趙 耀 吳汝梓 劉志平* 魏 來 韓歡勝

(1.東北林業(yè)大學(xué)野生動物與自然保護地學(xué)院，哈爾濱，150040；2.哈爾濱華隆藍狐育種有限公司，哈爾濱，150000；3.黑龍江省農(nóng)墾科學(xué)院，哈爾濱，150038)

在藍狐(Alopexlagopus)養(yǎng)殖生產(chǎn)實踐中，母狐不發(fā)情的現(xiàn)象普遍存在。生殖激素分泌不足是導(dǎo)致母狐不發(fā)情最主要原因。為了提高母狐繁殖率，人們試圖通過使用外源激素來改善這一狀況。目前國內(nèi)外學(xué)者使用外源激素對犬誘導(dǎo)發(fā)情的方法有了一定深入研究，也有過相關(guān)報道[1-4]，但因為生殖激素之間有著復(fù)雜的相互作用關(guān)系，目前均未獲得滿意的效果[5-6]。外源激素對動物的生殖機能有重要的影響，其中垂體促卵泡素(pituitarii follitropinum pro injectione，F(xiàn)SH)、孕馬血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin，PMSG)、人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)已被廣泛應(yīng)用在動物生產(chǎn)中，F(xiàn)SH在超數(shù)排卵和誘導(dǎo)泌乳繁殖后期乏情的母畜發(fā)情方面能獲得良好的效果[7-8]。在狐方面也曾有使用HCG、PMSG和LRH-3的報道，但未見使用FSH報道。相關(guān)研究認為，使用外源性激素可以促使母獸發(fā)情但不產(chǎn)仔的原因，可能是與孕酮(P)缺乏有關(guān)[9]，據(jù)此本試驗在使用PMSG、LRH-3基礎(chǔ)上增加了FSH和P+FSH的組合，對繁殖后期乏情母藍狐進行催情處理。

1 材料

1.1 試驗動物

本試驗動物由哈爾濱華隆藍狐育種有限公司提供，在2018年繁殖末期選取3年齡內(nèi)、體況良好、繁殖后期母藍狐30只，哈爾濱華隆藍狐育種中心隸屬于哈爾濱華隆集團，現(xiàn)有藍狐種群存欄8 400余只，建設(shè)占地30萬m2，年存欄約5.5—6萬只。

1.2 試驗藥品

獸用注射促黃體素釋放激素A3(LRH-3)、孕馬血清(PMSG)由赤峰博恩藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；垂體促卵泡素(FSH)由寧波第二激素廠生產(chǎn)；孕酮(P)由寧波第二激素廠生產(chǎn)。其中LRH-3、FSH、PMSG均采用醫(yī)用生理鹽水稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3 主要儀器

一次性注射器；載玻片；蓋玻片；棉簽；顯微鏡(型號為：BM-57XCS)；數(shù)碼相機；電子測情儀，由德國伍爾特公司生產(chǎn)；人工授精器械(保定設(shè)施、輸精針、輸精套管等)。

2 試驗方法

2.1 外源激素的注射

將選取的30只母狐(♀)，隨機分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組，每組10只，Ⅰ組狐編號A1—10，Ⅱ組編號B1—10，Ⅲ組編號C1—10。分別注射所需的外源性激素，注射部位為藍狐后腿肌肉[3]。

Ⅰ組注射孕酮(P)0.85 mL、垂體促卵泡素(FSH)21.0 IU、孕酮(P)+垂體促卵泡素(FSH)0.1 mL+5.0 IU及垂體促卵泡素(FSH)+孕馬血清(PMSG)4.0 IU+25.0 IU，共注射11次。

Ⅱ組注射垂體促卵泡素(FSH)26.0 IU、垂體促卵泡素(FSH)+孕馬血清(PMSG)4.0 IU+25.0 IU，共注射6次。

Ⅲ組為空白對照組，不做任何處理。

對試驗的兩組母藍狐從2018后5月3日開始注射外源生殖激素，注射日期及劑量詳見表1、表2。

5月13日開始對實驗狐進行發(fā)情鑒定，對發(fā)情母狐實施輸精并于當(dāng)天注射促黃體素釋放激素A3(LRH-3)2.5 μg/只，至實驗結(jié)束。

2.2 發(fā)情鑒定

母狐的發(fā)情鑒定采用外陰觀測、陰道角化細胞檢測、陰道電阻檢測綜合判定法[10]，即：外陰腫脹開始消退；陰道涂片可見大量角化細胞；陰道電阻值升高后回落。

2.3 輸精

選取優(yōu)質(zhì)種公狐，按摩法采精，后進行精子質(zhì)量檢測，精子活力達到0.8以上，精子密度≧1 000×106個/mL，采用子宮內(nèi)輸精(1次/d×3 d)，輸精量 0.6—0.8 mL。輸精3次后再次測量陰道電阻值，當(dāng)陰道電阻值低于300 Ω，陰道角化細胞圓形細胞數(shù)增多則結(jié)束輸精，否則繼續(xù)輸精。

表1 Ⅰ組實驗?zāi)杆{狐激素注射時間、名稱和劑量

Tab.1 Time，name and dose of hormone injection in group Ⅰ experimental female blue foxes

表2 Ⅱ組實驗?zāi)杆{狐激素注射時間、名稱和劑量

Tab.2 Time，name and dose of hormone injection in group Ⅱ experimental female blue foxes

