李春 趙東興 張建春 李芹

摘要[目的]研究12種中草藥乙醇提取物對香蕉根結(jié)線蟲的毒殺活性，為香蕉根結(jié)線蟲的防治提供參考。[方法]12種中草藥用乙醇提取濃縮后，將各提取物配成5%的溶液，加入經(jīng)人工培養(yǎng)的二齡線蟲60條，分別在24、48、72 h后于顯微鏡下觀察線蟲死亡數(shù)量，并計算校正死亡率。[結(jié)果]艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭的乙醇提取物對香蕉根結(jié)線蟲有較強的毒殺活性，穿心蓮、川芎、銀杏葉、葉下珠提取物的殺線蟲活性中等，馬齒筧、黃芪提取物的殺線蟲活性較弱，且隨著時間的延長，各處理的毒殺活性增強。[結(jié)論]艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭對香蕉根結(jié)線蟲有較強的毒殺活性。

關(guān)鍵詞中草藥;乙醇;香蕉;根結(jié)線蟲;毒殺活性

中圖分類號S?432.4+5文獻標識碼A

文章編號0517-6611（2019）18-0150-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.18.040

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標識碼（OSID）：

Toxic Effect of Ethanol Extracts from 12 Kinds of Chinese Herbal Medicines on Root-knot Nematodes of Banana

LI Chun， ZHAO?Dong-xing， ZHANG?Jian-chun et al（Honghe Institute of Tropical Agricultural Sciences of Yunnan， Hekou，Yunnan 661399）

Abstract[Objective]?The toxicity of ethanol extracts from 12 Chinese herbal medicines on banana root-knot nematodes was studied to provide reference for the control of banana root knot nematodes. [Method]The extracts were prepared into 5% solution after by ethanol extract and concentration of 12 kinds of Chinese herbal medicines. And then 60 2nd instar larvae of artificial culture were added. The number of dead nematodes was observed under the microscope after 24， 48 and 72 h， and the adjusted mortality was calculated. [Result]Ethanol extracts from Artemisia argyi Levl.et Vant.， Paederia scandens （Lour.） Merr.， Sophora alopecuroides L.， Cynanchun Komarovii AL.， Asarum sieboldii Miq.，Eupatorium odoratum L. had strong toxic activity on banana root-knot nematodes.;the activities of extracts from Andrographis paniculata （Burm. f.） Nees，Ligusticum chuanxiong Hort.， Ginkgobiloba， Phyllanthus urinaria L were medium;and extracts from Portulaca oleracea L. and Astragalus membranaceus （Fisch.） Bunge. were weak. And the activities were increased with treatment time. [Conclusion]Ethanol extracts from Artemisia argyi Levl.et Vant.， Paederia scandens （Lour.） Merr.， Sophora alopecuroides L.， Cynanchun Komarovii AL.， Asarum sieboldii Miq.，Eupatorium odoratum L. has strong toxic activity on banana root-knot nematodes.

Key wordsChinese herbal medicines;Ethanol;Banana;Root-knot nematodes;Toxic activities

香蕉根結(jié)線蟲?。∕eloidogyne incognita）由根結(jié)線蟲屬（Meloidogyne spp.）的線蟲引起，是危害香蕉的重要病害之一，各香蕉種植區(qū)均有發(fā)生，發(fā)病率一般為20%～30%，嚴重的達60%以上，影響香蕉產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展[1-5]。侯曲昌等[6]研究表明，10%苦參的水提液對番茄根結(jié)線蟲有較強的毒殺效果，處理后5 d的平均校正死亡率達90.46%;劉鳳淮等[7]、杜小鳳等[8]、徐瑛等[9]研究表明，牛心樸子葉和苦豆子甲醇提取物對線蟲具有較好的防效，3 000 mg/L牛心樸子葉甲醇提取物處理48 h后，線蟲校正死亡率達93.30%，?3 200 mg/L苦豆子甲醇提取物處理48 h后，線蟲校正死亡率達?95.5%。張紅瑞等[10]用15種中草藥提取液處理懷牛膝根結(jié)線蟲的幼蟲和卵，結(jié)果顯示，用徐長卿、黃姜、喜樹、藜蘆提取液處理后，二齡幼蟲72 h的校正死亡率在90.0%以上。但這些研究均集中在番茄、黃瓜、花生[6-14]等作物上，對香蕉根結(jié)線蟲的防治主要以化學(xué)防治為主，無公害防治方面的研究較少，僅見楊秀娟[15]研究了茶籽餅對香蕉根結(jié)線蟲的防治效果，而中草藥提取液對香蕉根結(jié)線蟲的毒殺作用鮮見報道。筆者選取艾葉、苦豆子、牛心樸子草等12種中藥材，利用乙醇、丙酮和水進行提取，研究這些中藥材提取物對香蕉根結(jié)線蟲的毒殺作用，以期找出一種對香蕉根結(jié)線蟲有較強毒殺活性的植物，旨在為香蕉根結(jié)線蟲的防治提供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料中藥材：供試12種中草藥購于中藥市場，其名稱、部位及產(chǎn)地見表1。供試線蟲：香蕉根采自于云南省紅河熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所的香蕉種植基地，將采集的香蕉根洗凈，收集帶根結(jié)病根，將病根剪成0.5～1.0 cm大小，置于植物粉碎機中粉碎，過濾，收集500目篩子中的線蟲卵，配成?300個/ mL的根結(jié)線蟲卵懸浮液。

