg PSA進(jìn)行后續(xù)考察。

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

本實驗參考相關(guān)文獻(xiàn)對基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行了考察[19-20]。取空白基質(zhì)化妝品樣品，加入一定量標(biāo)準(zhǔn)儲備液，按“1.3”方法進(jìn)行樣品前處理，配成400 μg/L基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，同時將400 μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液直接進(jìn)樣分析，計算兩者目標(biāo)物質(zhì)譜響應(yīng)的比值(ME)：ME=B/A，其中A和B分別表示分析物在純?nèi)軇┖涂瞻谆|(zhì)溶液中的峰面積。若ME>1，則表示基質(zhì)對分析物的響應(yīng)產(chǎn)生增強效應(yīng)；若ME<1則表示基質(zhì)對分析物的響應(yīng)產(chǎn)生抑制效應(yīng)；若ME=1，則表示不存在基質(zhì)效應(yīng)。計算結(jié)果表明(見表2)，15種目標(biāo)化合物的響應(yīng)比值為0.46～1.02，4種化妝品基質(zhì)對15種硝基咪唑類藥物均存在不同程度的基質(zhì)效應(yīng)，特別在乳液和膏霜類基質(zhì)中多呈抑制效應(yīng)。因此，本實驗采用基質(zhì)匹配的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以減小基質(zhì)效應(yīng)的影響。

表2 不同基質(zhì)中15種硝基咪唑類藥物的基質(zhì)效應(yīng)、檢出限及定量下限Table 2 Matrix effects,LODs and LOQs of 15 nitroimidazoles in different matrices

2.5 線性范圍、檢出限與定量下限

按“1.2”配制不同濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液，依次進(jìn)樣，以所測目標(biāo)物的峰面積為縱坐標(biāo)(y)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x，μg/L)，繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程和回歸系數(shù)(r)。實驗結(jié)果顯示15種硝基咪唑類藥物在5～500 μg/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r2)均大于0.99。

根據(jù)《規(guī)范》(15版)衛(wèi)生化學(xué)檢測方法總則要求，定量下限(LOQ)和檢出限(LOD)分別以10倍和3倍空白噪聲相對應(yīng)的質(zhì)量或濃度表示。但由于高分辨質(zhì)譜的基線噪聲非常低，以S/N方法計算出的結(jié)果與真實值存在誤差。因此本研究采用逐級稀釋15種硝基咪唑類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液的方法確定LOQ和LOD，以所測目標(biāo)物峰信噪比為10∶1時的目標(biāo)物濃度確定為該化合物的LOQ，以所測目標(biāo)物峰信噪比為3∶1時的目標(biāo)物濃度為該化合物的LOD。結(jié)果顯示，15種硝基咪唑類藥物的LOD為0.8～200 μg/kg，LOQ為4～400 μg/kg(見表3)。

表3 水劑類基質(zhì)中15種硝基咪唑類藥物的回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)Table 3 Recoveries and RSDs of 15 nitroimidazoles in the water aqua matrices(n=6)

2.6 回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

準(zhǔn)確稱取空白水劑、散粉、乳液和膏霜類化妝品各0.5 g，平行6份，分別定量加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，設(shè)定低、中、高3個濃度加標(biāo)水平(0.8、4、16 mg/kg)，按照“1.3”和“1.4”方法進(jìn)行樣品前處理和上機測定，計算出相應(yīng)目標(biāo)化合物的加標(biāo)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。結(jié)果表明，水劑類基質(zhì)、散粉類基質(zhì)、乳液類基質(zhì)和膏霜類基質(zhì)的加標(biāo)回收率分別為87.6%～115%、89.2%～113%、86.8%～110%和88.4%～115%，RSD分別為0.6%～8.0%、0.6%～8.4%、0.3%～5.4%和0.5%～7.2%，方法的準(zhǔn)確度和精密度均符合相關(guān)法規(guī)要求。以上數(shù)據(jù)表明本研究建立的方法適合水劑、散粉、乳液和膏霜類基質(zhì)的篩查測定。其中水劑類基質(zhì)的加標(biāo)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差數(shù)據(jù)見表3。

圖5 陽性樣品的提取離子色譜圖Fig.5 Extraction ion chromatogram of a positive sample

2.7 實際樣品的測定

應(yīng)用本方法分別對從市場收集的不同劑型、不同產(chǎn)地、不同品牌的87份祛痘類化妝品進(jìn)行測定，其中2份樣品被檢出甲硝唑，含量分別為5 193 mg/kg和6 725 mg/kg。采用本方法與《規(guī)范》15版的檢測結(jié)果進(jìn)行對比，結(jié)果表明，本方法與標(biāo)準(zhǔn)方法的結(jié)果基本一致。陽性樣品的MRM提取離子色譜圖如圖5所示。

3 結(jié) 論

本文建立了基于QuEChERS提取的HPLC-MS/MS測定4種不同化妝品基質(zhì)中15種硝基咪唑類禁用藥物的方法。實驗優(yōu)化了HPLC分離條件和質(zhì)譜參數(shù)，針對不同的樣品基質(zhì)優(yōu)化出最適合的提取方法和凈化條件。方法學(xué)評價結(jié)果表明，該方法的加標(biāo)回收率(86.8%～115%)和RSD(0.3%～8.4%)良好，15種目標(biāo)化合物的檢出限為0.8～200 μg/kg，定量下限為4～400 μg/kg。該方法前處理簡單、準(zhǔn)確度好、靈敏度高，適用于多種基質(zhì)類型化妝品中禁用藥物的檢測，為化妝品安全監(jiān)管提供了新的技術(shù)手段。