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        潰瘍性結(jié)腸炎患者血漿miR-106a 和 miR-363-3p 表達水平的變化及意義

        2019-11-05 08:15:34
        國際消化病雜志 2019年5期
        關(guān)鍵詞:腸病活動期炎癥性

        潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)均屬于炎癥性腸病,具有相似的臨床表現(xiàn)及特征[1]。近年來關(guān)于UC和CD的分子病理學研究表明,UC和CD在基因表達、免疫學特征方面存在差異[2-4]。UC和CD的臨床表現(xiàn)及特征較為相似,因此臨床鑒別兩者具有一定難度。微RNA(miRNA)是動植物體內(nèi)長度為20~25個核苷酸的單鏈非編碼RNA,可廣泛參與機體內(nèi)的病理生理過程[5]。目前大量miRNA已成為疾病發(fā)生、發(fā)展的潛在生物標志物[6]。有研究顯示,miR-106a和miR-363-3p在UC和CD患者血漿中表達存在差異,有可能成為鑒別UC和CD的潛在生物標志物[7]。本研究選取78例UC患者、53例CD患者及46例健康體檢者作為研究對象,評估m(xù)iR-106a和miR-363-3p鑒別CD和UC的效能,并分析miR-106a和miR-363-3p表達水平與UC患者病情及預后的關(guān)系,以期為UC的臨床診斷及治療提供參考。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選擇2015年3月至2018年7月在重慶市開州區(qū)人民醫(yī)院消化內(nèi)科救治的78例UC患者(UC組)、53例CD患者(CD組)及同期46例健康體檢者(NC組)作為研究對象。根據(jù)中華醫(yī)學會消化病學分會炎癥性腸病學組制定的《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年·廣州)》[8]對UC和CD進行診斷和治療。UC組男性43例,女性35例,平均年齡(46.08±11.32)歲;CD組男性25例,女性28例,平均年齡(44.85±9.91)歲;NC組男性26例,女性20例,平均年齡(45.72±10.24)歲。排除標準:(1)合并糖尿病;(2)合并嚴重感染;(3)伴有嚴重心、肝、腎等臟器疾?。?4)伴有自身免疫性疾??;(5)妊娠期或哺乳期婦女。本研究所有受試者及家屬均對研究內(nèi)容及目的了解,簽署了知情同意書,且本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。

        1.2 RT-PCR法檢測miR-106a和miR-363-3p相對表達量

        抽取受試者空腹肘部靜脈血,3 500 r/min離心15 min,提取上層清液。采用總RNA提取試劑盒提取總RNA,試劑盒購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司。采用定量聚合鏈反應合成cDNA。將合成的cDNA進行PCR擴增,反應條件為95 ℃預變性10 min,然后95 ℃ 5 s、60 ℃ 20 s、72 ℃ 30 s,40個循環(huán)。采用2-△△Ct表示miR-106a 和 miR-363-3p的相對表達量[9]。

        1.3 預后評估

        根據(jù)《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年·廣州)》[8]對UC患者進行標準化治療。治療2個月后,內(nèi)鏡復查黏膜愈合情況,并根據(jù)黏膜愈合情況將接受治療的活動期UC患者分為預后良好組和預后不良組[10]。

        1.4 統(tǒng)計學分析

        2 結(jié)果

        2.1 3組受試者的基線資料比較

        3組受試者在性別、年齡方面的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。CD組和UC組患者在炎性狀態(tài)方面比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。詳見表1。

        表1 3組受試者基線資料比較

        注:“—”表示無數(shù)據(jù)

        2.2 3組受試者血漿miR-106a 和 miR-363-3p的相對表達量比較

        3組受試者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對表達量比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.001)。UC組患者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對表達量低于CD組,但高于NC組,差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。詳見表2。

        表2 3組受試者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對表達量比較()

        注:與NC組比較,aP<0.05;與CD組比較,bP<0.05

        2.3 血漿miR-106a 和 miR-363-3p鑒別CD和UC的效能

        單指標鑒別CD和UC時,miR-106a的ROC曲線下面積(AUC)大于miR-363-3p,但差異無統(tǒng)計學意義(Z=1.402,P=0.161)。血漿miR-106a和miR-363-3p聯(lián)合檢測鑒別CD和UC的Logistic回歸方程:F=12.880-6.157×miR-106a-3.987×miR-363-3p。聯(lián)合檢測鑒別CD和UC的AUC為0.943,大于miR-106a、miR-363-3p單獨檢測的AUC(Z=2.587,P=0.010;Z=2.926,P=0.003)。詳見圖1、表3。

        圖1 miR-106a、miR-363-3p及聯(lián)合檢測鑒別CD 和UC的ROC曲線

        表3 miR-106a、miR-363-3p及聯(lián)合檢測鑒別CD和UC的效能

        注:“—”表示無數(shù)據(jù)

        2.4 不同炎性狀態(tài)的UC患者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對表達量比較

        活動期UC患者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對表達量均高于緩解期UC患者,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。詳見表4。

