郭普宇，劉迪，霍婉玲，李婷婷，崔萬林，范雨婷，薛春梅，2*

(1. 佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2. 佳木斯大學(xué)應(yīng)用微生物研究所，黑龍江 佳木斯 154007)

紫丁香蘑(Lepistanuda)，又稱紫晶蘑、裸口蘑，屬傘菌目口蘑科食用真菌[1-3]，營養(yǎng)豐富，有藥用。紫丁香蘑對腫瘤和病菌有抑制作用[4-6]。本試驗對不同濃度賴氨酸-PDA培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的生長狀況進(jìn)行對比，篩選出最適合紫丁香蘑菌絲生長的賴氨酸濃度。探究賴氨酸對紫丁香蘑菌絲生長的影響，為紫丁香蘑菌絲生長提供一個簡單有效的方法，促進(jìn)氨基酸在紫丁香蘑栽培上的應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試紫丁香蘑現(xiàn)保存于佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實驗室。為了進(jìn)行本次篩選試驗，實驗前對紫丁香蘑母種進(jìn)行活化培養(yǎng)，母種培養(yǎng)基采用PDA培養(yǎng)基，無菌操作接種后，經(jīng)過7 d的活化培養(yǎng)后篩選出最適合紫丁香蘑菌絲生長的賴氨酸濃度。

1.2 供試培養(yǎng)基及制備

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)：馬鈴薯200 g、瓊脂10 g、葡萄糖10 g、加水定容至1000 mL，pH自然。

將馬鈴薯洗凈去皮，切成小塊，稱取200 g。加水煮爛，用8層紗布過濾。取濾液，加入10 g瓊脂，不斷地加熱攪拌混勻，使瓊脂溶解完全后過濾到1000 mL燒杯中。再加入10 g葡萄糖，攪拌均勻至葡萄糖完全溶解，定容至1000 mL。分別裝入7個錐形瓶中，每個錐形瓶裝100 mL，用封口膜和牛皮紙包扎完畢。將上述盛有培養(yǎng)基的錐形瓶放于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)。在120 ℃恒溫高壓(0.098～0.118 MPa)滅菌30 min，備用。

賴氨酸-PDA培養(yǎng)基：賴氨酸固體0.4 g、無菌水40 mL。

用電子天平稱取0.4 g賴氨酸固體加入40 mL無菌水中，搖勻至無沉淀出現(xiàn)，制備成濃度為10 mg/mL賴氨酸母液，用注射器吸取賴氨酸母液，將注射器的針頭取下并換上細(xì)菌過濾器，勻速按壓注射器，過濾出無菌的賴氨酸溶液滴入提前備好的空錐形瓶中，放入4 ℃冰箱中備用。分別吸取已經(jīng)配置好的賴氨酸母液0、150、300、450、600、750、900 μL加入到100 mL的PDA培養(yǎng)基中，搖晃使培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)混合均勻，分別制成濃度為0、30、60、90、120、150、180 μg/mL的賴氨酸-PDA培養(yǎng)基。

1.3 培養(yǎng)方法

1.3.1 接種。用解剖刀切取紫丁香蘑生長旺盛的組織塊，約1 cm左右，放入不同濃度的賴氨酸-PDA培養(yǎng)基中，封口膜封好，并用記號筆做好標(biāo)注。每個變量設(shè)置3個重復(fù)，放于恒溫、恒濕相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)觀察。記錄菌絲生長過程及狀態(tài)。以上均以未加入賴氨酸母液的PDA培養(yǎng)基作為空白對照。

1.3.2 培養(yǎng)條件。放入25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.3.3 觀測方法。48 h后每天定時、定點(diǎn)標(biāo)記并測量1次菌絲生長量、菌絲生長勢及密度。分別記錄上述培養(yǎng)基中菌絲生長情況并進(jìn)行對比觀察。

2 結(jié)果與分析

經(jīng)過7 d的培養(yǎng)觀測，在上述培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲長度，如表1。

表1 第7天紫丁香蘑菌絲在不同賴氨酸培養(yǎng)基中的菌絲長度

通過3組實驗數(shù)據(jù)我們可以看出，在賴氨酸濃度為30 μg/mL的培養(yǎng)基中，紫丁香蘑的菌絲體平均長度最長，其次是賴氨酸濃度90 μg/mL的培養(yǎng)基，而沒有賴氨酸的對照組最短。

表2 不同濃度賴氨酸-PDA培養(yǎng)基中菌絲生長狀態(tài)對比

我們又對比了紫丁香蘑的菌絲體的生長速度、菌絲濃度、菌絲長勢與菌絲顏色等多項指標(biāo)，賴氨酸濃度為30 μg/mL和90 μg/mL的2種培養(yǎng)基，其菌絲的生長速度較快，菌絲濃度較密，菌絲邊緣平整，菌絲體白色無異常。

3 結(jié)論

通過上述試驗結(jié)果表明，最適合紫丁香蘑菌絲生長的賴氨酸濃度為30 μg/mL或90 μg/mL的培養(yǎng)基，菌絲長勢最好、菌絲最濃密、菌絲粗壯、菌絲邊緣最整齊。

本試驗對于紫丁香蘑母種的培養(yǎng)和菌種的保存具有重要的意義，同時對紫丁香蘑母種培養(yǎng)基優(yōu)化和栽培提供參考。