彭林壽，段博芳，曾維歡，何俊濤，徐 佳，李紅炳

(1.臨滄市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 臨滄 677000；2.云南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 昆明 650201；3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650201；4.金宇保靈生物藥品有限公司，內(nèi)蒙 呼和浩特 010000；5.云南牧創(chuàng)生物科技有限公司，云南 昆明 650224)

豬 偽 狂 犬 ?。≒seudorabies）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的傳染性疾病，豬是PRV 的貯存宿主之一。臨床癥狀表現(xiàn)為出現(xiàn)神經(jīng)癥狀的3 周齡內(nèi)仔豬大量死亡；后期仔豬及育肥豬伴隨呼吸道癥狀；懷孕母豬表現(xiàn)為高流產(chǎn)率和死胎[1]。

gE 基因自然缺失的Bartha-K61株活疫苗[2]在豬場(chǎng)偽狂犬病防控中得到廣泛應(yīng)用。但2011 年以來，我國(guó)偽狂犬病毒野毒發(fā)生變化。從我國(guó)華東地區(qū)開始，越來越多的接種Bartha-K61 株免疫豬場(chǎng)，種豬群gE基因檢測(cè)轉(zhuǎn)陽，各豬群臨床病征凸顯。同時(shí)，國(guó)內(nèi)分離的經(jīng)基因工程方法人工致弱的SA215 株[3]、HB-98[4]、HB-2000[5]及國(guó)內(nèi)分離天然致弱的C 株疫苗[6]在豬場(chǎng)中得到更多地運(yùn)用。

1 材料與方法

1.1 樣本來源

樣品來源于云南省臨滄市某豬場(chǎng)。該豬場(chǎng)自2016 年8 月開始至2018 年3 月， 母豬月分娩率在71.4% ～78% 之間，月產(chǎn)房死胎、木乃伊胎及畸形胎的占比在16.95% ～31.5% 之間，月產(chǎn)房死淘率在19.4% ～42.8%。保育期正品率94.4% ～95.2%。育肥期正品率95.1 ～95.6%。自2016 年7 月感染發(fā)病后，生產(chǎn)數(shù)據(jù)最差出現(xiàn)在2016年9 月、10 月、11 月、12 月， 而后整場(chǎng)生產(chǎn)成績(jī)逐漸好轉(zhuǎn)。發(fā)病主要見于種豬群及產(chǎn)房哺乳豬。2018年3 月，分娩母豬91 窩，窩均總仔數(shù)13.19 頭，窩均活仔數(shù)10.90 頭。死胎及木乃伊胎占比17.36%。母豬流產(chǎn)3 頭，3 窩均從流產(chǎn)胎兒中檢出PRV 抗原。配種母豬105 頭，返情18 頭。全月死/ 淘產(chǎn)房仔豬58 頭、保育仔豬55 頭、育肥豬46 頭。

1.2 檢測(cè)試劑

檢測(cè)用試劑盒，由云南牧創(chuàng)生物科技有限公司贊助提供，試劑盒品牌見表1。

1.3 診斷方法

1.3.1 流行病學(xué)調(diào)查

該豬場(chǎng)于2015 年1 月至2015年4 月有豬傳染性胃腸炎- 流行性腹瀉病史。于2016 年7 月從江蘇某種豬場(chǎng)引進(jìn)種豬125 頭后，出現(xiàn)豬偽狂犬病感染發(fā)病。

1.3.2 臨床癥狀

哺乳仔豬感染后表現(xiàn)為體溫發(fā)熱（大于41 ℃）及神經(jīng)癥狀，震顫、共濟(jì)失調(diào)及角弓反張。有些病豬因呼吸困難呈犬坐式呼吸，有的轉(zhuǎn)圈或者側(cè)臥做劃水動(dòng)作，同時(shí)伴隨嘔吐及腹瀉。發(fā)病斷奶仔豬體溫發(fā)熱（大于41 ℃），一般伴有呼吸道癥狀，表現(xiàn)為打噴嚏、呼吸困難及咳嗽，如發(fā)生神經(jīng)癥狀，則病死率大于90%。母豬主要表現(xiàn)為繁殖障礙，分娩率低，死胎、木乃伊胎及弱仔比例高。育肥中、大豬主要表現(xiàn)呼吸道癥狀，部分豬伴隨支原體肺炎、傳染性胸膜肺炎的感染，呼吸道癥狀加重甚至死亡。

