朱利利，包素萍，闞曉麗

（江蘇省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，南京 210007）

28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑（含雙環(huán)磺草酮6.5%、吡嘧磺隆1.5%、丙草胺20.0%）是一種防治移栽水稻田一年生雜草的除草劑[1-2]，具有較好的持效性和安全性[3-4]。本文建立的高效液相色譜分析方法可在相同色譜條件下同時(shí)測(cè)定28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑中有效成分雙環(huán)磺草酮和吡嘧磺隆的含量[5]，能夠?qū)崿F(xiàn)測(cè)定的各組分與試樣中其他組分的分離。該測(cè)定方法線性關(guān)系良好，準(zhǔn)確度、精密度均較高。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

Agilent 1260高效液相色譜儀、DAD檢測(cè)器和全自動(dòng)進(jìn)樣器，色譜工作站；Millipore超純水制備系統(tǒng)；超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

雙環(huán)磺草酮（97.6%），國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心（沈陽(yáng)）；吡嘧磺隆（99.0%），國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心（沈陽(yáng)）；甲醇（色譜純），TEDIA公司；乙腈（色譜純），TEDIA公司；磷酸（分析純），南京化學(xué)試劑有限公司；自制超純水。28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑樣品，南京高正農(nóng)用化工有限公司。

1.2 色譜條件

流動(dòng)相：甲醇＋水＋磷酸（體積比80.0∶19.5∶0.5）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；進(jìn)樣量：5 μL；保留時(shí)間：雙環(huán)磺草酮約為4.1 min；吡嘧磺隆約為5.1 min。標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液的高效液相色譜圖見圖1和圖2。

圖1 有效成分標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖

圖2 28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑液相色譜圖

1.3 測(cè)定步驟

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制

分別稱取雙環(huán)磺草酮標(biāo)準(zhǔn)品約0.09 g（精確至0.000 2 g）、吡嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)品約0.02 g（精確至0.000 2 g），至50 mL容量瓶中，先用約30 mL乙腈超聲振蕩5 min，使其全部溶解，取出置于室溫下冷卻后，再用乙腈定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

取28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑樣品約10 g，壓碎混勻后，準(zhǔn)確稱取樣品含雙環(huán)磺草酮約0.09 g（精確至0.000 2 g），至50 mL容量瓶中，先用約30 mL乙腈超聲振蕩5 min，使其完全溶解，取出置于室溫下冷卻后，再用乙腈定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，備用。

1.3.3 有效成分含量的測(cè)定

在上述條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，先將標(biāo)準(zhǔn)品溶液注入儀器分析，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng)值，直至相鄰兩次的相對(duì)響應(yīng)值變化不大于1.5%后，再按標(biāo)準(zhǔn)品溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.3.4 計(jì)算

將測(cè)得兩次試樣溶液及試樣前后兩次標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的測(cè)定組分峰面積分別進(jìn)行平均，測(cè)定試樣中雙環(huán)磺草酮（或吡嘧磺隆）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）按下式計(jì)算[6]。

式中：A1為標(biāo)準(zhǔn)品溶液中雙環(huán)磺草酮（或吡嘧磺?。┓迕娣e的平均值，mAU·s；A2為試樣溶液中雙環(huán)磺草酮（或吡嘧磺?。┓迕娣e的平均值，mAU·s；m1為雙環(huán)磺草酮（或吡嘧磺?。?biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中雙環(huán)磺草酮（或吡嘧磺?。┑馁|(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

用色譜工作站采集混合標(biāo)樣溶液和試樣溶液中有效成分吡嘧磺?。ūＡ魰r(shí)間約為5.1 min）、雙環(huán)磺草酮（保留時(shí)間約為4.1 min）在210～400 nm范圍內(nèi)的紫外吸收光譜圖。28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑的有效成分雙環(huán)磺草酮、吡嘧磺隆紫外吸收光譜圖與混合標(biāo)樣溶液中各對(duì)應(yīng)成分的紫外吸收光譜圖一致，最大紫外光譜吸收值無(wú)差異。同時(shí)對(duì)雙環(huán)磺草酮、吡嘧磺隆的色譜峰進(jìn)行光純度分析，用匹配值與固定閾值990進(jìn)行比較，均滿足大于990，滿足定量分析要求。綜合考慮靈敏度和數(shù)據(jù)穩(wěn)定性，最終選擇254 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.2 流動(dòng)相的選擇

為了在有效分離雙環(huán)磺草酮、吡嘧磺隆的色譜峰的同時(shí)又能得到較好的峰形，分別對(duì)不同比例甲醇＋水、甲醇＋水＋磷酸、乙腈＋水、乙腈＋水＋磷酸體系的流動(dòng)相做了比較分析，兼顧分離良好、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠、節(jié)約分析時(shí)間，最終確定流動(dòng)相體系為甲醇＋水＋磷酸（體積比80.0∶19.5∶0.5）；通過(guò)改變流速來(lái)進(jìn)行測(cè)定，分別設(shè)定為0.6、0.8、1.0、1.2 mL/min，通過(guò)比較分析，最終流速確定為1.0 mL/min。

2.2 精密度的測(cè)定

在上述操作條件下，對(duì)同一樣品進(jìn)行5次重復(fù)測(cè)定，分別計(jì)算有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)及其平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)（見表1）。結(jié)果表明，兩種有效成分色譜定量分析方法精密度均能滿足定量分析要求。

表1 精密度測(cè)定結(jié)果

2.3 線性關(guān)系的測(cè)定

采用已知含量的雙環(huán)磺草酮和吡嘧磺隆標(biāo)樣分別配制5個(gè)已知濃度的梯度混合標(biāo)樣溶液，以雙環(huán)磺草酮、吡嘧磺隆的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，分別繪制線性關(guān)系曲線（圖3、圖4）。雙環(huán)磺草酮線性回歸方程為y=2.4167x＋38.971，R2=0.9998；吡嘧磺隆線性回歸方程為y=5.265 1x-37.565，R2=0.997 5。

圖3 雙環(huán)磺草酮的線性關(guān)系圖

圖4 吡嘧磺隆的線性關(guān)系圖

2.4 準(zhǔn)確度的測(cè)定

依據(jù)《農(nóng)藥產(chǎn)品分析方法確認(rèn)指南》，按照制劑配方比例要求，將除原藥以外的所有助劑按照制劑相同比例混勻，作為制劑空白[7]。在一定量的制劑空白中添加雙環(huán)磺草酮標(biāo)樣、吡嘧磺隆標(biāo)樣，合成5個(gè)組成與28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑相似的模擬試樣，作為樣品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行準(zhǔn)確度測(cè)定。結(jié)果表明，雙環(huán)磺草酮的平均回收率為99.35%，變異系數(shù)為0.76%；吡嘧磺隆的平均回收率為99.22%，變異系數(shù)為0.55%，符合《農(nóng)藥產(chǎn)品分析方法確認(rèn)指南》的要求，準(zhǔn)確度測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 準(zhǔn)確度測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

本文建立的液相色譜分析方法能同時(shí)有效地分離28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑中有效成分雙環(huán)磺草酮和吡嘧磺隆，并測(cè)定其含量。該方法精密度、準(zhǔn)確度較高，操作簡(jiǎn)便，具有良好的線性關(guān)系，能滿足實(shí)際樣品分析檢驗(yàn)的要求，對(duì)相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量監(jiān)督與檢測(cè)具有積極意義。