馬華魁

福建南星動(dòng)物保健品有限公司 福建南平 353000

豬圓環(huán)病毒病是近幾年發(fā)現(xiàn)的一種新的、比較難控制的傳染性疾病，主要侵害的是免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致被感染豬產(chǎn)生免疫抑制，多與其他病原微生物一起產(chǎn)生共同感染，導(dǎo)致病死率明顯上升[1-4]。PCV-2會(huì)嚴(yán)重?fù)p害豬的免疫系統(tǒng)，在支氣管、鼻黏膜、扁桃體、肺臟、腎臟、小腸和脾臟，病毒一般留在單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、胸腺巨噬細(xì)胞和組織細(xì)胞，干擾細(xì)胞增殖，使相應(yīng)組織發(fā)生功能障礙，導(dǎo)致免疫 抑制。

通過血清學(xué)調(diào)查大數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，在世界大部分生豬養(yǎng)殖國家都出現(xiàn)過豬圓環(huán)病毒病陽性。例如，德國的某豬場也增加到77%，病死率為10%～30%[5-7]。我國第一次證實(shí)該病發(fā)生在21世紀(jì)初，通過對幾百份血清進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)抗體陽性率近43%，有的省份甚至高達(dá)77%[8-10]。根據(jù)調(diào)查結(jié)果，結(jié)合當(dāng)?shù)厍闆r總結(jié)，不同豬群不同日齡的抗體水平都不同，并且斷乳仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征抗體陽性率的出現(xiàn)是隨著日齡的增長而漸漸升高。在種豬上老母豬的抗體陽性率大于新母豬，甚至達(dá)到近86%[11-14]。

由于PCV-2感染在各生產(chǎn)階段都有可能發(fā)生，飼養(yǎng)周期至少6～8個(gè)月，周期太長、不可控因素偏多，所以，僅僅通過評估生產(chǎn)指標(biāo)和臨床癥狀來評估疫苗效果是不嚴(yán)謹(jǐn)?shù)模瑹o疑加大了規(guī)模場選擇疫苗的困難。本試驗(yàn)通過調(diào)查福建省部分規(guī)模豬場豬圓環(huán)病毒病疫苗實(shí)際免疫情況，了解免疫不同疫苗的抗體水平，為養(yǎng)殖戶選擇適合本場的疫苗提供數(shù)據(jù)依據(jù)；通過比較未感染免疫場和感染免疫場的抗體情況，檢驗(yàn)所選試劑盒是否能真實(shí)反映人工免疫和自然感染的抗體規(guī)律。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 主要試劑與儀器 豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒（揚(yáng)州，金宇優(yōu)邦）；BioTek酶標(biāo)儀（美國，BioTek）；超凈工作臺(tái)（蘇州凈化）；不同規(guī)格移液器（德國，eppendorf）等。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物、豬場免疫情況和疫苗產(chǎn)品 試驗(yàn)對象選擇為福建省5個(gè)地市的8個(gè)規(guī)模豬場，編號(hào)分別為C至K，豬場免疫情況和疫苗產(chǎn)品見表1。

表1 各試驗(yàn)豬場疫苗免疫情況

1.1.3 樣品采集及制備 樣品采自8個(gè)規(guī)模豬場，共采集有效血清730份。樣本由各場按不同階段隨機(jī)從豬前腔靜脈采集并分離出血清，用以檢測豬圓環(huán)病毒2型抗體。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 血清檢測PCV-2抗體 試驗(yàn)按照金宇優(yōu)邦豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 結(jié)果判定 S/P值≥0.30為陽性，S/P值＜0.30為陰性。S/P值=（待檢樣本OD450均值-陰性對照OD450均值）/（陽性對照 OD450均值-陰性對照 OD450均值）。

1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)完成后收集數(shù)據(jù)，利用相關(guān)軟件進(jìn)行計(jì)算，并繪制有關(guān)圖表。

2 結(jié)果與分析

2.1 免疫場與未免疫場種豬群抗體分析 免疫場與未免疫場公豬、后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬的豬圓環(huán)病毒病抗體陽性率基本為100%，用SPSS軟件T.TEST檢驗(yàn)分析，公豬、母豬、后備豬組間均差異不顯著（見表2）；但各階段種豬群的S/P均值，免疫場較未免疫場更高，符合免疫學(xué)規(guī)律；未免疫場的變異系數(shù)皆比免疫場的變異系數(shù)更高，分析認(rèn)為未免疫場種豬的抗體水平更活躍（見表3-表4）。

