李永蓉，王志敏，王 慧，楊穎秋，紀風(fēng)濤

0引言

眼瞼黃色瘤好發(fā)于中年女性上瞼內(nèi)側(cè)，發(fā)病機制不明確，傳統(tǒng)觀點認為其與脂質(zhì)代謝有關(guān)，但是臨床檢查經(jīng)常發(fā)現(xiàn)患者血脂正常。眼瞼黃色瘤是由含有大量脂質(zhì)的巨噬細胞組成，其主要成分是膽固醇酯，也有炎性細胞沉積，患者常伴有家族性高膽固醇血癥、β-脂蛋白血癥。巨噬細胞清道夫受體(MSR)是一類結(jié)構(gòu)多樣化的糖蛋白受體，其中巨噬細胞清道夫受體1(MSR1)是一種吞噬變性低密度脂蛋白，形成泡沫細胞的主要受體[1]，是重要的抗動脈粥樣硬化的受體。單核苷酸多態(tài)性(SNP)指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的脫氧核糖核酸(DNA)序列多態(tài)性，即指基因組內(nèi)特定核苷酸位置上存在兩種不同的核苷酸且其出現(xiàn)的頻率大于1%。本研究旨在通過檢測MSR1單核苷酸多態(tài)性探討眼瞼黃色瘤的相關(guān)發(fā)病機制。

1對象和方法

1.1對象選取2017-01/2018-12在合肥市第二人民醫(yī)院眼科門診就診擬行肝素鈉局部注射治療的眼瞼黃色瘤患者20例作為試驗組，其中女19例，男1例，年齡35～52歲，發(fā)病時間3mo～2a，均為緩慢長大。排除合并其它眼部疾病，既往接受其它方法治療者。另選取健康志愿者20例為對照組，其中女19例，男1例，年齡34～50歲。兩組受檢者均為漢族，無遺傳病史，且性別構(gòu)成比、年齡等一般資料差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)倫理委員會審批同意。所有受檢者均對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2方法所有受檢者均空腹抽取外周靜脈血，離心后取血清置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?，試驗組患者同時進行血常規(guī)、血糖、血脂、α-脂蛋白和頸動脈彩超檢查。本研究采用一代測序(Sanger測序)方法進行測序，檢測DNA樣本中單位SNP類型，檢測過程由北京六合華大基因科技公司武漢分公司執(zhí)行。具體步驟：(1)DNA提取：采用GK1041血液基因組DNA提取試劑盒(上海捷瑞生物工程公司)提取人真核細胞基因組DNA。(2)PCR擴增：采用Prime 5.0軟件設(shè)計引物，對MSR1基因的5條外顯子區(qū)域(S1、S2、S3、S4、S5)進行PCR擴增。MRS1基因引物序列見表1。(3)測序反應(yīng)：DNA體外合成得到包含所有長度的末端標記片段的混合物。(4)測序示蹤：毛細管電泳過程中采用激光檢測各單鏈DNA走出凝膠的時間和熒光類型，通過熒光信號接收器和計算機信號分析系統(tǒng)自動測序。

2結(jié)果

兩組受檢者MSR1單核苷酸多態(tài)性無顯著差異，但檢測結(jié)果中發(fā)現(xiàn)1例治療后又復(fù)發(fā)的患者第2條外顯子區(qū)域S2-SNP1位點發(fā)生純合突變，患者血脂正常，雙側(cè)頸動脈硬化，右側(cè)頸外動脈斑塊形成，3例患者第5條外顯子區(qū)域S5-SNP2位點、S5-SNP4位點發(fā)生純合突變，均伴有甘油三酯或總膽固醇增高，頸動脈輕度硬化，見表2。此外，本研究納入的眼瞼黃色瘤患者中10例患者甘油三酯和總膽固醇水平較高，其中3例患者α-載脂蛋白水平較高。

3討論

眼瞼黃色瘤是一種良性眼瞼腫瘤，是黃色瘤最常發(fā)生的部位?？砂l(fā)生在遺傳性血脂過高、糖尿病和其它繼發(fā)性血脂過高的患者中，但多數(shù)患者血脂正常[2]。本研究中，50%患者血脂正常，也無高脂飲食習(xí)慣，與既往研究發(fā)現(xiàn)50%眼瞼黃色瘤患者總膽固醇和甘油三酯水平正常的結(jié)果一致[3]。Hu等[4]研究給家兔喂養(yǎng)高膽固醇飲食(高膽固醇飲食對家兔脂蛋白代謝紊亂、黃色瘤的發(fā)生發(fā)展具有重要作用)，促進了黃色瘤的發(fā)生，表明黃色瘤與脂質(zhì)代謝異常有關(guān)。Kavoussi等[5]研究發(fā)現(xiàn)，高膽固醇血癥和高甘油三酯血癥的發(fā)生率在黃色瘤組和非黃色瘤組受檢者之間沒有顯著差異，但兩組受檢者膽固醇、甘油三酯、極低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)平均血清值有顯著差異，表明眼瞼黃色瘤可能是篩查亞臨床動脈粥樣硬化的皮膚征象。

