許慧 高新國 李磊 劉蘭畦 張沖

摘 ?????要： 建立了固相微萃取-氣相色譜質(zhì)譜法分析燈盞花中揮發(fā)油組分的方法。通過該方法共鑒定出了64種組分，包括33種烴類、9種酮類、8種芳香族類、4種醇類、3種醛類、3種醚類、2種酚類和2種酸類;并通過面積歸一化法對其相對含量進行了測定，鑒定出的組分占燈盞花揮發(fā)油成分總峰面積的91.34%。

關(guān) ?鍵 ?詞：固相微萃取;燈盞花;揮發(fā)油;氣相色譜質(zhì)譜法

中圖分類號：O657. 63 ??????文獻標識碼： A ??????文章編號： 1671-0460（2019）06-1354-04

Abstract： A solid phase microextraction-gas chromatography tandem mass spectrometry （SPME/GCMS） method was established for the determination of essential oil components in breviscapus. 64 Chemical components were identified by this method， including 33 hydrocarbons， 9 ketones， 8 aromatics， 4 alcohols， 3 aldehydes， 3 ethers， 2 phenols and 2 kinds of acids. And the relative content was determined by peak area normalization method. The results indicated that identified components accounted for 91.34% of the total peak area of the chemical constitutes from Erigeron breviscapus.

Key words： Solid phase microextraction; Erigeron breviscapus; Essential oil; Gas chromatography tandem mass spectrometry

燈盞花是菊科植物短葶飛蓬 （Erigeron breviscapus） 的全草，又名燈盞細辛、東菊[1]。燈盞花主要生長在我國的云南、廣西、四川、貴州、西藏等高海拔地區(qū)。隨著現(xiàn)代中醫(yī)藥行業(yè)的發(fā)展，人們對其進行了大規(guī)模開采，因此，野生燈盞花已經(jīng)變得十分罕見了。明朝時期中醫(yī)藥學著作《滇南本草》中對燈盞花進行了首次記載。燈盞花性寒、微苦、甘溫辛，具有散寒解表、祛風除濕、活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)、消炎止痛等功效[2]。目前，燈盞花在臨床上主要用于心腦血管疾病、糖尿病、腎病和頸性眩暈等疾病的治療。

近年來，對燈盞花的研究報道主要集中在燈盞花素的提純制備和臨床研究上，而對燈盞花中其他類化學成分的研究相對較少。黃洪波等[3]從燈盞花的乙酸乙酯提取物中分離出了芹菜素、山奈酚、對羥基苯甲酸、羥基黃芩素、4-二羥基苯甲酸、槲皮素和木犀草素共7種化學成分，其中山奈酚和槲皮素為首次從燈盞花中分離出來。張衛(wèi)東等[4，5]從燈盞花中提取出了3-羥基-4-吡喃酮、6-甲氧基-7-羥基香豆素、6-羥基-7-甲氧基香豆素、（E）-1-（3，4-二羥苯基）丙烯酸乙酯等成分;隨后又從燈盞花的乙醇提取液中分離出了5種黃酮類化合物。

固相微萃取技術(shù)[6] （Solid phase microextraction， SPME） 是由加拿大滑鐵盧大學的Pawliszyn及其同事Arthur共同提出的一種樣品前處理技術(shù)，起初主要應用于環(huán)境化學的分析，后來經(jīng)過不斷深入的研究，該技術(shù)在食品、藥品、臨床醫(yī)學等各個領(lǐng)域得到的廣泛的應用[7]。該技術(shù)集采樣、萃取、濃縮、解析、進樣于一體，并且無需有機溶劑，分析周期短，靈敏度高，是一種分析中草藥中揮發(fā)油成分的有力手段。本文，作者利用固相微萃取技術(shù)對燈盞花中的揮發(fā)油成分進行了定性分析。

1 ?儀器與材料

Agilent 7890A-5973N GCMS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國安捷倫公司）;AL104型天平（編號B214827316，梅特勒-托利多儀器上海有限公司）;KQ-250B型超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;100～1 000 μL移液器（編號429358A，德國艾本德公司）。SPME手動進樣手柄、CAR/DVB/PDMS （50 μm）、PDMS （100 μm）、PDMS/DVB （65 μm）、PA （85 μm） 固相微萃取頭（美國Superlco）。

2 ?方法與條件

2.1 ?氣相色譜分析條件

氣相色譜條件：色譜柱為HP-5 ms （30 m×250 ?m×0.25 ?m），柱箱升溫程序為：初始溫度50 °C，保持1 min，以5 °C/min升至220 °C保持6 min，再以每分鐘10 °C升至260 °C保持15 min。進樣口溫度280 °C。采用脈沖不分流進樣模式。載氣使用高純氦氣，流速為1.0 mL/min。

2.2 ?質(zhì)譜條件

離子源為電子電離源 （Electronic Ionization Source， EI），電離能量為70 eV，離子源溫度為230 °C，質(zhì)量分析器溫度為150 °C，傳輸線溫度為290 °C。掃描模式：全掃描 （Full Scan）;掃描范圍29-600 m/z。目標化合物匹配指紋庫為NIST2010。

