林 琳，艾啟青，劉 燕

（福州科免生物技術(shù)有限公司，福建 福州 350022）

豬偽狂犬病（Pseudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性、急性傳染病，在我國屬于二類動物疫病[1]。PRV 對外界抵抗力強(qiáng)，中間宿主多，散毒方式多樣，傳播途徑主要為消化道和呼吸道，還可通過交配、精液、胎盤傳播[2]。通?？梢鹑焉锬肛i流產(chǎn)、木乃伊胎、死胎和產(chǎn)弱仔；初生仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，感染率和死亡率可達(dá)100% ；成年豬感染后多耐過，不發(fā)病呈隱性感染，造成豬群中長期帶毒排毒，成為最危險的傳染源[3]。PR 發(fā)病率高，帶毒率高，我國大多數(shù)豬場都存在PR 發(fā)病的風(fēng)險，自2011 年底以來，PR 變異毒株毒力增強(qiáng)，對豬的致病力增強(qiáng)[4]，我國PR 野毒感染日益嚴(yán)重[5]，已成為危害我國生豬養(yǎng)殖的重大疫病之一，對PR的防控提出了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。

福建地區(qū)豬場分散且規(guī)模差異大，為掌握現(xiàn)有的防疫控制體系下福建省不同規(guī)模豬場PR 野毒感染的情況，為PR 的有效控制和凈化提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)參考，本實驗從2018年1 月年至2019 年6 月共采集福建省不同規(guī)模的158 個豬場10 577 份血清，對血清PR gE 抗體進(jìn)行流行病學(xué)全面調(diào)查與系統(tǒng)分析。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 血清樣品

血清樣品采集時間為2018 年1 月至2019 年6 月，共10 577 份，分別來自福建省不同規(guī)模的158 個豬場，包括種豬場和商品育成豬場，其中不同生長階段商品豬群樣品5 263 份，種豬群血清樣品5 314份。并記錄各豬場主要疫病免疫程序，方便對結(jié)果進(jìn)行分析。

1.1.2 試劑與儀器

PR gE 抗體檢測采用海博萊gE-ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）鑒別診斷試劑盒。德國Eppendorf 移液器；美國BioTek ExL800 酶標(biāo)儀和ExL50 洗板機(jī)；恒溫培養(yǎng)箱；離心機(jī)。

1.2 實驗方法

1.2.1 采樣方法

樣品采用橫斷面采樣方法，分別采集不同生長階段商品豬群、生產(chǎn)母豬、后備母豬以及公豬的血液，分離血清，進(jìn)行ELISA 檢測。

1.2.2 操作步驟

阻斷ELISA 法。操作方法參照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

結(jié)果判定參照試劑盒說明書進(jìn)行。檢測的血清樣品全部來自使用gE 基因缺失疫苗免疫的豬場，檢測到血清樣品gE 抗體呈陽性時，則可以判斷該豬場受到PR 野毒感染。在進(jìn)行豬場結(jié)果判定和統(tǒng)計時，只要豬場有一個陽性血清樣品，則該場即判定為PR gE 抗體陽性場。

2 試驗結(jié)果

2.1 福建省不同規(guī)模豬場豬群偽狂犬病gE 抗體檢測結(jié)果

從2018 年1 月 至2019 年6 月共收集158 個不同規(guī)模豬場的10 577份豬血清樣品，共檢測出108 個陽性場，陽性場比例為68.35%，血清樣品gE 抗體陽性率為29.13%；不同規(guī)模豬場PR 野毒感染陽性場的陽性率分別為56.25%、61.54%、71.93% 和71.19%，不同規(guī)模豬場血清樣品gE抗體陽性率分別為32.16%、20.56%、31.11% 和31.96%（表1、表2）；通過PASS19.0 進(jìn)行卡方檢驗，結(jié)果顯示不同規(guī)模場PR 野毒感染陽性差異不顯著（P=0.532 ＞0.05），血清gE抗體陽性差異極顯著（P =0 ＜0.001）。由以上檢測結(jié)果來看，福建省不同規(guī)模豬場均存在著不同程度的PR 野毒感染，且感染情況較為嚴(yán)重。

2.2 福建省不同規(guī)模豬場各生長階段的商品豬群和種豬群偽狂犬病gE抗體檢測結(jié)果

從2018 年1 月 至2019 年6月共收集158 個不同規(guī)模豬場的5 263 份各生長階段的商品豬血清樣品，5 314 份種豬群的血清樣品，gE-ELISA 檢測結(jié)果顯示（表3、表4）商品豬群和種豬群gE 抗體陽性率分別為28.06% 和30.18%。通過PASS19.0 進(jìn)行卡方檢驗，結(jié)果顯示不同階段的商品豬gE 抗體陽性率差異極顯著(P =0 ＜0.001)，不同種豬群的gE 抗體陽性率差異極顯著(P=0 ＜0.001 )。哺乳仔豬和保育豬由于受母源抗體影響，尚不能確定是否為野毒感染，但育肥豬階段的血清gE 抗體陽性率仍有25.15%，說明豬場現(xiàn)有的疫苗免疫并不能完全保護(hù)豬只不受野毒感染，特別是豬場規(guī)模＞1 000 頭母豬的大型豬場，育肥豬的血清gE 抗體陽性率最高為37.14% ；生產(chǎn)母豬的PR 野毒感染情況最為嚴(yán)重，其中g(shù)E 抗體陽性率最高的是規(guī)?！?00 頭母豬的小場，陽性率高達(dá)41.97% ；后備母豬和公豬的gE 抗體檢測結(jié)果顯示豬場規(guī)模在200 ～500 頭母豬的中小場與≤200 頭母豬的小場感染情況較為嚴(yán)重，雖然＞1 000 頭母豬的大場和500 ～1 000 的中大場陽性率較低，但也存在著不同程度的PR 野毒感染。

