文/張經(jīng)經(jīng)

方法學驗證報告由封面和內(nèi)容兩部分組成，封面應(yīng)該有報告編號、報告出具的日期、簽發(fā)方法驗證報告日期、驗證起始日期，同時標注方法驗證的負責人是誰（基本上是各個單位的技術(shù)負責人或是本項目授權(quán)簽字人）、參與驗證人員（檢測人員、復(fù)核人員、授權(quán)檢測報告簽發(fā)人員），最后封面報告的簽字人、批準日期都寫清楚。內(nèi)容是檢測報告的主題部分，可以根據(jù)驗證報告的目錄詳細介紹。

主體內(nèi)容部分

檢測方法概述

在用方法或初次使用或方法舊標準失效、新方法投入使用前，對整個測試過程、設(shè)備、試劑了解做一個簡單的描述，做到清晰、簡潔、明了即可。

檢測設(shè)備

根據(jù)設(shè)備的性能指標以及標準要求的性能指標，把設(shè)備相關(guān)信息量進行有效的標注，包括：設(shè)備名稱、設(shè)備編號、設(shè)備的測量范圍、規(guī)格型號、廠家、以及設(shè)備的性能指標、準確等級，這些證據(jù)性文件論述清楚，根據(jù)兩者對比就可以看出配置的設(shè)備是否滿足要求，實驗室一定要確保配置的測量設(shè)備等級高于或同級于標準要求的設(shè)備，寧高配不低配，提供設(shè)備檢定/校準證書的復(fù)印件，并附圖附上。

標準物質(zhì)、試劑、對照品

標注配置的標準物質(zhì)的廠家、濃度，包括其證書報告的信息量，當信息量不全時，要經(jīng)過有效確認報確認性。對于試劑、對照品，以及檢測用的耗材，應(yīng)該寫清楚其名稱、廠家，包括驗收情況，在驗證報告上有效體現(xiàn)。

實驗環(huán)境條件

環(huán)境條件主要包括兩個方面：第一，場地的環(huán)境條件能不能滿足，這里包括溫度、濕度，有些情況下還涉及到排風、振動、輻射等。第二，檢測過程中安全設(shè)施、環(huán)境設(shè)施有無相應(yīng)的配置，比如防火防盜裝置、滅火裝置、噴淋裝置、洗眼裝置、煙霧報警裝置等等。

針對這個條款，實驗室應(yīng)該記錄環(huán)境條件影響評價相關(guān)內(nèi)容，證明環(huán)境條件滿足標準要求。必要時撰寫環(huán)境條件影響評價記錄以及環(huán)境影響評價報告，環(huán)境條件、配置的安全設(shè)施等還需要照片等其他資料，給評審專家提供客觀的證據(jù)。

人員能力

方法在投入使用前，我們首先確保檢測人員的檢測能力滿足標準要求。實驗室對人員進行有效評價：人員能力確認。人員能力確認包括八個方面：

①法律法規(guī)方面進行必要的培訓；

②對確認的方法進行必要的考核；

③樣品制備的考核；

④人員能力確認主要體現(xiàn)在設(shè)備的操作方面；

⑤實際操作考核；

⑥數(shù)據(jù)評判，包括原始記錄填寫、修改是否規(guī)范、原始記錄表式的內(nèi)容是否齊全等；

⑦對檢測人員進行質(zhì)量監(jiān)督；

⑧出具模擬報告考核，監(jiān)測人員/檢測人員依據(jù)新的標準涉及新的檢測證書/報告的相關(guān)信息量出具模擬報告，模擬報告要滿足新標準要求，滿足實驗室計量認證（RB/T214-2017）對報告的相關(guān)信息量的內(nèi)容要求。

這些綜合評定考核結(jié)束后，對通過考核的檢測人員頒發(fā)上崗證。檢測人員、報告復(fù)核人員都要持證上崗，必要時授權(quán)簽字人也要持證上崗。要將人員能力確認過程（包括確認記錄、上崗證明）的相關(guān)材料附在驗證報告的后面。

