李桂珍，谷 瑤，楊 漓，馬錦林

（廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學研究院 廣西特色經(jīng)濟林培育與利用重點實驗室，南寧 530002）

油茶（Camellia oleifera）又叫茶子樹，主要是指山茶屬植物中油脂含量較高且有栽培經(jīng)濟價值的一類植物的總稱，是中國南方特有的木本食用油料樹種，與油橄欖（Olea europaea）、油棕（Elaeis guineensis）、椰子（Cocos nucifera）并稱為世界四大木本油料樹種[1]。目前，已發(fā)現(xiàn)的山茶屬植物共有238 種，種子含油率較高的有50 多種[2]。我國是世界上油茶產(chǎn)量最高、分布最廣、品種最多的國家[3-5]。據(jù)中國林業(yè)產(chǎn)業(yè)聯(lián)合會木本油料分會統(tǒng)計，截至2017年底，中國油茶種植面積擴大到436.7 萬hm2，茶油年產(chǎn)量提升到50～60 萬t，且今后平均每年將有13.3 萬hm2新造林進入豐產(chǎn)期，預計到2025年總產(chǎn)量將達到250 萬t。油茶果殼是油茶果的果皮，一般占整個茶果鮮重的50%～60%[6]，按此算，年產(chǎn)油茶果殼達幾百萬t，通常油茶果經(jīng)曬干脫籽后的果殼被作為廢料處理或用作冬天取暖用的燃料，尚未得到較好的開發(fā)利用，造成資源的極大浪費。油茶餅粕是油茶籽榨油后主要的剩余物，富含皂素和多糖。隨著科學技術的不斷發(fā)展，對油茶有效成分的研究不斷深入，油茶的開發(fā)利用日益受到重視，系列產(chǎn)品茶皂素、茶單寧、茶多糖等廣泛用于食品、醫(yī)藥、化工、日用等行業(yè)[7-12]，可產(chǎn)生較大的經(jīng)濟效益和社會效益。因此，對不同油茶品種果殼和餅粕中的活性成分進行提取和測定，可為油茶剩余物資源的開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)，對促進油茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的現(xiàn)實意義。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

不同品種油茶陸川油茶（Camellia vietnamensis），香花油茶（Camellia osmantha），岑軟3#油茶（Camellia oleifera‘Cenruan 3’）果殼及餅粕源于廣西林業(yè)科學研究院山茶油生產(chǎn)中試車間。無水葡萄糖、蘆丁為標準品；95%乙醇、石油醚（60～90 ℃）、苯酚、亞硫酸氫鈉、氫氧化鈉、酒石酸鉀鈉、3，5-二硝基水楊酸、甲醇、濃鹽酸、丙酮、濃硫酸、硝酸鋁、亞硝酸鈉均為分析純。

1.2 儀器

UV-2501PC 紫外可見分光光度計，日本島津公司；PL203 電子天平（精確到0.000 1g），梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；電熱恒溫水浴鍋，北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司；L530 離心機，湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，鄭州長城科工貿(mào)有限公司；水循環(huán)真空泵，鄭州長城科工貿(mào)有限公司；電熱鼓風干燥箱，天津泰斯特儀器有限公司；索氏抽提器，天津玻璃儀器廠；高速萬能粉碎機，天津泰斯特儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 取樣

不同油茶品種分類加工，取樣時分別從相應的果殼堆里任選5個點抽取，每個點1 000 g，混合均勻后曬干待測。

油茶餅粕加工后分類裝于麻袋中，取樣時同類餅粕任意抽取5袋，少于5袋的全部抽取，每袋500 g，混合均勻后待測。

1.3.2 樣品預處理

油茶果殼及餅粕按品種各取1.3.1混合樣500 g，先用枝剪或錘子弄碎，再經(jīng)萬能粉碎機粉碎，過80目篩，于105 ℃干燥6 h后待測。

1.3.3 單寧的提取與測定

不同油茶果殼單寧的提取和測定按標準LY∕T 1083-2008《栲膠原料分析試驗方法》[13]進行。

1.3.4 皂素的提取和測定

稱取油茶果殼粉末約50 g，加入6倍體積的石油醚，于70 ℃下回流2 h，趁熱過濾，濾渣重復回流1 次，過濾，濾渣揮干，按料液比1∶10 加入95%乙醇，于80 ℃下提取2 次，每次提取2 h，均趁熱過濾，并用熱95%乙醇洗滌，將濾液回收溶劑、真空干燥，稱重，待測。按標準SN∕T 1852-2006[14]進行測定。