眼瞼黃色瘤是由吞噬脂質(zhì)的巨噬細胞(泡沫細胞)組成的，其中泡沫細胞發(fā)生在真皮毛細血管和皮膚附屬物周圍，富含膽固醇，其形成過程類似于動脈粥樣硬化過程。本研究納入的眼瞼黃色瘤患者中部分患者伴有不同程度頸動脈硬化和斑塊，其中大部分為輕度頸動脈硬化。頸動脈硬化和斑塊都是頸動脈粥樣硬化的表現(xiàn)，頸動脈粥樣硬化又是動脈粥樣硬化的一種表現(xiàn)形式[6]，故推測眼瞼黃色瘤與動脈粥樣硬化相關(guān)。Dey等[7]研究表明，眼瞼黃色瘤與高血壓、高血脂、向心性肥胖、糖尿病、心血管疾病等有關(guān)。另有研究發(fā)現(xiàn)，與健康受試者相比，眼瞼黃色瘤患者發(fā)生缺血性心臟病、心肌梗塞的風(fēng)險增加，而且早死風(fēng)險增加，但與總膽固醇或甘油三酯水平是否升高無關(guān)，提示眼瞼黃色瘤是亞臨床動脈粥樣硬化階段，早期冠狀動脈病變的表現(xiàn)之一。

表1 MSR1基因引物序列

引物名稱引物序列D154-MRS1-S2-FTCTGTCCTAATGTCTCCACCTCD154-MRS1-S2-RTGCCTACACCAAGTCATCTCTD154-MRS1-S3-FGTAATGAGCCCAATTTCCACAATACD154-MRS1-S3-RGCCTCCTAGCAATGAGAACTCD154-MRS1-S4-FGTTGTAGGTAAAGAAGTATGGGTGTTD154-MRS1-S4-RAAGGCTCTCGGTAGACTCCD154-MRS1-S5-F2ATGGTATAGACTGTGAGAGGAATTD154-MRS1-S5-R2CCTGAGGATTACTGAACTTATGC

表2 MRS1基因SNP純合突變位點

外顯子區(qū)域SNP位點突變患者多數(shù)患者S2-SNP1TTTATA[G/C]ATAAGGC(1例頸動脈硬化)GS5-SNP1TTTGCA[A/G]TAAATGAAS5-SNP2GTCAGG[G/A]TATAATA(3例高血脂)AGS5-SNP3TTATGT[G/C]CCCTTAGGS5-SNP4ACAAGA[T/C]GAAATCC(3例高血脂)CTS5-SNP5ATTGGC[A/G]TGCTTCGAG

Govorkova等[8]通過回顧性研究發(fā)現(xiàn)，眼瞼黃色瘤的炎癥環(huán)境類似于心臟動脈粥樣硬化斑塊形成的早期階段，動脈粥樣硬化的主要危險因素是由脂質(zhì)過氧化、糖氧化及炎癥細胞因子分泌增多等機制導(dǎo)致的動脈內(nèi)膜炎癥。動脈粥樣硬化相關(guān)受體—MSR1是A型清道夫受體(SR-A)中的一種，是單核巨噬細胞表面的一種跨膜糖蛋白的三聚體，通過調(diào)節(jié)巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積，參與動脈粥樣硬化斑塊的形成。在動脈粥樣硬化早期，MSR1從血管壁清除修飾的低密度脂蛋白，從而減少血管壁的損傷，具有抗動脈粥樣硬化的作用。SR-A可以作為脂蛋白受體參與動脈粥樣硬化病變的形成，也可以在細胞粘附、宿主防御、細胞增殖及細胞凋亡中發(fā)揮作用[9]。此外，Nicoletti等[10]發(fā)現(xiàn)SR-A可以介導(dǎo)修飾抗原的攝取，并將其表達給抗原特異性T細胞，表明清道夫受體參與氧化蛋白抗原的免疫識別。

巨噬細胞參與許多疾病的病理過程，靶向治療如何將治療分子傳遞給巨噬細胞是一個重要問題。Matsui等[11]為了靶向治療將過氧化物酶(PRXs)傳遞給巨噬細胞，設(shè)計了羧乙基醚基團修飾過氧化物酶(CEE-PRXs)，以促進其與巨噬細胞SR-A的相互作用。本研究發(fā)現(xiàn)，1例眼瞼復(fù)發(fā)眼瞼黃色瘤患者第2條外顯子區(qū)域S2-SNP1位點發(fā)生純合突變，且患者動脈粥樣硬化明顯，分析該位點突變與眼瞼黃色瘤及動脈粥樣硬化發(fā)展相關(guān)，但是病例數(shù)較少，需要更多病例研究來說明其意義。另有3例患者第5條外顯子區(qū)域S5-SNP2、S5-SNP4位點發(fā)生純合突變，均伴有甘油三酯或總膽固醇增高和輕度動脈硬化，說明該位點的突變有促進血脂增高和動脈硬化的風(fēng)險。上述3處SNP位點的突變均與動脈粥樣硬化相關(guān)。此外，我們發(fā)現(xiàn)眼瞼黃色瘤患者和健康人的MSR1單核苷酸多態(tài)性無明顯差異，分析可能是其它MSR改變，未來可以進一步研究MSR其它受體基因的單核苷酸多態(tài)性，探討眼瞼黃色瘤的發(fā)病機制與動脈粥樣硬化的相關(guān)性。

黃色瘤在皮膚、肌腱和筋膜的結(jié)締組織中形成泡沫細胞簇，偶爾在骨膜中形成。眼瞼黃色瘤通常為黃色，是由于油脂中含有胡蘿卜素2。黃色瘤與動脈粥樣硬化、血栓性疾病的風(fēng)險增加有關(guān)，黃色瘤的發(fā)展可能預(yù)示著嚴重的代謝和心血管疾病以及淋巴增生性惡性腫瘤的風(fēng)險升高[12]，需要開展更多的實驗和臨床研究來揭示黃色瘤的發(fā)病機制及其與缺血性心臟病等疾病的關(guān)系。