2.3 ?樣品處理

稱取1 g粉碎后的燈盞花粉末，置于20 mL頂空瓶中，加入2 mL超純水，壓蓋密封。將固相微萃取頭組裝到固相微萃取手柄上，并將其插入到密封好的頂空瓶中。90 ℃頂空萃取40 min后取出，立即轉(zhuǎn)移至氣相色譜進樣口進行解析，解析溫度為280 ℃，解析時間為5 min。

3 ?結(jié)果與討論

3.1 ?固相微萃取纖維的選擇

作者分別采用CAR/DVB/PDMS （50 μm）、PDMS （100 μm）、PDMS/DVB （65 μm）、PA （85 μm） 四種固相微萃取纖維對燈盞花樣品中的揮發(fā)油組分進行定性分析;并以每種萃取纖維提取出來的揮發(fā)油目標組分數(shù)目為依據(jù)，對四種萃取纖維的萃取能力進行對比，根據(jù)其提取的組分數(shù)，選擇最優(yōu)的萃取纖維。結(jié)果如表1所示。

從表中結(jié)果看出，CAR/DVB/PDMS （50 μm） 萃取纖維共分析出64種化合物，數(shù)目最多，且色譜峰分離良好，峰形對稱（見圖1）。因此，本次工作選用CAR/DVB/PDMS （50 μm） 來萃取燈盞花中的揮發(fā)油組分。

3.2 ?揮發(fā)油成分分析

將樣品譜圖與NIST指紋庫進行比對，一共鑒定出了64種化合物。經(jīng)過面積歸一化分析，所有鑒定出來的化合物占所有色譜峰總面積的91.34%。鑒定出的化學組分信息均在表2中列出。

在燈盞花揮發(fā)油成分中，共鑒定出64種化合物，包括33種烴類、9種酮類、8種芳香族類、4種醇類、3種醛類、3種醚類、2種酚類和2種酸類。各個種類化合物所占比例見表3。

其中，烴類所占比例最高，為72.27%，其次為芳香類化合物，占19.07%，其余幾類化合物占比均小于3%。其中，所鑒定出來的烴類主要有α-蒎烯、β-蒎烯、1-甲基（1-甲基乙烯基）環(huán)己烯、β-橄欖烯、α-古蕓烯、莰烯、蓽澄茄油烯、9-甲基四環(huán)[7.3.1.0（2.7）.1（7.11）]十四烷、反式石竹烯、α-芹子烯、雙環(huán)倍半萜烯、香檸檬烯、律草烯、姜黃烯、瑟林烯、γ-依蘭油烯、γ-芹子烯、α-木欖烯、正十五烷、β-甜沒藥烯、δ-杜松烯、去氫白菖烯、β-倍半水芹烯、α-菖蒲烯、正十六烷、喇叭烯、7，9-二甲基-十六烷、2-甲基-十六烷、愈創(chuàng)藍油烴、正十七烷、姥鮫烷、植烷等33種化合物。鑒定出的揮發(fā)油組分中，相對含量在5%以上的化合物有β-蒎烯（9.60%），α-古蕓烯（6.86%），9-甲基四環(huán)[7.3.1.0（2.7）.1（7.11）]十四烷（14.56%），β-甜沒藥烯（9.18%），β-倍半水芹烯（9.85%）。

4 ?結(jié)束語

目前，對于燈盞花各類化學組分的研究相對較多，且比較全面，但是對于燈盞花的藥物代謝動力學研究相對較少，弄清楚燈盞花中含有的各類化學組分將對燈盞花的臨床研究大有裨益。本文中，作者采用固相微萃取-氣相色譜質(zhì)譜法對中藥藥材燈盞花中的揮發(fā)油組分進行了分析，共鑒定出了64種化合物，其相對含量占燈盞花揮發(fā)油總量的91.3%。其鑒定出的主要成分為β-蒎烯（9.60%），α-古蕓烯（6.86%），9-甲基四環(huán)[7.3.1.0（2.7）.1（7.11）]十四烷（14.56%），β-甜沒藥烯（9.18%），β-倍半水芹烯（9.85%）等烯烴組分。因此，采用固相微萃取-氣相色譜質(zhì)譜法對燈盞花中的揮發(fā)性有機化合物的分析效果良好，有望實現(xiàn)對燈盞花等中藥藥材的揮發(fā)油成分的快速分析。

參考文獻：

[1]劉宏， 楊祥良， 徐輝碧. 燈盞花的研究進展[J]. 中草藥， 2001， 33（1）：566-568.

[2] 張紅祥， 楊和金， 包廣雷， 黃加文， 李艷. 燈盞花素主要藥效學研究進展[J]. 云南中醫(yī)中藥雜志， 2016， 37：75-78.

[3] 黃洪波， 包文芳， 楊芳芳， 賈英， 李康. 燈盞花的化學成分研究[J]. 沈陽藥科大學學報， 2001， 18：266-267.

[4] 張衛(wèi)東， 孔德云， 李惠廷， 顧正兵， 秦路平. 燈盞花的化學成分研究（I）[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志， 1998， 11：498-500.

[5] 張衛(wèi)東， 陳萬生， 王永紅， 劉文墉， 孔德云， 李惠廷.燈盞花黃酮類化學成分的研究[J]. 中國中藥雜志， 2000， 25：536-537.

[6] C.L. Arthur， J. Pawliszyn.Solid Phase Microextraction with Thermal Desorption Using Fused Silica Optical Fibers[J]. J. Anal. Chem.， 1990， 62：2145-2148.

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