1.3.5 多糖的提取與測定

稱取油茶果殼粉末約5 g，加入6 倍體積的石油醚，于70 ℃下回流2 h，趁熱過濾，濾渣重復回流1次，過濾，濾渣揮干，按料液比1∶30加入蒸餾水，100 ℃水浴提取2 h，離心，重復1次，合并上清液，定容至500 mL，待測[12]。

取分析純苯酚25 g，加水溶解，定容至500 mL，即得5%苯酚溶液。將該溶液置于棕色瓶內(nèi)，放4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

DNS 試劑制備：甲液——稱取苯酚6.9 g，加10%氫氧化鈉溶液15.2 mL使之溶解，加水至69 mL，加亞硫酸氫鈉6.9 g。乙液——稱取酒石酸鉀鈉，加10%氫氧化鈉溶液300 mL，溶解后加1%3，5-二硝基水楊酸880 mL，搖勻。兩溶液完全溶解后，混合，置于棕色瓶中，7 d后使用，使用前需過濾。

精密稱取無水葡萄糖標準品51.45 mg，置于50 mL 燒杯中，加蒸餾水溶解并稀釋、定容至50 mL，得1.029 mg∕mL 葡萄糖溶液。取該溶液5 mL稀釋至100 mL，得0.051 45 mg∕mL葡萄糖溶液。

苯酚-硫酸法標準曲線：精密量取0.051 45 mg∕mL葡 萄 糖 溶 液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.2、1.5 mL，置于10 mL 比色管中，加蒸餾水至2.0 mL，加5%苯酚溶液1.5 mL，搖勻，迅速垂直加濃硫酸5 mL，搖勻，于50 ℃水浴30 min，用流動水迅速冷卻30 min。同時以2 mL 蒸餾水作為空白樣，按上述方法顯色后在490 nm 處分別測定吸光度，以葡萄糖濃度（x，μg ∕mL）為橫坐標、吸光度（y）為縱坐標，繪制曲線，計算回歸方程。

DNS 標準曲線：精密量取1.029 mg∕mL 葡萄糖溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置于25 mL容量瓶中，補充蒸餾水至5 mL，各加入DNS 試劑5 mL，迅速振搖均勻，90 ℃水浴10 min，流水冷卻20 min，加水定容至刻度。同時以5 mL 蒸餾水作為空白對照，按上述方法顯色后于520 nm 波長處分別測定吸光度，以葡萄糖濃度（x，μg ∕mL）為橫坐標、吸光度（y）為縱坐標，繪制曲線，計算回歸方程。

取樣品適量，按上述苯酚-硫酸法測出溶液的總糖，再用DNS 法測溶液的還原糖，多糖=總糖-還原糖。

1.3.6 黃酮的提取與測定

稱取經(jīng)干燥的油茶果殼約2 g，加入60%乙醇水溶液60 mL 浸泡過夜，40 ℃超聲45 min，抽濾，重復浸提1 次，合并濾液，并定容至200 mL，待測[15]。

精密稱取蘆丁對照品37.1 mg，置50 mL 燒杯中，加60%乙醇適量，在水浴上微熱溶解，置冷，定容至200 mL，搖勻，得蘆丁對照溶液0.185 5 mg∕L。精密吸取對照溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置入25 mL容量瓶中，再分別加60%乙醇定容至10 mL，加5%NaNO2溶液1.0 mL，搖勻，靜置6 min；加10%Al（NO3）3溶液1.0 mL，搖勻，再靜置6 min；加4%NaOH 溶液10 mL，再加60%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置15 min 后測定。以60%乙醇為空白，在510 nm 處測定其吸光度，以濃度（x，μg ∕mL）為橫坐標，吸光度（y）為縱坐標，繪制曲線，計算回歸方程。

取樣品適量，按上述方法，測出其吸光度，根據(jù)標準曲線，求出提取液中總黃酮的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同油茶品種果殼中單寧的測定