表2 免疫場與未免疫場種豬抗體比較

表3 未免疫場種豬抗體情況

表4 免疫場種豬抗體情況

2.2 PCV-2全病毒滅活苗與亞單位疫苗免疫效果分析 選取種豬未免疫豬圓環(huán)病毒病疫苗、仔豬分別免疫全病毒滅活苗a苗、b苗的D場、K場，種豬未免疫豬圓環(huán)病毒病疫苗、仔豬免疫亞單位疫苗的F場，從圖1-圖3比對分析可看出，三個(gè)不同免疫模型場抗體趨勢皆出現(xiàn)先下降后上升的趨勢。但免疫全病毒滅活苗商品豬的感染時(shí)間點(diǎn)較免疫亞單位疫苗商品豬的感染時(shí)間更早，D場、K場在50日齡，而F場在105～150日齡。14日齡免疫亞單位C疫苗后抗體水平較高且維持時(shí)間較長，而免疫全病毒滅活苗后抗體水平持續(xù)短暫時(shí)間后即下降，分析認(rèn)為免疫效果較差。

圖1 D場各階段PCV-2抗體檢測結(jié)果

圖2 F場各階段PCV-2抗體檢測結(jié)果

圖3 K場各階段PCV-2抗體檢測結(jié)果

2.3 不同廠家豬圓環(huán)病毒亞單位疫苗免疫效果分析 選取種豬未免疫豬圓環(huán)病毒病疫苗、仔豬14日齡免疫國產(chǎn)c苗的F場，種豬未免疫豬圓環(huán)病毒病疫苗、仔豬免疫進(jìn)口d苗的H場，從圖4-圖5可看出，免疫后45 d內(nèi)F場圓環(huán)病毒病抗體陽性率及S/P均值較H場更高，c苗的免疫效果更佳；從感染趨勢看，H場的感染時(shí)間點(diǎn)在90日齡前后，而F場的感染時(shí)間點(diǎn)在105～150日齡。

圖4 F各階段PCV-2抗體檢測結(jié)果

3 討 論

圖5 H場各階段PCV-2抗體檢測結(jié)果

從免疫場和未免疫場對比可知，兩者的種豬抗體陽性率皆較高。所以，不能簡單通過檢測種豬的圓環(huán)病毒病抗體陽性率高低來判斷種豬的健康程度；但是免疫場的變異系數(shù)較不免疫場穩(wěn)定，因此，種豬免疫豬圓環(huán)病毒病疫苗可以降低種豬群的波動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)。

試驗(yàn)結(jié)果表明，商品豬免疫豬圓環(huán)病毒亞單位疫苗45 d內(nèi)的抗體陽性率及S/P均值都比免疫豬圓環(huán)病毒全病毒滅活苗更高，且免疫豬圓環(huán)病毒亞單位疫苗的商品豬野毒感染時(shí)間更遲，商品豬耐受性更強(qiáng)，臨床損失更小。c苗在幾個(gè)圓環(huán)病毒亞單位產(chǎn)品中免疫效果更好。

通過對種豬群未免疫的F場檢測發(fā)現(xiàn)，該場抗體陽性率達(dá)100%，說明該場為野毒感染場，其S/P均值高于2.0以上；而種豬群免疫的G場，雖然抗體陽性率100%，但S/P均值均處于1.5以下，能直觀反映免疫的抗體規(guī)律；通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，用其他豬圓環(huán)病毒病抗體試劑盒檢測，無法直觀反映人工免疫和野毒感染的規(guī)律。

豬圓環(huán)病毒一直在我國廣泛傳播流行和變化，從2a亞型到2b亞型再到現(xiàn)在出現(xiàn)的2d亞型、PCV-3。PCV-2型疫苗是防控該病的主要手段，影響疫苗效果的因素除了抗原含量、蛋白含量、佐劑外，還與免疫次數(shù)、免疫時(shí)間、合理的免疫劑量及豬群健康度息息相關(guān)。疫苗效果的評估除了血清抗體和抗原檢測外，還要結(jié)合臨床豬群表現(xiàn)、生產(chǎn)指標(biāo)數(shù)據(jù)等進(jìn)行綜合判斷。養(yǎng)殖戶應(yīng)根據(jù)自身豬場情況，選擇適合本場的豬圓環(huán)病毒病疫苗，嚴(yán)格執(zhí)行全進(jìn)全出制度，優(yōu)化飼養(yǎng)管理，并嚴(yán)格加強(qiáng)生物安全措施。