試劑、樣品管理及樣品的制備

樣品管理、樣品管理人員配置、樣品制備，以及樣品制備間的管理，與其相關(guān)內(nèi)容都要在報告中有所體現(xiàn)。

方法性能指標

方法性能是方法驗證的關(guān)鍵，文件要求實驗室以一種樣品或多濃度樣品進行實際操作檢測，驗證方法性能。參考國市監(jiān)檢測【2018】245號第十七條（一），初次使用標準方法前，應(yīng)進行方法驗證。包括對方法涉及的人員培訓和技術(shù)能力、設(shè)施和環(huán)境條件、采樣及分析儀器設(shè)備、試劑材料、標準物質(zhì)、原始記錄和監(jiān)測報告格式、方法性能指標（如校準曲線、檢出限、測定下限、準確度、精密度）等內(nèi)容進行驗證，并根據(jù)標準的適用范圍，選取不少于一種實際樣品進行測定。

1.方法檢出限

環(huán)保系統(tǒng)HJ 168-2010標準對方法檢出限的一般確定方法分為兩種情況：①空白試驗中檢測出目標物質(zhì)的情況下，做空白實驗，配制標準溶液，對空白進行多次測量，會得到一組測量結(jié)果：x1、x2、x3、x4、x5、x6、x7（環(huán)保系統(tǒng)一般要求一個濃度測7次即可），首先對數(shù)據(jù)進行處理，求平均值 ，求各個結(jié)果對平均值的分散性，即常說的殘差（測量結(jié)果與樣本均值之差），求方差 ：

n-1為HJ 168-2010標準上說的自由度，根據(jù)精密度計算過程求標準偏差（貝塞爾公式 ）：

檢出限：3.143*S(x)。②當空白試驗不能檢測出目標物質(zhì)時，需要做兩個樣本進行測定（注意：不是空白，測的是樣本值，A樣本、B樣本），每個樣本多次測量會得到一組數(shù)據(jù)，A 樣本 ：x1、x2、x3、x4、x5、x6、x7，求平均值，求殘差 ，求方差，注意HJ 168-2010寫的是

其中υA就是自由度n-1，測7次就是7-1=6，同理B樣本得到SB，計算標準偏差：

，得到方法檢出限3.143*S(x)。

2.精密度

分別配制高、中、低三個濃度的樣本，每個濃度得到一組測量結(jié)果。注意，三個測定結(jié)果的精密度標準偏差是不一樣的，因為濃度值不一樣，分散區(qū)間就不一樣，殘差就不一樣，方差也不一樣，所以精密度測定過程中，中、高、低三個濃度的檢測結(jié)果的精密度不一樣。計算時，第一步求平均值，第二步求殘差，第三步用標準偏差計算低濃度的精密度，用標準偏差來表示，標準偏差就是測量結(jié)果的A類評定，A類評定一般只取正不取負，它表征低濃度測量結(jié)果落在平均值范圍內(nèi)的概率。對于中、高濃度也是。雖然S(x)低≠S(x)中≠S(x)高，但是相對標準偏差（RSD）是一樣的，相對標準偏差等于各自的標準偏差除以各自濃度的平均值，理論上RSD是同一個數(shù)，所以方法學驗證過程中主要看RSD這個指標，而不是看標準偏差。

3.準確度

實驗室常用En允差法或Z比分值法評判準確度，通常是用標準物質(zhì)（或質(zhì)控品）驗證，質(zhì)控品的結(jié)果是已知，只需測定人員對樣品進行檢測，得到一組檢測結(jié)果，求其平均值，即為測量結(jié)果。測定結(jié)果減去已知值所得差異值必須在設(shè)備的允許誤差范圍內(nèi)。允許誤差用±δ表示：

舉例：配制一個濃度20mg/L的質(zhì)控樣品，測定人員對它進行多次測量（假設(shè)3次），得到一組測量 結(jié) 果 19.05 mg/L、19.15 mg/L、19.10 mg/L，則平均值是19.10 mg/L，標準規(guī)定這個項目的允許范圍是±2%，判定該結(jié)果準確度是否合格。

差 異 值 |19.10-20|=0.9 mg/L，允差半寬 |±2%×20|=0.4 mg/L ，0.9 mg/L＞0.4 mg/L，所以準確度不合格。

4.重復(fù)性

重復(fù)性是指在盡量相同條件下，包括方法、人員、儀器、環(huán)境等，以及盡量短的時間間隔內(nèi)完成重復(fù)測量任務(wù)，即由統(tǒng)一人員，在同一實驗室內(nèi)，使用同一儀器，對樣品進行多次測量，測量結(jié)果在95%概率水平，最大值與最小值的差值。

