徐求文，金妙仁2，樓偉杰2，夏天風(fēng)，陳 波，樓玲玲

(1.杭州百瑞特飼料科技有限公司，浙江 杭州 311255； 2.杭州海爾希畜牧科技有限公司)

腸道是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的主要場(chǎng)所，腸道的生長(zhǎng)發(fā)育和健康狀況影響動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，抵抗力和免疫力等。因此，維持腸道結(jié)構(gòu)和功能就顯得非常重要。仔豬斷奶往往會(huì)出現(xiàn)腸道微生物菌群紊亂，腸道粘膜形態(tài)受損，消化功能紊亂等現(xiàn)象，導(dǎo)致食欲降低，腹瀉，飼料利用率低，生長(zhǎng)緩慢，對(duì)養(yǎng)豬生產(chǎn)帶來(lái)巨大損失。谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽富含谷氨酰胺，谷氨酰胺二肽，動(dòng)物活性小肽和益生菌等，是一種能調(diào)節(jié)腸道功能的活性肽。本研究在斷奶仔豬日糧中添加谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽，研究其對(duì)斷奶仔豬黏膜形態(tài)、腸道菌群和生產(chǎn)性能的影響，為生產(chǎn)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料 谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽由杭州百瑞特飼料科技有限公司研制，谷朊粉和蠶蛹經(jīng)合理配伍酶解，發(fā)酵制成的復(fù)合肽，含谷氨酰胺，谷氨酰胺二肽，動(dòng)物活性小肽和益生菌。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取28日齡斷奶杜大長(zhǎng)仔豬60頭，按胎次，體重相近和公母基本一致原則，分成2組，分別飼養(yǎng)于條件一致的密閉式保育豬舍內(nèi)。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧(表1)，試驗(yàn)組用1%酶解發(fā)酵復(fù)合肽替代基礎(chǔ)飼糧中1%魚(yú)粉，每組三個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭，試驗(yàn)仔豬均采用干濕飼喂器飼喂，相鄰兩欄合用一個(gè)干濕飼喂器，一個(gè)飼喂器為一個(gè)重復(fù)，斷奶仔豬均飼養(yǎng)于保育舍豬舍，至49日齡結(jié)束，試驗(yàn)期21 d。

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.3生產(chǎn)性能 在42日齡和49日齡清晨空腹稱(chēng)重統(tǒng)計(jì)飼料消耗量，計(jì)算日增重和料重比。

1.4腸道菌群數(shù)量 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組每個(gè)重復(fù)選2頭接近平均體重的仔豬屠宰，分別無(wú)菌操作采集盲腸和結(jié)腸內(nèi)容物，在滅菌生理鹽水中搖勻，用平板培養(yǎng)計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)腸道乳酸桿菌和大腸桿菌數(shù)量，菌群數(shù)量以每克腸道內(nèi)容物所含細(xì)菌群落總數(shù)的對(duì)數(shù)[lg CFU/g]表示。 在無(wú)菌操作臺(tái)中稱(chēng)取1 g內(nèi)容物于99 mL帶有玻璃珠的生理鹽水中搖勻滅菌，然后取 1 mL于試管中，加入無(wú)菌生理鹽水9 mL，振蕩混勻，依次按10倍等比稀釋至10-7。其中乳酸桿菌接種于乳酸菌選擇性培養(yǎng)基(LBS)上培養(yǎng)，在 37 ℃生化培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)48 h 后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)；大腸桿菌則接種于伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在37 ℃生化培養(yǎng)箱中有氧培養(yǎng)24 h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

1.5小腸黏膜結(jié)構(gòu)測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組每個(gè)重復(fù)選2頭接近平均體重的仔豬屠宰，截取十二指腸、空腸和回腸中段各 4 cm腸段，置于含3.8%甲醛的福爾馬林固定液中，經(jīng)脫水、包蠟、切片、HE染色后，顯微鏡拍照，測(cè)量絨毛高度和隱窩深度。

1.6試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響 谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響見(jiàn)表2。

表2 谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響

注：小寫(xiě)字母不同表示各試驗(yàn)組之間差異顯著(P<0.05)，下同。

谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽能顯著提高斷奶仔豬日增重，與對(duì)照組相比，28～42日齡和28～49日齡的日增重，試驗(yàn)組比對(duì)照組分別提高了10.86%(P<0.05)和12.26%(P<0.05)。28～42日齡和28～49日齡的料重比試驗(yàn)組比對(duì)照組降低了8.28%(P>0.05)和5.52%(P>0.05)。

2.2谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽對(duì)斷奶仔豬腸道內(nèi)容物菌群的影響 谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽對(duì)斷奶仔豬腸道內(nèi)容物菌群的影響見(jiàn)表3。

日糧中谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽能顯著影響斷奶仔豬腸道內(nèi)容物菌群，試驗(yàn)組盲腸和結(jié)腸的大腸桿菌數(shù)量比對(duì)照組分別降低5.77%(P<0.05)和4.39% (P>0.05)。試驗(yàn)組盲腸和結(jié)腸的乳酸桿菌數(shù)量比對(duì)照組分別提高8.65%(P<0.05)和6.25%(P<0.05)。