1.3.3 剖檢變化

病死哺乳仔豬及斷奶仔豬可見壞死性扁桃體炎，腦可見出血及非化膿性腦炎，肝臟、脾臟及腎臟可見灰白色或黃白色壞死灶。流產(chǎn)胎兒及新生哺乳豬可見肝臟及脾臟的壞死灶，肺臟及扁桃體出血灶。

1.3.4 實(shí)驗(yàn)室診斷方案

對(duì)各階段豬只血清抗體進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)產(chǎn)母豬1 ～2 胎齡10 頭，3 ～4胎齡10 頭，5 ～6 胎齡10 頭，大于等于7 胎齡10 頭。公豬全部采樣。自留配前后備豬（35 周齡以上）全部采樣。同時(shí)分別對(duì)2 周齡、4 周齡、7 周齡、10 周齡、13 周齡、16 周齡、20 周齡、24 周齡和30 周齡商品豬采樣，每組10 頭。抗體檢測(cè)項(xiàng)目包括：豬偽狂犬病gE 基因抗體、豬偽狂犬病gB 基因抗體、豬瘟抗體、豬藍(lán)耳病抗體、豬圓環(huán)病毒病抗體、口蹄疫O 型抗體及口蹄疫A 型抗體。

對(duì)一個(gè)月內(nèi)的流產(chǎn)胎兒或臍帶血進(jìn)行豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病、豬細(xì)小病毒病、豬乙型腦炎抗原檢測(cè)。對(duì)死、淘豬進(jìn)行豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病抗原檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果

通過血樣普檢，經(jīng)產(chǎn)母豬gE抗體陽性率100%，公豬gE 抗體陽性率53.84%。說明全群經(jīng)產(chǎn)母豬已被偽狂犬病野毒感染，大部分處于潛伏感染狀態(tài)，部分豬只如遇應(yīng)激因素或其他疾病不穩(wěn)定的狀態(tài)下，偽狂犬病野毒再次活躍致病。各階段死、淘豬中的幾種疑似抗原陽性檢出率見表2。豬偽狂犬病抗原在豬場(chǎng)各階段死、淘商品豬和流產(chǎn)胎兒臍帶血中均有不同比例的檢出，檢出率符合豬偽狂犬病在豬場(chǎng)豬群中的流行病學(xué)規(guī)律。

2.2 數(shù)據(jù)分析結(jié)果

該豬場(chǎng)防疫意識(shí)較強(qiáng)，使用疫苗的生產(chǎn)廠家見表3。從血清普查結(jié)果看，口蹄疫、豬瘟、豬細(xì)小病毒病、豬乙型腦炎均處于較理想的免疫狀態(tài)。該豬場(chǎng)豬藍(lán)耳病未做免疫，各階段豬藍(lán)耳病S/P 平均值均小于1.5，豬藍(lán)耳病抗體陽性率為81.71%。但保育及育肥階段豬只S/P 值變異系數(shù)較大。說明各階段豬只出現(xiàn)豬藍(lán)耳病不穩(wěn)定屬于繼發(fā)性的不穩(wěn)定。綜上，豬偽狂犬病仍然是導(dǎo)致豬場(chǎng)各區(qū)間不穩(wěn)定，生產(chǎn)指標(biāo)低下的主要因素。

