石建勇

摘 要 本文簡單介紹了牛結(jié)核病臨床癥狀，針對牛結(jié)核病的檢測展開了深入研究分析，希望可以對牛結(jié)核病有一個清楚的認(rèn)識，合理選擇檢測方法，提高檢測結(jié)果準(zhǔn)確性和有效性，及時發(fā)現(xiàn)病牛，給予針對性處理，最大限度降低對養(yǎng)殖場經(jīng)濟(jì)效益的影響，保證牛肉及相關(guān)制品的安全，維護(hù)公共健康，促進(jìn)整個養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展。

關(guān)鍵詞 牛；結(jié)核病；檢測方法

牛結(jié)核病與牛型結(jié)合分枝桿菌有關(guān)，人獸共患，為慢性傳染性疾病。牛結(jié)核病可影響多類家禽和家畜，其中奶牛發(fā)病率最高，黃牛、牦牛等次之，豬亦可患病，羊發(fā)病率低。人型和禽型結(jié)合分支桿菌對牛的致病力比較差，更多的為局限性病灶，很難通過肉眼觀察。牛結(jié)核病會在器官組織上形成結(jié)核病性肉芽腫，引發(fā)干酪樣壞死。牛結(jié)核病的出現(xiàn)會對整個養(yǎng)殖業(yè)產(chǎn)生很大的重影響，威脅食品安全衛(wèi)生，所以必須要對牛結(jié)核病及其檢測方法有清楚認(rèn)識，合理選擇檢測方法，實(shí)現(xiàn)對牛結(jié)核病的準(zhǔn)確判斷，本文就此展開了研究分析。

1 牛結(jié)核病臨床癥狀

牛結(jié)核病一般有10-45d潛伏期，有些甚至潛伏持續(xù)數(shù)月、數(shù)年。臨床上將牛結(jié)核病可分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩種，一般犢牛多感染原發(fā)性牛結(jié)核病，發(fā)病比較急，如果原發(fā)性牛結(jié)核病尚未痊愈，機(jī)體出現(xiàn)免疫時，則會轉(zhuǎn)變?yōu)槁裕煌挲g段牛均可出現(xiàn)，稱之為牛結(jié)核病，病牛存在慢性器官結(jié)核等表現(xiàn)。牛結(jié)核病存在有亞急性和慢性等表明，發(fā)病進(jìn)程存在一定的差異，少數(shù)牛感染后病情嚴(yán)重，有些牛感染幾年后才會出現(xiàn)相關(guān)癥狀表現(xiàn)，出現(xiàn)增生性肉芽腫、肉芽形成等，隨著牛年齡的增長，逐漸發(fā)生鈣化，出現(xiàn)含有鈣化組織的薄壁膿腫灶，牛頭部和胸部淋巴結(jié)位置容易被病原菌感染，出現(xiàn)膿腫灶。因?yàn)楦腥就緩?、感染劑量和潛伏期等的不同，病灶分布會出現(xiàn)一定的區(qū)別。另外，不同患病器官，在癥狀方面同樣會出現(xiàn)一定的差異。發(fā)病初期，病牛食欲反芻，不存在明顯癥狀表現(xiàn)，易疲勞，尤其在運(yùn)動或者吸入冷空氣等情況下，會出現(xiàn)突然干咳等表現(xiàn)。隨著呼吸次數(shù)的增加，容易引發(fā)氣喘等?；疾∨ｓw型日漸消瘦，產(chǎn)奶量降低，甚至出現(xiàn)乳汁稀薄等問題。病牛繼發(fā)腸結(jié)核時，會出現(xiàn)食欲不振、消化不良等表現(xiàn)。

病牛機(jī)體各個組織均容易受到侵害，其中淋巴結(jié)、肺、腸等損傷最為常見，剖檢部分病牛皮下可能存在膠樣水腫，其病理變化多集中在肺部、淋巴結(jié)和肝臟等部位，其他臟器一般不會有明顯變化。各型結(jié)核病淋巴結(jié)軍容易出現(xiàn)病變，造成淋巴結(jié)腫大等問題，一般不會出現(xiàn)熱痛，病變率高，切面可見灰黃色病變區(qū)等。

臨床上在結(jié)核病牛診斷方面，主要根據(jù)癥狀表現(xiàn)和剖檢等方式檢查，因?yàn)椴∨＜膊《酁槁园l(fā)展，缺乏明顯臨床癥狀，需要用牛結(jié)核病提純結(jié)核菌素變態(tài)反應(yīng)等方式確診。