1.2中草藥提取液的制備

將供試中草藥置于烘箱內(nèi)在?60 ℃下烘干，粉碎至40目，貯于黑色塑料袋中，備用。稱取各藥材15 g于200 mL具塞三角瓶中，加入150 mL無水乙醇浸泡過夜，于振蕩機上振蕩提取2 h，過濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干，放置在4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3二齡線蟲的培養(yǎng)

將采集的香蕉根洗凈，收集帶根結(jié)病根，將病根剪成0.5～1.0 cm大小，置于植物粉碎機中粉碎，過濾，收集500目篩子中的卵，放于26 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)?6 d，得到大量的二齡幼蟲（J2）。

1.4中草藥提取物對香蕉根結(jié)線蟲的毒殺作用

稱取“1.2”制備的中草藥提取物0.5 g，用少量溶劑溶解后用蒸餾水稀釋至100 mL，得5 mg/mL溶液。分別量取2?mL稀釋液加入直徑3.5 cm的培養(yǎng)皿中，隨后加入60條“1.3”培養(yǎng)的二齡線蟲，每處理重復(fù)3次，并以蒸餾水為對照，放置于26 ℃培養(yǎng)箱中，分別在24、48、72 h后于顯微鏡下觀察線蟲死亡數(shù)量，按Abbott公式計算校正死亡率。線蟲死亡計數(shù)標準參考文艷華等[16]的方法，即線蟲呈僵直不動為死蟲，線蟲呈彎曲蠕動狀態(tài)為活蟲，各中藥材對香蕉根結(jié)線蟲的毒殺活性參照文獻[17]的方法進行分級。

線蟲死亡率=線蟲死亡數(shù)/供試線蟲數(shù)×100

校正死亡率=（處理組線蟲死亡率-對照組線蟲死亡率）/（1-對照組線蟲死亡率）×100

2結(jié)果與分析

12種中草藥乙醇提取物對香蕉根結(jié)線蟲的毒殺效果見表2。由表2可知，艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭的乙醇提取物在24 h內(nèi)對香蕉根結(jié)線蟲有較強的毒殺活性，線蟲校正死亡率分別為68.95%、65.44%、?77.71%、72.19%、70.21%和63.92%，其殺線蟲活性強度均為“+++”，顯著高于其他藥材的毒殺活性;穿心蓮、川芎、銀杏葉、葉下珠提取物的殺線蟲活性中等，處理24 h校正死亡率在?26.32%～47.37%;馬齒筧、黃芪提取物的殺線蟲活性弱，處理24 h校正死亡率均低于30%。

隨著時間的增長，各中藥材乙醇提取物對香蕉根結(jié)線蟲的毒殺活性均有所增加。處理48 h艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭乙醇提取物對香蕉根結(jié)線蟲的毒殺活性增加，線蟲的校正死亡率分別為83.02%、84.13%、?93.69%、86.19%、89.95%和84.91%，殺線蟲活性強度均為“++++”;穿心蓮、川芎、銀杏葉、葉下珠提取物的殺線蟲活性中等，處理48 h校正死亡率在43.39%～62.26%;馬齒筧、黃芪提取物的殺線蟲活性仍較弱，處理48 h校正死亡率分別為?34.96%和39.65%。

處理72 h艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭乙醇提取物對香蕉根結(jié)線蟲的毒殺活性進一步增加，線蟲的校正死亡率分別為94.01%、91.02%、94.98%、92.56%、96.41%和91.71%，殺線蟲活性強度仍為“++++”;穿心蓮、川芎、銀杏葉、葉下珠提取物的殺線蟲活性為強活性，活性強度達到“+++”，處理72 h校正死亡率在50.04%～76.02%;馬齒筧、黃芪提取物的殺線蟲活性仍較弱，處理72 h校正死亡率分別為42.08%和46.74%。