表1 福建省不同規(guī)模豬場PR gE 抗體陽性場檢測結(jié)果

表 2 福建省不同規(guī)模豬場PR gE 抗體檢測結(jié)果

3 討論

1）此次調(diào)查的豬場均都采用缺失gE 基因的PR 基因缺失苗接種免疫，gE 基因是PRV 的主要毒力相關(guān)基因，也是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）所規(guī)定基因缺失疫苗的首選缺失基因，通過gE-ELISA檢測可區(qū)別疫苗與野毒的感染。ELISA 敏感性高，且快速、操作簡便，是目前最為廣泛應(yīng)用的一種免疫檢測方法，被OIE 定為診斷PR 的首選血清學(xué)方法，適于大面積血清樣品的檢測[6]。本次調(diào)查通過gE-ELISA 檢測試劑盒檢測了全省4 種不同規(guī)模的158 個豬場的10 577 份豬血清樣品，調(diào)查結(jié)果顯示有68.35% 的陽性場，血清樣品gE 抗體陽性率為29.13%，這一結(jié)果與2018 年羅先[7]的福建省豬群疫病檢測統(tǒng)計與分析中豬偽狂犬病gE 抗體檢測結(jié)果相近。2010 年陳如敬等[8]調(diào)查福建省PRV gE 抗體豬場陽性率為62.5%，血清樣品PRVgE 抗體平均陽性率23.56%，2011 年曾新斌等[9]曾進(jìn)行PRV 感染情況調(diào)查結(jié)果表明感染偽狂犬病野毒的平均陽性率為19.39%，由此可見近年來福建省PR 野毒感染陽性率普遍升高，疫情日趨嚴(yán)重，并且許多豬場的免疫保護(hù)不盡如人意，這可能與變異毒株的出現(xiàn)有關(guān)。近些年來，福建多地都已分離到PR變異株，并有研究表明，與以前的流行株相比，新流行株的抗原性已發(fā)生了較大變異，由于PRV 變異株的流行，控制與凈化PRV 顯得尤為重要。

表 3 不同生長階段的商品豬PR gE 抗體檢測結(jié)果

表 4 不同種豬群PR gE 抗體檢測結(jié)果

2) 針對不同規(guī)模豬場的血清gE 抗體檢測，結(jié)果表明不同規(guī)模豬場均存在不同程度的PR 野毒感染。雖然規(guī)模＞1 000 頭母豬的規(guī)模豬場后備母豬與公豬的陽性率較低，但商品豬和生產(chǎn)母豬的野毒感染率與中小型和小型豬場一樣嚴(yán)重。為了做好豬場PRV 的控制與凈化，預(yù)防種豬尤其是后備母豬和種公豬感染PR 野毒尤為重要。豬場要確保引進(jìn)公豬和后備母豬無PR 野毒感染，引種前需進(jìn)行g(shù)E 抗體檢測，并做好隔離等生物安全措施，待豬群穩(wěn)定后進(jìn)行PR 疫苗免疫。此次調(diào)查的豬場大部分種豬進(jìn)行每年3 次的普免，可根據(jù)豬場具體情況增加種豬免疫強(qiáng)度，年普免4 次，可以有效減少種豬的帶毒和排毒時間[10]。而對于已經(jīng)感染PR 野毒的種豬，有條件的豬場建議逐步淘汰，建立PR 野毒陰性種豬群。

3）從所調(diào)查的豬場提供的免疫程序中發(fā)現(xiàn)，部分豬場重視種豬免疫，卻忽視商品豬免疫。在實際生產(chǎn)過程中，商品豬的免疫也尤為關(guān)鍵，其關(guān)系到整個豬群的健康水平。一般豬場會對新生仔豬進(jìn)行滴鼻免疫，通過建立黏膜免疫來切斷其感染途徑，而后根據(jù)母源抗體（MDA）的情況進(jìn)行肌注首免，MDA 會干擾甚至阻斷主動免疫的發(fā)展。當(dāng)前，很多豬場普遍存在首免時間過早的問題，導(dǎo)致MDA 和疫苗抗體相互作用、相互抵消，在母源抗體存在的情況下，弱毒苗免疫能對T 細(xì)胞進(jìn)行早期活化，但若需要獲得長期的細(xì)胞免疫，至少應(yīng)加強(qiáng)一次。第一次的免疫能夠幫助減少PRV的傳播，第二次免疫則有助于建立足夠的群體免疫力以此對PRV進(jìn)行阻斷。

PR 感染與諸多復(fù)雜因素有關(guān)，除了注重豬場生物安全和飼養(yǎng)管理，建議豬場做好相關(guān)的的血清抗體檢測，因地制宜地根據(jù)豬場的流行病史和免疫抗體水平，并結(jié)合豬場實際情況制定最適宜的科學(xué)免疫程序。