2 牛結(jié)核病檢測方法

2.1 遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)

這種檢測方法也叫結(jié)核菌素試驗(yàn)，我國在牛結(jié)核病診斷方面推廣提純結(jié)核菌素試驗(yàn)方式進(jìn)行疾病的診斷，主要是使用蒸餾水對牛分枝桿菌提純菌素稀釋，選擇牛頸側(cè)中部1/3位置皮內(nèi)注射，觀察牛皮膚反應(yīng)，如果局部存在明顯炎癥，皮厚差不低于4mm，可判斷為陽性，如果進(jìn)出口牛，皮厚差在2mm以上者，均為陽性；如果局部缺乏明顯反應(yīng)，皮厚差在2.1-3.9mm，為疑似；如果不存在炎性反應(yīng)，皮厚差不足2mm，判斷為陰性。需要注意的是，檢測結(jié)果陽性僅表現(xiàn)該牛在過去曾患有牛結(jié)核病，無法證明當(dāng)前牛結(jié)核病感染是否活動，如果牛感染其他病毒或細(xì)菌，同樣可能會出現(xiàn)有假陽性或者假陰性等表現(xiàn)。

2.2 PCR法

PCR法在牛結(jié)核病檢測方面有著非常高靈敏度和特異性，檢測速度快，在牛結(jié)核病檢測方面有廣泛應(yīng)用。Ritell等利用半套式PCR技術(shù)，在培養(yǎng)物中特異性插入序列IS6110，判斷是否感染牛分枝桿菌。劉思過等建立有特異性檢測PCR方法，靈敏度高達(dá)50pg，樣品陽性符合率在90%，陰性符合率在100%。PCR技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中可能會出現(xiàn)標(biāo)本被污染、假陽性、檢查結(jié)果判斷失誤等問題，還無法作為牛結(jié)核病診斷常規(guī)方法，必須要注意選擇更加規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)操作，使整個試驗(yàn)中各類問題得到有效解決。

2.3 抗酸染色法

采集病料，制作涂片，給予抗酸染色，在顯微鏡下檢查，發(fā)現(xiàn)組織內(nèi)存在抗酸性微生物，同時組織學(xué)病變典型，則可給予初步診斷。這種檢測方法在實(shí)際應(yīng)用中陽性率比較低，存在有假陽性率低、操作簡單等優(yōu)勢，具備有一定的應(yīng)用價值。

2.4 ELISA法

牛結(jié)核病診斷中ELISA法發(fā)揮重要作用，在血清IgG抗體定量測定中可取得非常好應(yīng)用效果。結(jié)核分枝桿菌屬于胞內(nèi)寄生菌，在結(jié)核分枝桿菌免疫方面，先為細(xì)胞免疫，其次為體液免疫，同時這兩者免疫相互分離。遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)主要是檢測細(xì)胞免疫強(qiáng)弱，無法實(shí)現(xiàn)對全部結(jié)核病牛的檢測，在牛結(jié)核病檢測方面存在一定的局限。結(jié)核病牛血清中IgG抗體水平與正常牛差異明顯，一定程度上表明血清抗體檢測在牛結(jié)核病診斷方面有著一定可行，其中IgG抗體血清水平與病牛的病變程度呈現(xiàn)出明顯正相關(guān)，通過血清IgG抗體水平的檢測，在牛結(jié)核病診斷方面可發(fā)揮重要作用。

3 結(jié)束語

目前在牛結(jié)核病診斷方面有較多方法，不同診斷方法存在有各自優(yōu)缺點(diǎn)。在展開牛結(jié)核病普查時，可采取結(jié)核菌素試驗(yàn)和ELISA法，確保整個檢測有足夠高敏感性和特異性。針對牛場的精華，如果病牛ELISA檢測結(jié)果為陽性，需要給予捕殺處理，可不考慮結(jié)核菌素試驗(yàn)結(jié)果是否為陽性。如果病牛ELISA檢測結(jié)果為陰性，結(jié)核菌素試驗(yàn)呈陽性，需要重復(fù)性展開結(jié)核菌素試驗(yàn)，同時與其他檢測方法相結(jié)合，使非特異性因素干擾等得到控制，提高檢測結(jié)果準(zhǔn)確性，避免給養(yǎng)殖場帶來不必要損失。

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