3 結(jié)果與分析

發(fā)情、假孕及產(chǎn)仔情況見表3。

通過對Ⅰ組和Ⅱ組藍狐進行發(fā)情檢測可知，Ⅰ組藍狐共有3只發(fā)情，其中A6、A9出現(xiàn)假妊娠現(xiàn)象；Ⅱ組藍狐共2只發(fā)情，其中B9出現(xiàn)假妊娠現(xiàn)象。

4 結(jié)論

4.1 在藍狐發(fā)情末期，聯(lián)合使用外源性P、FSH、PMSG和LRH-3可以促使部分繁殖障礙母藍狐發(fā)情，并出現(xiàn)假妊娠，但不能產(chǎn)仔。

表3 實驗組藍狐發(fā)情、假孕及產(chǎn)仔情況

Tab.3 Estrus，pseudo pregnancy and farrowing status of blue fox in experimental group

續(xù)表3

4.2 發(fā)情的母藍狐符合目前狐發(fā)情鑒定標準。

4.3 Ⅰ組使用激素后輸精3只，占比30%，假妊娠2只，占比66%，產(chǎn)仔0只，占比0。Ⅱ組使用激素后輸精2只，占比20%，假妊娠1只，占比50%，產(chǎn)仔0只，占比0。

4.4 從藍狐發(fā)情表現(xiàn)和發(fā)情數(shù)量上看，使用P組比沒使用P組效果好。

5 討論

藍狐是季節(jié)性單次發(fā)情，自發(fā)排卵動物，在非繁殖期卵巢出現(xiàn)休眠狀態(tài)，休情期可以達到9—10個月，若錯過了一個發(fā)情期則會增加一整年的飼養(yǎng)成本[11]。養(yǎng)殖狐生產(chǎn)中總是有相當(dāng)一部分母狐在繁殖期不發(fā)情，使用外源性激素若能促使這些不發(fā)情的母狐正常繁殖，將會明顯提高養(yǎng)殖者的效益。

本研究中的外源激素對在繁殖后期乏情母藍狐使用。外源性激素注射部位為藍狐后腿外側(cè)[3]，結(jié)果證明使用外源激素可以促進藍狐發(fā)情，如果能使繁殖季節(jié)處于乏情狀態(tài)的母藍狐發(fā)情，提高配種率和藍狐的使用效率并產(chǎn)生較多后代，對于藍狐養(yǎng)殖業(yè)有重要的意義。本次實驗為發(fā)情后期對乏情母狐催情方法提供一個新的研究方向，有利于進一步發(fā)掘更多藍狐的生殖潛能。

促黃體素(LH)和促卵泡素(FSH)都有促卵泡發(fā)育的作用，單獨使用二者均可誘導(dǎo)發(fā)情。PMSG具有類似FSH和LH的雙重活性，但以FSH的作用為主，因此有著明顯的促卵泡發(fā)育的作用，同時有一定的促排卵和黃體形成的功能[11]。促黃體素釋放激素A3(LRH-3)能促使動物垂體前葉釋放促黃體素(LH)和促卵泡素(FSH)。兼具有促黃體素和促卵泡素作用。

葛東寧等[12]對正常發(fā)情母狐使用PMSG+HCG不同劑量組合和FSH+LH組合，獲得了較好的產(chǎn)仔效果。說明使用外源性激素對于正常發(fā)情的母藍狐可以提高藍狐繁殖率；譚建華等[13]給休情期性成熟母犬肌注PGF2α、eCG、hCG成功誘導(dǎo)其發(fā)情并使胚胎著床。說明使用外源性激素對于休情期母犬有促使其發(fā)情并排卵的作用

崔青山等[14]研究發(fā)現(xiàn)，對繁殖后期乏情母狐注射PMSG+HCG，可促使其出現(xiàn)發(fā)情表現(xiàn)，并接受交配，但是否產(chǎn)仔未做說明；劉志平等[15]使用PMSG+HCG組合促使不發(fā)情青年母狐發(fā)情并實施人工授精，結(jié)果也無一產(chǎn)仔。

以上研究表明，使用不同種外源激素可以促進藍狐發(fā)情，但都不能使其產(chǎn)仔。影響母狐受孕的因素有多種，對于使用外源性激素促使發(fā)情的母狐不受孕的原因分析是由于子宮和卵巢發(fā)育不同步造成的，也可能是由于P水平低下或催乳素不足[16]。因此本實驗設(shè)計在常規(guī)激素基礎(chǔ)上增加P組合，雖然未能獲得產(chǎn)仔，但有3只出現(xiàn)假孕生理反應(yīng)，因此可以認為此3只母狐具備受孕的條件。

由于激素水平分泌不均導(dǎo)致的可能是隱性發(fā)情(非典型發(fā)情)，卵泡可發(fā)育成熟和排卵[11]。實驗組發(fā)情的5只母狐，從外陰觀測及電阻值(表3)上看，有3只屬典型發(fā)情(A6、A9、B9)，另2只屬非典型發(fā)情，后者不懷孕分析可能與卵子著床有關(guān)，而卵子著床與相應(yīng)的環(huán)境、激素水平、子宮發(fā)育狀態(tài)密切相關(guān)，需要有解剖及組織學(xué)檢測證實，有待于進一步研究。