        2.5 影響活動期UC患者預后的相關(guān)因素分析

        單因素分析影響活動期UC患者預后的相關(guān)因素,結(jié)果顯示年齡、性別、內(nèi)鏡下活動度分級、病理組織分級和病變位置與活動期UC患者預后無關(guān)(P>0.05);miR-106a 和 miR-363-3p與活動期UC患者預后相關(guān)(P<0.05)。詳見表5。將活動期UC患者預后作為因變量,將miR-106a和miR-363-3p作為自變量,納入Logistic回歸分析,結(jié)果顯示miR-106a>1.14(OR:2.043,95%CI:1.245~2.674)和miR-363-3p>1.05(OR:1.287,95%CI:1.098~1.775)的活動期UC患者預后不良。

        表4 活動期與緩解期UC患者血漿miR-106a和miR-363-3p相對表達量比較()

        注:與活動期比較,aP<0.05

        表5 影響活動期UC患者預后的單因素分析

        2.6 血漿miR-106a 和 miR-363-3p在活動期UC患者預后評估中的價值

        單指標診斷活動期UC患者預后時,miR-106a診斷活動期UC患者預后的AUC小于miR-363-3p,差異無統(tǒng)計學意義(Z=0.823,P=0.411)。血漿miR-106a和miR-363-3p聯(lián)合檢測診斷活動期UC患者預后的Logistic回歸方程:F=-7.565+3.017×miR-106a+5.259×miR-363-3p。聯(lián)合檢測診斷活動期UC患者預后的AUC為0.860,與miR-106a、miR-363-3p單獨診斷活動期UC患者預后的AUC比較,差異均無統(tǒng)計學意義(Z=0.759,P=0.448;Z=0.875,P=0.382)。詳見圖2、表6。

        圖2 miR-106a、miR-363-3p及聯(lián)合檢測診斷 UC患者預后的ROC曲線

        表6 miR-106a、miR-363-3p及聯(lián)合檢測診斷UC患者預后的效能

        注:“—”表示無數(shù)據(jù)

        3 討論

        UC是一種慢性非特異性腸道炎性疾病,病情較為兇險,且并發(fā)癥較多,嚴重時可危及患者生命[11-12]。近年來,中國UC患者逐年增加[13]。及時對UC患者進行診斷并加以治療,可有效控制UC病情發(fā)展,降低并發(fā)癥的發(fā)生率及患者病死率[14]。有研究表明,大量miRNA在炎癥性腸病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用,參與組織穩(wěn)態(tài)、腸細胞增殖、分化及維持腸道屏障功能等[15-17]。目前中國較少有關(guān)于miR-106a、miR-363-3p與UC關(guān)系的研究報道。國外雖有研究報道了miR-106a、miR-363-3p在UC患者中特異性表達,但并未驗證兩者診斷UC的效能,且未深入研究miR-106a、miR-363-3p與UC患者病情及預后的關(guān)系。本研究擬探究miR-106a、miR-363-3p與UC患者臨床病理、病情進展及預后的關(guān)系,為UC患者病情嚴重程度及治療效果評估提供更多參考。

        本研究結(jié)果顯示,UC組患者血漿miR-106a和miR-363-3p相對表達量低于CD組,但高于NC組,與Omidbakhsh等[7]的研究結(jié)果一致。提示miR-106a和miR-363-3p在UC患者血漿中特異性表達,有可能成為鑒別UC的潛在生物標志物。本研究進一步發(fā)現(xiàn),miR-106a、miR-363-3p及兩者聯(lián)合檢測的AUC均大于0.8,表明miR-106a和miR-363-3p在鑒別CD和UC方面具有較高價值,可作為鑒別CD和UC的生物標志物。

        本研究比較了不同炎性狀態(tài)的UC患者血漿miR-106a和miR-363-3p的相對表達量,發(fā)現(xiàn)活動期UC患者血漿miR-106a和miR-363-3p的相對表達量顯著高于緩解期患者,表明miR-106a和miR-363-3p表達水平與UC患者的炎性狀態(tài)相關(guān),可反映UC患者的病情。本研究結(jié)果顯示,miR-106a和miR-363-3p與活動期UC患者的預后密切相關(guān)。miR-106a>1.14、miR-363-3p>1.05提示活動期UC患者預后不良,相關(guān)機制還需進行基礎(chǔ)研究進一步闡明。本研究采用ROC評價miR-106a和miR-363-3p診斷活動期UC患者預后的效能,發(fā)現(xiàn)miR-106a、miR-363-3p及兩者聯(lián)合檢測的AUC均大于0.8,表明miR-106a和miR-363-3p對于活動期UC患者預后評估具有較高價值,可作為評估活動期UC患者預后的重要參考指標。

        綜上所述,miR-106a和miR-363-3p不僅在鑒別CD和UC方面具有較高價值,而且還可反映UC患者的病情及預后情況。由于條件有限,本研究未能納入更多樣本,因此結(jié)果可能存在一定偶然性和隨機性,今后還需進行大樣本、多中心研究進一步驗證。

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