舉例：見上例，判定該結(jié)果重復(fù)性是否合格。

19.05-19.15=-0.1 mg/L，允差半寬 |±2%×20|=0.4 mg/L，0.1 mg/L＜0.4 mg/L，則重復(fù)性合格。

對于其他參數(shù)，例如重復(fù)性限、再現(xiàn)性限、線性、校準曲線，只需根據(jù)HJ168-2010文件、標準、實驗實際規(guī)定去一項一項驗證，保留驗證記錄以及所有統(tǒng)計分析記錄，附在驗證報告后面，以保證原始記錄可追溯。

采樣/檢測原始記錄

新標準發(fā)布后，原來原始記錄上面的信息量與相關(guān)信息是否滿足新方法新標準要求呢？這不一定。所以技術(shù)負責人應(yīng)該組織相關(guān)檢測人員以及項目負責人對原有的檢測記錄進行必要的審核和修訂，一旦發(fā)現(xiàn)信息量不足，應(yīng)該及時補充，要把修訂后的原始記錄復(fù)印件附在證書報告的后面，證明實驗室現(xiàn)有的原始記錄的信息量是齊全且滿足新標準方法要求的。

證書/報告格式及信息量

檢測報告格式應(yīng)同時滿足兩個要求：①RB/T 214-2017中4.5.20～4.5.27的要求；②環(huán)保系統(tǒng)特殊要求，它包括格式、信息量、相關(guān)聲明、相關(guān)備注等。所以在方法驗證報告后面把檢測報告的模板附上，以備專家考核。

質(zhì)控情況

方法、環(huán)境條件、設(shè)備、人員、試劑等以上九個內(nèi)容驗證完畢之后，最重要的就是依據(jù)新標準對樣品進行測量能不能得到準確的結(jié)果？那么我們一定要做質(zhì)控。原河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局（現(xiàn)河北省市場監(jiān)督管理局）發(fā)布的冀質(zhì)監(jiān)函【2018】326號文件對質(zhì)量控制要求是：10%的項目（或參數(shù)）與兩家以上經(jīng)過兩個資質(zhì)認定周期換證的同類檢驗檢測機構(gòu)進行比對試驗，包括自己在內(nèi)，共有三個檢測結(jié)果xA、xB、xC，對應(yīng)三個報告：A（假設(shè)A是自己的報告）、B、C。

（這里n=3），得到精密度。最后判定：①

證明合格，數(shù)據(jù)準確可靠，質(zhì)控有效；②2＜Z＜3，在警覺范圍內(nèi)，結(jié)果可疑；③Z≥3，不合格。這是有能力找機構(gòu)的時候，這種質(zhì)控情況應(yīng)在報告中體現(xiàn)，把三個檢測報告附在方法驗證報告后面，并附上數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析報告。

若無法找到其他實驗室做比對，可采取自我驗證的方式，往往用標準物質(zhì)做質(zhì)控，標物相當于已知值 ，測量人員多次測量有測量結(jié) 果 x1、x2……，求在方法允許范圍內(nèi)，視同自我驗證合格，視同質(zhì)控有效。以上所有都驗證完畢以后，可以證明實驗室有能力采用這個方法開展相關(guān)的檢測工作。

報告結(jié)論

此時基本可以給出方法驗證的結(jié)論。有的實驗室寫的結(jié)論是“合格”，這種表述是不對的，方法驗證的最終目的是向發(fā)證機關(guān)、向客戶來進行證明，證明實驗室具備用新方法開展檢測工作的能力，而不是結(jié)論聲明合格。

附表及附圖

注意，以上條款從頭到尾驗證完畢以后，根據(jù)補充要求（國市監(jiān)檢測【2018】245號）第十三條（三）規(guī)定：方法驗證或方法確認的過程及結(jié)果應(yīng)形成報告，并附驗證或確認全過程的原始記錄，保證方法驗證或確認過程可追溯。

最后，我們把所有過程的數(shù)據(jù)與記錄分別整理，落在所有環(huán)節(jié)里面，形成報告?zhèn)洳?，報告?jīng)授權(quán)簽字人批準以后，成冊裝訂，提交掃面件到上報系統(tǒng)，在評審的時候，提供給專家，這就是環(huán)境領(lǐng)域方法驗證的過程。