3結(jié)論與討論

據(jù)文獻報道，苦豆子、紫莖澤蘭、牛心樸子葉、細辛[7-10，18-19]等植物對南方根結(jié)線蟲有較強的毒殺活性，在供試的12種中藥材中，艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭提取物對香蕉根結(jié)線蟲的毒殺活性效果較好， 且隨著處理時間的增長，對香蕉根結(jié)線蟲的毒殺作用增強，其中處理24 h線蟲校正死亡率達63.92% 以上，處理48 h線蟲校正死亡率達83.02% 以上，72 h后達91.71% 以上。這與文獻報道相符，可能是因為南方根結(jié)線蟲是試驗地區(qū)香蕉根結(jié)線蟲的優(yōu)勢種群引起的[2]。另外，穿心蓮、川芎、銀杏葉、葉下珠提取物的殺線蟲活性中等，處理24 h校正死亡率在26.32%～47.37%，處理48 h校正死亡率在43.39%～62.26%，處理72 h校正死亡率在50.04%～76.02%;馬齒筧、黃芪提取物的殺線蟲活性較弱，處理24 h校正死亡率均低于30%，處理48 h校正死亡率分別為34.96%和39.65%，處理72 h校正死亡率分別為42.08%和46.74%。

所用的提取劑不同，從植物中提取出的化學(xué)成分不同，該研究僅用乙醇作為提取劑，若更換提取劑，并不排除弱活性物質(zhì)對香蕉根結(jié)線蟲的毒殺活性增強的可能。因此，還應(yīng)進一步研究其他溶劑提取液對根結(jié)線蟲的毒殺活性，避免將具有殺線蟲活性物質(zhì)的植物資源淘汰。

植物源殺線蟲劑具有分解快、殘留低、污染少、毒性小等特點，因此，尋找有效的植物或中草藥提取物來防治香蕉根結(jié)線蟲，在根結(jié)線蟲綜合防治中，具有廣闊發(fā)展前景，該研究結(jié)果表明艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭提取物對香蕉根結(jié)線蟲的毒殺活性效果較強，將為香蕉根結(jié)線蟲的防治提供參考。

參考文獻

[1]張紹升，吳燕珠，翁自明.香蕉根結(jié)線蟲病及其病原鑒定[J].植物保護，1991，17 （2）：28.

[2]李迅東，翟留香，孫茂林.云南省香蕉線蟲發(fā)生分布和種群密度調(diào)查[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，1999，12（1）：92-95.

[3]鄢小寧，鄭服叢，林茂松.兩廣地區(qū)香蕉根際寄生線蟲的調(diào)查與鑒定[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，25（6）：4-8.

[4]鄢小寧，林旺賢，鄭服叢.海南島香蕉寄生線蟲的調(diào)查[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004，24（6）：13-16，20.

[5]黃金玲，劉志明，陸秀紅，等.廣西香蕉植物線蟲病發(fā)生情況調(diào)查[J].植物保護，2011，37（6）：191-193.

[6]侯啟昌，王偉浩.3種中草藥提取液對蔬菜根結(jié)線蟲的防治效果[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45（5）：66-67.

[7]劉鳳淮，吳傳萬， 杜小鳳， 等. 牛心樸子葉甲醇提取物對南方根結(jié)線蟲的生物活性的影響[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報，2009，25（9）：212-215.

[8]杜小鳳 ，吳傳萬 ，楊文飛，等. 苦豆子甲醇提取物對南方根結(jié)線蟲的生物活性[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2010，22（11）：88-90.

[9]徐瑛，張冬冬， 王江嶺，等. 兩種生物制劑對植物寄生線蟲防效的室內(nèi)測定 [J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2009，37（8）： 3611-3612.

[10]張紅瑞，張華，高致明，等.15種中草藥提取液對懷牛膝根結(jié)線蟲的殺蟲殺卵效果[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，41（2）：101-104.

[11]高倩圓，胡飛龍，祝紅紅，等. 蓖麻提取物和淡紫擬青霉對南方根結(jié)線蟲的防治作用[J].生態(tài)學(xué)雜志，2011，30（10）：2250-2256.

[12]謝寧.苘麻提取物對南方根結(jié)線蟲生物活性測定及活性成分的分離[D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[13]高淋淋，黃金玲，陸秀紅，等.堆肥提取液和發(fā)酵液防治番茄根結(jié)線蟲病的盆栽試驗[J].北方園藝，2016（18）：122-126.

[14]遲玉成，許曼琳，牟山，等. 蓖麻葉水提取液對花生根結(jié)線蟲的防治作用研究[J].花生學(xué)報，2012，41（4）：42-44.

[15]楊秀娟.使用茶籽餅防治香蕉根結(jié)線蟲及其對土壤線蟲和微生物群落結(jié)構(gòu)的影響[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2015.

[16]文艷華，馮志新，徐漢虹，等.植物抽提物對幾種植物病原線蟲的殺線活性篩選[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2001，20（3）：235-238.

[17]CHANDRAVADANA M V，EUGENE S，NIDIRY，et al.Nematicidal activity of some plant extracts [J].Indian J Nematol，1996，26（2）：148-151.

[18]楊秀娟，何玉仙，陳福如，等.不同植物提取液的殺線蟲活性評價[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2002，24（3）：386-389.

[19]邱雪柏，向紅瓊，姜自清.22種植物甲醇提取液對南方根結(jié)線蟲的控制作用[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（6）：70-71.