尹 雪，丁建秋，姜瑋倫，姚慧敏*

(1.通化師范學(xué)院吉林省重點實驗室長白山藥用植物研究實驗室，通化134002；2.吉林省白山市第七中學(xué)，白山134700)

淫羊藿軟膠囊是以朝鮮淫羊藿為原材料，經(jīng)過提取濃縮純化后制備而成的軟膠囊制劑。2015版 《中國藥典》中記述，淫羊藿藥材質(zhì)量控制的指標為淫羊藿苷[1]。研究表明，淫羊藿苷除具有抑制炎癥[2]、調(diào)節(jié)骨代謝[3]的作用外，還可用于增強機體免疫力、延緩衰老[4]、保護神經(jīng)細胞[5]、治療老年癡呆[6]、抑制癌細胞的生長。為控制該制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，以淫羊藿苷為檢測指標成分，建立了淫羊藿軟膠囊的質(zhì)量控制方法。實驗表明該方法簡便快捷、分離度好、結(jié)果準確可靠。

1 儀器與試藥

淫羊藿苷（中國藥品生物制品檢定所）；淫羊藿軟膠囊（實驗室自制181209）；華譜高效液相色譜儀；電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Waters Symmetry C18(4.6 mm×250 mm，5μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸水溶液 （30:70）;流速:1.0 mL·min-1;檢測波長:300 nm;柱溫:30℃;進樣量:10μL。在上述條件下，理論板數(shù)按淫羊藿苷計應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液的配制

對照品溶液的制備：淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加無水乙醇定量制成20.15μg·mL-1的溶液，作為對照品貯備液。

供試品溶液的制備：取本品20粒的內(nèi)容物，混合均勻，取0.5 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加無水乙醇至刻度，超聲處理(功率為500 W，頻率為40 kHz)30 min后，濾過，精密吸取續(xù)濾液1.0mL，置10 mL量瓶中，用無水乙醇定容，搖勻，即得。

空白輔料溶液的制備：按處方量稱取混合輔料，按供試品溶液的稀釋倍數(shù)用無水乙醇定量，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性實驗

取對照品溶液，進樣測定，記錄色譜圖。淫羊藿苷塔板數(shù)分別為17900，系統(tǒng)適用性實驗符合要求。

2.4 專屬性實驗

分別取混合對照品溶液、供試品溶液和空白輔料溶各10μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。由圖可知，在本文建立的色譜條件下，淫羊藿苷的保留時間13.253min，淫羊藿軟膠囊中各對照品和其他組分達到了完全分離，空白輔料無干擾。

圖1 對照品溶液(A)、樣品溶液(B)和空白輔料(C)色譜圖

2.5 標準曲線的繪制

分別精密吸取對照品貯備液 0.2，0.5，0.8，1.0，1.2，1.5mL至10mL量瓶中，加無水乙醇至刻度，分別制成系列濃度溶液，搖勻，精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，進行線性回歸， 淫羊藿苷在4.03～30.225μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為A=32.127C-5.2678(r=0.9998)，結(jié)果表明對照品在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)，樣品濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度實驗

取對照品溶液，日內(nèi)連續(xù)進樣3次和日間進樣3次(連續(xù)3d，每天1次)，記錄色譜圖的峰面積。日內(nèi)RSD(n=3)為 0.25%，日間 RSD(n=3)為 0.34%，結(jié)果表明日內(nèi)、日間精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性實驗

取供試品溶液，分別于 0、1、3、6、12 h，注入液相色譜儀，記錄色譜圖的峰面積，RSD(n=5)為0.38%，結(jié)果表明供試品溶液放置12 h穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性實驗

取批號為181209的軟膠囊6份，按供試品溶液制備方法制備并測定，記錄色譜圖的峰面積，RSD為0.35%。

2.9 回收率實驗

精密稱取已知含量的軟膠囊0.5 g，共6份，依次按照2.2項下方法制備供試品溶液。取6份供試品溶液各1mL，精密加入濃度為201.5μg·mL-1淫羊藿苷對照品1mL，進樣測定，記錄色譜圖，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 軟膠囊回收率測定結(jié)果

軟膠囊平均加樣回收率分別為99.184%，RSD為0.25%，加樣回收率符合含量測定要求。

2.1 0含量測定

分別取三批軟膠囊內(nèi)容物各20粒，按“供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，進樣測定，記錄色譜圖，計算含量，結(jié)果見表2。

表2 軟膠囊含量測定結(jié)果

3 討論

淫羊藿中含有多種化學(xué)物質(zhì)，化學(xué)成分復(fù)雜，藥理作用豐富。淫羊藿總黃酮類物質(zhì)最為豐富，在藥典中淫羊藿苷的含量是淫羊藿質(zhì)量評價的一個重要指標?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明淫羊藿苷可調(diào)節(jié)骨代謝，并具有神經(jīng)保護作用、性激素樣作用，淫羊藿提取物還可增強機體免疫力、改善心血管功能、抗衰老、抗腫瘤、抗炎、抗病毒等[7～10]。

本實驗考察了500%乙醇、70%乙醇、95%乙醇為該制劑的溶劑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)由于內(nèi)容物含有大量的表面活性劑，溶劑中只要含有水，就會使溶液存在乳化狀態(tài)，濾過后仍可能損壞色譜柱，降低其使用壽命。當(dāng)溶劑選用無水乙醇時，可排除表面活性劑的干擾，而且淫羊藿苷在乙醇中的溶解度大，而且回收率高，符合含量測定的要求。