試驗選用的3種油茶果殼，外觀上看有很大差異，香花油茶很?。s1～2 mm），岑軟3#油茶其次（約2～5 mm），陸川油茶最厚（＞5 mm）。3 種不同油茶品種其果殼含有的單寧類化合物在含量上有一定差異，由高到低依次為陸川油茶（14.10%）＞岑軟3#油茶（12.21%）＞香花油茶（11.20%），果殼越厚單寧含量越高；但單寧純度與茶殼厚度關系不大，最高為岑軟3#油茶（47.73%），最低為陸川油茶（42.22%）（表1）。陸川油茶雖然單寧含量高，但其總固物、可溶物、非單寧含量都較高，因此其提取物中單寧純度最低。從單寧含量看，與現(xiàn)有的栲膠原料毛楊梅（Myrica esculenta）[16]（17%）、橡 椀（Quercus variabilisorQuercus acutissima）[17]（28%）、馬占相思（Acacia mangium）[18]（17%）相比，油茶果殼有些偏低，但作為油茶副產(chǎn)物，開發(fā)其作為栲膠原料的利用，有利于油茶產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。從單寧純度看，與現(xiàn)有的栲膠產(chǎn)品要求單寧含量大于60%有一定差距，需要通過提取工藝優(yōu)化提高。

表1 不同油茶品種果殼中單寧的測定結(jié)果Tab.1 Determination of tannin in shells of different Camellia oleifera varieties

2.2 不同油茶品種果殼及餅粕中皂素的測定

不同油茶品種果殼中的皂素含量都不高，均在5%以下，跟品種相關性較小，與餅粕中的皂素相比，明顯偏低；香花油茶與岑軟3#油茶的餅粕中皂素含量差別不大，與文獻報道的油茶餅粕中皂素含量在15%～20%之間相符[10]（表2）。油茶皂素具有乳化、潤滑等表面活性，以及殺菌、殺蟲、殺螨、溶血等生物活性，在植物保護、水產(chǎn)養(yǎng)殖、日用化工等領域有較高的應用價值[19]，試驗數(shù)據(jù)表明，以富含皂素的餅粕為原料開發(fā)系列產(chǎn)品是提高油茶餅粕附加值的有效途徑。

表2 不同油茶品種果殼及餅粕中的皂素含量Tab.2 Contents of saponin in shells and dregs of different Camellia oleifera varieties

2.3 不同油茶品種果殼及餅粕中多糖的測定

不同油茶品種果殼中的多糖含量有很大差異，陸川油茶比香花油茶高出11.31%，比岑軟3#油茶高出10.26%（表3）。香花油茶和岑軟3#油茶果殼中的多糖含量都明顯比餅粕中的低，但兩者餅粕之間差異不大；陸川油茶果殼與餅粕相當。香花油茶和岑軟3#油茶果殼中的多糖含量與文獻報道的油茶果殼中多糖含量在1.33%～5.93%之間[20-23]及油茶餅粕中多糖含量在7.43%～21.25%之間[24-29]相符。從提取或純化成本考慮，以陸川油茶果殼或香花油茶和岑軟3#油茶餅粕為原料開發(fā)油茶多糖深加工產(chǎn)品更具有經(jīng)濟價值。

表3 不同油茶品種果殼及餅粕中的多糖含量Tab.3 Contents of polysaccharide in shells and dregs of different Camellia oleifera varieties

2.4 不同油茶品種果殼中黃酮的測定

不同油茶品種果殼中的黃酮含量都不高，在4.95%～6.84%之間，差異不大（表4）。與文獻報道的油茶果殼總黃酮含量為1.71%差異較大[15]，與油茶籽殼總黃酮含量為5.02%相近[30]，影響黃酮含量的因素有待進一步探討。

表4 不同油茶品種果殼中的黃酮含量Tab.4 Contents of flavonoid in shells of different Camellia oleifera varieties

3 結(jié)論與討論

油茶餅粕和油茶果殼作為油茶加工剩余物，含有較多的活性成分，但未得到很好的開發(fā)利用。通過試驗分析，選取的陸川油茶、香花油茶以及岑軟3#油茶果殼中單寧含量均在10%以上，在栲膠工藝上有一定的應用前景。

油茶果殼相對于油茶餅粕皂素含量偏低，如需進行皂素提取，建議以油茶餅粕為原料。

多糖和黃酮具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗感染、抗消化性潰瘍、保肝等活性，陸川油茶果殼中多糖的含量為12.99%，與餅粕中多糖含量相近，可作為多糖提取的重要原料來源之一，提高油茶果殼剩余物的附加值；試驗所選的3種油茶品種的果殼中黃酮含量相差不大，在4.95%～6.84%之間，與目前文獻報道的含量有差異，影響黃酮含量的因素有待進一步研究。