表3 谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽對(duì)斷奶仔豬腸道內(nèi)容物菌群的影響(lg CFU/g)

2.3谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽對(duì)斷奶仔豬黏膜形態(tài)的影響 谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽對(duì)斷奶仔豬黏膜形態(tài)的影響見(jiàn)表4。

表4 谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽對(duì)斷奶仔豬黏膜形態(tài)的影響(μm)

由表4可見(jiàn)，日糧中添加谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵復(fù)合肽能顯著影響斷奶仔豬黏膜形態(tài)，試驗(yàn)組十二指腸、空腸和回腸絨毛高度分別比對(duì)照組提高7.34%(P<0.05)，7.48%(P<0.05)和10.98%(P<0.05)。試驗(yàn)組十二指腸、空腸和回腸隱窩深度分別比對(duì)照組降低9.36%(P<0.05)，2.18%(P>0.05)和10.19%(P<0.05)。

3 討論

3.1對(duì)生產(chǎn)性能的影響 仔豬斷奶應(yīng)激引起小腸組織學(xué)上的顯著變化(如絨毛萎縮和隱窩增生)造成了消化和吸收能力的下降，并最終導(dǎo)致腹瀉，造成生長(zhǎng)速度下降。黃冠慶等[1]就甘氨酸-L-谷氨酰胺對(duì)斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能影響進(jìn)行研究，結(jié)果表明，在21日齡斷奶仔豬日糧中添加0.25%甘氨酸-L-谷氨酰胺可顯著提高仔豬體重、采食量和飼料轉(zhuǎn)化率，能降低斷奶仔豬腹瀉率。肖英平等[2]研究表明谷氨酰胺能顯著提高斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率。本次研究表明，谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽能顯著提高斷奶仔豬日增重，降低料重比，與上述研究者的結(jié)果具有一致性。酶解發(fā)酵肽富含谷氨酰胺、谷氨酰胺二肽，以及其他活性小肽和益生菌，這有利于提高斷奶仔豬的生產(chǎn)性能。

3.2對(duì)腸道內(nèi)容物菌群的影響 谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽是經(jīng)酶解和多種微生物發(fā)酵，經(jīng)低溫干燥而成，富含乳酸菌、酵母菌、枯草芽孢桿菌，有利于調(diào)控動(dòng)物腸道有益微生物菌群。乳酸桿菌是腸道中重要的優(yōu)勢(shì)有益菌，具有維持腸道微生態(tài)平衡、拮抗腸道條件致病菌(如大腸桿菌)、提供營(yíng)養(yǎng)、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，尤其當(dāng)機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)(如斷奶等)，對(duì)機(jī)體有明顯的防御和保護(hù)作用[3]。研究表明，在仔豬斷奶階段添加益生菌能夠調(diào)控腸道菌群，糾正腸道微生態(tài)失衡，促進(jìn)其生長(zhǎng)發(fā)育[4-5]。Dong 等[6]以及謝全喜等[7-8]研究也發(fā)現(xiàn)，飼喂益生菌可以顯著降低斷奶仔豬糞便中大腸桿菌的數(shù)量，提高生產(chǎn)性能。本試驗(yàn)結(jié)果表明，谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽可以顯著提高盲腸和結(jié)腸乳酸桿菌數(shù)量，對(duì)有益菌增殖具有較好效果。與對(duì)照組相比，谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽可顯著降低盲腸和結(jié)腸中大腸桿菌數(shù)量，具明顯抑制病原菌效果。

3.3對(duì)小腸黏膜形態(tài)的影響 腸黏膜結(jié)構(gòu)和形態(tài)的完整是保證機(jī)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的基礎(chǔ)，斷奶應(yīng)激對(duì)仔豬腸黏膜形態(tài)有很大影響, 導(dǎo)致仔豬小腸絨毛萎縮和隱窩加深，使腸黏膜結(jié)構(gòu)遭到破壞[9]。研究表明，飼料添加谷氨酰胺能夠改善幼齡哺乳動(dòng)物的腸道生理功能[10]。谷氨酰胺是機(jī)體中含量最豐富的游離氨基酸，在斷奶、受傷和疾病感染等應(yīng)激條件下被認(rèn)為是一種條件性必需氨基酸[11]，腸道是利用谷氨酰胺和谷氨酸最多的器官,而G1n 和G1u也是腸道主要的能源物質(zhì)[12-13]。肖英平等[2]和劉濤等[14]的試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中的谷氨酰胺對(duì)仔豬小腸細(xì)胞增殖和維持腸道正常形態(tài)具有重要作用。谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽富含G1n和G1u，本研究結(jié)果與上述結(jié)果一致，日糧添加谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽能顯著提高斷奶仔豬十二指腸、空腸和回腸絨毛高度降低十二指腸、空腸和回腸隱窩深度。

4 小結(jié)

日糧中添加谷朊粉蠶蛹酶解發(fā)酵肽能顯著影響斷奶仔豬黏膜形態(tài)和腸道菌群，提高斷奶仔豬的生產(chǎn)性能，能明顯緩解仔豬的斷奶應(yīng)激。