楊秀群 劉永祺 劉燕 羅菊
摘? ?要? ?建立了一種檢測(cè)茶葉中茶多酚兒茶素含量的方法。對(duì)比研究超聲提取和冷凝回流提取方法處理樣品,結(jié)果表明,提取溫度50 ℃,時(shí)間70 min,樣品與溶劑料液比為1∶20時(shí)效果最佳。經(jīng)孔徑0.22 μm有機(jī)相濾頭過濾,高效液相色譜儀檢測(cè),結(jié)果顯示目標(biāo)物在20 min內(nèi)出峰,在濃度20~1 600 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)達(dá)0.998 7以上,精密度RSD(n=5)在1.04%~1.28%,日內(nèi)重現(xiàn)性好,回收率在81.7%~83.6%。應(yīng)用該方法檢測(cè)福鼎大白茶綠茶、紅茶中的茶多酚,發(fā)現(xiàn)兩種加工工藝處理的福鼎大白茶兒茶素的含量有差異,該研究結(jié)果可以用于指導(dǎo)消費(fèi)者依據(jù)自身需要選取茶葉,同時(shí)為茶葉功能食品的研發(fā)提供理論依據(jù)。
關(guān)鍵詞? ?高效液相色譜法;福鼎大白茶;綠茶;紅茶;茶多酚兒茶素
中圖分類號(hào):S132? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A? ? DOI:10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.28.006
我國(guó)茶葉分類方式多樣,最常見的是以加工工藝劃分,根據(jù)是否發(fā)酵及發(fā)酵的程度通常把茶葉分為紅茶、黃茶、黑茶、白茶、青茶、綠茶。其中,綠茶又稱為不發(fā)酵茶,由新葉經(jīng)殺青、揉捻和干燥等工藝制成,而紅茶經(jīng)揉捻、發(fā)酵、干燥制成[1]。發(fā)酵能使茶葉的內(nèi)含成分發(fā)生生物化學(xué)變化,加工工藝不同將影響茶葉的組成成分,特別是茶多酚[2]。
茶多酚(Tea-poly0phenols,TP)是茶葉中最主要的功能成分之一,占茶葉干重的10%~30%[3]。茶多酚又叫茶鞣質(zhì)、茶單寧,是茶葉中一類多羥基酚類化合物的總稱,主要包括兒茶素類、黃酮、花青素類和酚酸類[4]。其中兒茶素類化合物為茶多酚的主體成分,占茶多酚總量的65%~90%。兒茶素可分為表沒食子兒茶素(Epigallocatechin,EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(Epicatechingallate,ECG)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechingallate,EGCG)、兒茶素(C)、表兒茶素(Epicatechin,EC)[5]等。兒茶素是茶葉中最主要的活性物質(zhì),具有強(qiáng)于VC、VE的抗氧化性[6],有抗腫瘤、抗誘變、預(yù)防齲齒等諸多藥效[7],尤其EGCG具有抗病毒、抗腫瘤[8]、抗突變[9]、降壓、抗白血病等功效[10]。兒茶素已成為一類重要的食品添加劑和藥物。兒茶素是茶樹次生物質(zhì)代謝的重要成分,也是茶葉保健功能的主要物質(zhì),決定茶葉色、香、味品質(zhì)的重要因素[11]。兒茶素的成分受不同品種茶樹、栽培環(huán)境和加工工藝的影響[12],研究?jī)翰杷乜蔀樵u(píng)價(jià)茶葉及其制品的品質(zhì)及藥用價(jià)值[13-14],以及用于解讀茶樹多酚代謝的生理調(diào)控機(jī)制提供一定的依據(jù)[15]。
茶多酚的檢測(cè)方法分為總量檢測(cè)和組分含量檢測(cè),總量檢測(cè)有分光光度法、電化學(xué)法、近紅外光譜法等;組分檢測(cè)有高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法、原子吸收法、氣相色譜法等。其中,液相色譜法因分析簡(jiǎn)單、快速、靈敏、準(zhǔn)確而被廣泛應(yīng)用[16-20]。
本文采用超聲和冷凝回流的方法提取茶多酚,高效液相色譜法測(cè)定福鼎大白茶綠茶、紅茶中4種兒茶素的含量,通過對(duì)比研究同種茶葉兩種加工工藝即綠茶、紅茶處理后4種兒茶素的含量,評(píng)價(jià)兩種加工工藝對(duì)兒茶素含量的影響,以便更好地指導(dǎo)消費(fèi)者依據(jù)自身需要選取茶葉,同時(shí)為茶葉功能食品的研發(fā)提供理論依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 儀器與試劑
儀器:LC-20AT型高效液相色譜儀(儀器配置:SPD-M20A檢測(cè)器,SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器,LC-20AD二元泵,CYO-10AASVP柱溫箱,CBM-20A系統(tǒng)控制器),日本島津;ML104型電子天平,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;KH-250DB型數(shù)控超聲波清洗器,昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司;HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋,上海梅香儀器有限公司;WGL-65B電熱鼓風(fēng)干燥箱,天津市泰斯特儀器有限公司;TST-UPW-20L超純水儀,石家莊泰斯特儀器設(shè)備有限公司;BCD-271VMQ冰柜,美的公司。
試劑:表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG, 純度99.92%),表兒茶素茶多酚沒食子酸酯(ECG, 純度98.93%),表沒食子兒茶素(EGC, 純度98.34%),(+)-兒茶素(C, 純度99.58%)標(biāo)準(zhǔn)品,成都曼思特生物科技有限公司;甲醇、乙腈色譜純,美國(guó)TEDIA;甲醇、磷酸、檸檬酸分析純,重慶富宇。實(shí)驗(yàn)用水:超純水,超純水機(jī)制得。
材料:采用紅茶、綠茶工藝加工的福鼎大白茶(貴州省貴陽(yáng)市清鎮(zhèn)某茶廠生產(chǎn)),分別命名為福鼎大白茶紅茶、福鼎大白茶綠茶。二者經(jīng)恒溫箱50 ℃干燥至恒重。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 液相色譜條件
采用InertSustaiu C18 Column(4.6 mm×250 mm, 5 μm)色譜柱;用乙腈和0.1%磷酸水溶液作為流動(dòng)相,體積比為20∶80,總流速1 mL·min-1,柱箱溫度35 ℃,檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm,進(jìn)樣量10 μL。
1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
單一標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的配制:分別準(zhǔn)確稱取EGC、C、EGCG、ECG標(biāo)準(zhǔn)品各0.800 0 g,分別溶解后轉(zhuǎn)移至5 mL的容量瓶中,用甲醇定容,所得各標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度為1 600 μg·mL-1。
混合標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的配制:分別準(zhǔn)確稱取EGC、C、EGCG、ECG標(biāo)準(zhǔn)品各0.800 0 g,混合溶解后轉(zhuǎn)移至5 mL的容量瓶中,用甲醇定容,所得各標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度為1 600 μg·mL-1。將混合標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液用甲醇逐級(jí)稀釋為20、40、80、100、200、800、1 600 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,并用0.22 μm的有機(jī)系微孔濾膜過濾,避光低溫儲(chǔ)存待測(cè)。
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(責(zé)任編輯:丁志祥)