3 處理方法

3.1 商品豬偽狂犬病疫苗毒株對(duì)比及篩選

疫苗對(duì)比試驗(yàn)共分3 組，選擇連續(xù)1 周內(nèi)分娩的（約20 窩）母豬及該窩仔豬作為試驗(yàn)組1，免疫SA215 株豬偽狂犬病活疫苗；而下一周分娩的母豬及該窩仔豬作為試驗(yàn)組2，免疫C 株豬偽狂犬病活疫苗；再下一周分娩的母豬及該窩仔豬作為試驗(yàn)組3，免疫Bartha-K61株活疫苗。試驗(yàn)豬只除豬偽狂犬病疫苗程序（見表4）調(diào)整外，其他飼養(yǎng)管理按豬場(chǎng)原生產(chǎn)程序執(zhí)行。疫苗免疫及抽血均安排在周四進(jìn)行。各組商品豬分別在2 周齡、4周齡、7 周齡、10 周齡、13 周齡、16 周齡、20 周齡、24 周齡時(shí)，隨機(jī)抽樣20 頭，檢測(cè)gE，gB 抗體。各階段死、淘豬只均用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 方法檢測(cè)PRV。

表1 檢測(cè)用試劑盒

表2 各階段死、淘豬抗原陽性檢出率 %

表3 豬場(chǎng)主要免疫疫苗項(xiàng)目及疫苗廠家

表4 各試驗(yàn)組免疫程序

記錄各試驗(yàn)組的分娩時(shí)間，母豬耳號(hào)，初生總仔數(shù)，初生活仔數(shù)，木乃伊胎，死胎，斷奶數(shù)，保育轉(zhuǎn)出數(shù)，育肥出欄數(shù)。死/ 淘豬只PRV 陽性檢出率。理想的疫苗接種后應(yīng)阻斷效果好、各階段成活率/正品率高。

3.2 種豬凈化方案

免疫程序：經(jīng)產(chǎn)母豬及公豬每年全群3 次免疫，每4 個(gè)月1 次；后備豬配種前2 次免疫，間隔3 周，配種后同經(jīng)產(chǎn)母豬一同免疫；商品豬出生后0-1 d 滴鼻，6 周一免，9周二免。

gE 抗體陽性公豬一次性淘汰。補(bǔ)充gE 抗體陰性公豬。設(shè)置試情專用公豬，配種只使用人工授精，嚴(yán)禁本交。

周批次斷奶時(shí)，對(duì)經(jīng)產(chǎn)母豬按照種豬淘汰標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行逐步淘汰。對(duì)gE 抗體檢測(cè)陰性后備豬才予以留用配種。在控制gE 抗體陽性豬只處于不排毒、不發(fā)病的潛伏感染狀態(tài)的同時(shí)，對(duì)商品豬只高密度免疫，產(chǎn)生抗體有效阻斷病毒感染。通過不斷淘汰gE 抗體陽性豬，補(bǔ)充gE抗體陰性后備豬，降低種豬群gE陽性率。

每年4 月及11 月進(jìn)行血清抗體普查，其中1-2 胎母豬按30% 采樣。其他胎齡經(jīng)產(chǎn)母豬按10% 采樣，公豬全檢。持續(xù)約3 年時(shí)間。

待全群gE 抗體陽性率降到10% 以下時(shí)，進(jìn)行全群種豬gE 抗體全群檢測(cè)，一次性淘汰gE 抗體陽性豬只，從而達(dá)到豬場(chǎng)種豬豬偽狂犬病凈化的目的。

4 處理效果及分析

4.1 不同毒株豬偽狂犬病疫苗免疫效果對(duì)比

在商品豬偽狂犬病疫苗效果對(duì)比過程中，gE 抗體檢測(cè)結(jié)果見表5。試驗(yàn)組2 在16 周齡及24 周齡出現(xiàn)0% 的陽性率，說明雖然母豬是感染陽性，但Bartha-K61 疫苗免疫產(chǎn)生的抗體有一定阻斷作用，病毒并未垂直傳播，gE 抗體陽性的母豬可以生下gE 抗體陰性的個(gè)體。且出現(xiàn)死胎、死胎檢出豬偽狂犬病抗原陽性的仔豬也不一定該窩豬整窩都被感染。如果疫苗毒株與發(fā)病野毒毒株匹配，疫苗抗體能有效阻斷豬只后期感染。讓同場(chǎng)自留后備豬篩選gE 陰性后，進(jìn)行種群更新成為可能。而不匹配毒株免疫后，抗體并不能有效阻止野毒的感染。但gE轉(zhuǎn)陽并不等同發(fā)病，但從各生產(chǎn)車間的正品率對(duì)比看，gE 抗體陽性的豬群發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)明顯大于gE 抗體陰性的豬群。

從gB 抗體的陽性率（ 見表6）及抗體滴度平均值（見表7）看出，母豬免疫后，母源抗體持續(xù)保護(hù)仔豬到4 周以上，7 周檢測(cè)值為疫苗抗體，但試驗(yàn)組1 在第10 周， 試驗(yàn)組3 在第13 周，可發(fā)現(xiàn)抗體滴度值快速升高，說明在相應(yīng)時(shí)期，不僅有疫苗產(chǎn)生的疫苗保護(hù)抗體，也同時(shí)有野毒感染產(chǎn)生的抗體。而同樣滴鼻后兩次免疫的試驗(yàn)組2，后期豬群沒有抗體滴度值的突然升高，說明試驗(yàn)組2 選用的疫苗免疫程序能成功阻斷后期野毒的感染。gB 抗體檢測(cè)結(jié)果與gE 抗體檢測(cè)結(jié)果相對(duì)應(yīng)。各組生產(chǎn)數(shù)據(jù)對(duì)比（見表8），試驗(yàn)組2 的各階段正品率優(yōu)于其他兩組。 說明試驗(yàn)組2 選用的C 株疫苗，阻斷效果或保護(hù)力從抗體血檢指標(biāo)及實(shí)際生產(chǎn)指標(biāo)均優(yōu)于Bartha-K61 及SA215 毒株疫苗。

表5 豬偽狂犬病gE 抗體陽性率 %

表6 豬偽狂犬病gB 抗體陽性率 %

4.2 種豬凈化方案及執(zhí)行效果

豬場(chǎng)2018 年9 月27 日、2018年10 月25 日、2019 年2 月28 日進(jìn)行經(jīng)產(chǎn)母豬群及公豬的全群C 株偽狂犬疫苗免疫。2019 年4 月12日血清普檢豬偽狂犬病抗體數(shù)據(jù)（見表9）。疫苗高密度免疫后，能有效阻斷病毒在后期的感染，母源gE 陽性抗體衰減較以前提前，可能說明gE 抗體陽性母豬注射疫苗能降低野毒在體內(nèi)的活躍度，緩解癥狀。新補(bǔ)充的一胎母豬gE 抗體無轉(zhuǎn)陽。種豬陽性率持續(xù)下降符合預(yù)期。2019 年4 月， 不正常胎兒比例5.22%，產(chǎn)房正品率95.67%,保育正品率98.48%。 結(jié)果說明，豬場(chǎng)凈化方案及實(shí)施效果達(dá)到了預(yù)期的目的。

5 總結(jié)

1) 豬場(chǎng)引種仍然是導(dǎo)致新野毒進(jìn)入的主要途徑。引種前應(yīng)充分做好疫病篩查。引種后進(jìn)行隔離馴化。

2) 選擇合適的合作實(shí)驗(yàn)室是必要的，精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)為豬場(chǎng)重大事項(xiàng)正確決策、疫病早期預(yù)警，快速控制及清除提供依據(jù)。

3) 同種病毒不同毒株間的差異有大有小。差異較大的如口蹄疫、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病等。選擇和發(fā)病野毒親緣性較近的毒株疫苗免疫，效果比親緣性較遠(yuǎn)的毒株疫苗效果好。選擇何種疫苗以 “試用” 的臨床數(shù)據(jù)對(duì)比結(jié)果為準(zhǔn)。

4）豬場(chǎng)疫病防控是個(gè)持續(xù)、繁雜、系統(tǒng)的工程。詳細(xì)準(zhǔn)確的生產(chǎn)報(bào)表，持續(xù)性的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)檔案的建立也是必要的。數(shù)據(jù)能作為預(yù)估疫病風(fēng)險(xiǎn)、快速確診、制定方案及評(píng)估方案效果的最直接依據(jù)。

表7 豬偽狂犬病gB 抗體滴度平均值

表8 各試驗(yàn)組豬生產(chǎn)數(shù)據(jù) 頭

表9 2019 年4 月豬偽狂犬病抗體數(shù)據(jù)