謝全森 李磊 仇晨蕾

摘要：益生菌產品具有抑制有害菌生長、提高水生動物免疫能力、提高水產養(yǎng)殖的產品質量以及調節(jié)水體水質的作用，已在我國沿海地區(qū)以及南方內陸地區(qū)漁業(yè)養(yǎng)殖規(guī)模生產中得到應用，而北方內陸地區(qū)漁業(yè)養(yǎng)殖應用益生菌產品報道很少，特別是經濟性水產品種類（如泥鰍、對蝦、河蟹）繁育期應用不同益生菌產品的調控水質及對水產品生長效果影響的對比數(shù)據(jù)報道并不多。在此背景下，選取河北內陸地區(qū)目前常用的芽孢桿菌、光合細菌、乳酸菌3種不同的益生菌制劑，并設立對照組，以繁育期臺灣泥鰍為試驗對象，進行為期8周的養(yǎng)殖試驗，以探明此期內養(yǎng)殖用水中添加益生菌產品對養(yǎng)殖水質以及泥鰍生長的影響。結果表明：就pH值指標而言，與對照組相比，芽孢桿菌對試驗水體酸堿度的提升幅度不顯著（P>0.05），乳酸菌對試驗水體酸堿度的提升幅度顯著（P<0.05），而光合細菌對試驗水體酸堿度的提升極其顯著（P<0.01）;就溶解氧（DO值）指標而言，投入光合細菌的試驗組溶氧增幅顯著（20.00%，P<0.05），其他2個試驗組溶氧增幅效果不顯著（芽孢桿菌：14.44%，乳酸菌：11.11%，P>0.05）;就NH4+-N指標而言，光合細菌對降解水體的氨氮水平有明顯效果，差異極其顯著（P<0.01），芽孢桿菌、乳酸菌同化氨氮的能力極微，3個試驗組的氨氮濃度變化：芽孢桿菌、乳酸菌分別下降9.49%、11.68%，光合細菌下降32.85%;就NO2--N指標而言，芽孢桿菌、乳酸菌組均能降低水體中的亞硝態(tài)氮水平，分別為12.60%、9.84%;同時就生長效果指標而言，光合細菌對泥鰍的生長也有一定的促進作用，特定生長率達到10.29%，同時存活率最高，高達99.45%。

關鍵詞：北方內陸;益生菌;臺灣泥鰍;水質調控;生長效果

臺灣泥鰍（Taiwan Paramisgurnus dabryanus）屬于高蛋白、低脂肪的低檔水產魚類。臺灣泥鰍作為我國臺灣地區(qū)改良的泥鰍新品種之一，據(jù)報道，在南方養(yǎng)殖3～4個月的當?shù)啬圉q平均體質量約為13 g，而臺灣泥鰍體質量可達90 g以上[1]。由于市場的需求以及捕撈量的增大，導致近年來作為天然資源的泥鰍的數(shù)量急劇下降。因為臺灣泥鰍具有營養(yǎng)豐富、培育時間短、繁殖速度快等特點，同時隨著水產養(yǎng)殖業(yè)的興起和養(yǎng)殖生產模式的調整，泥鰍一直銷路甚好，備受養(yǎng)殖戶的歡迎和消費者的青睞。

隨著泥鰍養(yǎng)殖業(yè)在我國的逐漸壯大發(fā)展，工廠化成規(guī)模的養(yǎng)殖中更是對養(yǎng)殖的水環(huán)境帶來了極大的傷害，造成了泥鰍養(yǎng)殖的危害增加。傳統(tǒng)的抗生素做不到提高泥鰍養(yǎng)殖的品質反而會帶來一系列的安全以及污染問題，但是發(fā)現(xiàn)抗生素做不到的益生菌可以做到，益生菌好處多多，它不僅能夠提升泥鰍的品質，提升泥鰍的水環(huán)境，還能增加養(yǎng)殖泥鰍的消化酶活性，促進其生長發(fā)育。

已有學者證實了沼澤紅假單胞菌、植物乳酸菌、干酪乳桿菌和釀酒酵母等多種益生菌具有改善養(yǎng)殖水體質量的作用[2-3]，其作用機制主要是調節(jié)水體pH值、降低硝酸鹽濃度、降低水中溶解氧濃度等。其他學者研究表明，將不同比例的枯草芽孢桿菌、糞鏈球菌、光合細菌相結合來改善水質發(fā)現(xiàn)，如果結合的菌種和比例不同，對于化學需氧量（COD）、氨氮濃度、亞硝酸鹽、硫化物的作用效果也不同[4]。復合菌的有機結合與單一菌相比，可以通過協(xié)同作用發(fā)揮更好的效果[5-6]。

微生態(tài)制劑對養(yǎng)殖水體的凈化作用關鍵在于其組成的不同有益菌菌株效果，有益菌菌株在酶的作用下可以將亞硝酸鹽、氨氮或者多余的磷酸鹽、硫化物等污染物通過自身生化反應，同化為自身生長所需要的物質，降低污染物在水體中的濃度，最終可以凈化水質[7]。然而，目前益生菌產品較多，效果參差不齊，需要進行綜合評價，提供數(shù)據(jù)給繁育期培養(yǎng)泥鰍具有重要借鑒意義。本研究選取河北邯鄲地區(qū)最具有代表性的3種益生菌產品，分別是芽孢桿菌、光合細菌、乳酸菌，來測定泥鰍繁育期（為期8周）內對水質的改善情況，并且簡要測定其對泥鰍生長及存活率情況，消化道改善指標不進行測定。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

選取目前來說市場上評價很高的來自于不同生產廠家的3種益生菌制劑，分別為芽孢桿菌、乳酸菌、光合細菌。其用量均是按照生產廠家推薦的最佳用量來使用：芽孢桿菌傾瀉后養(yǎng)殖水體含有益菌量不低于1.0×108 CFU/mL;乳酸菌傾瀉后養(yǎng)殖水體含菌量為6.6×107 CFU/mL;光合細菌傾瀉后養(yǎng)殖水體含有益菌量不低于1.5×108 CFU/mL[8]。

1.2 試驗設計

試驗地點：邯鄲市鑫眾生態(tài)養(yǎng)殖有限公司。

試驗設備：圓形的聚乙烯桶，直徑1 m，高1 m。每桶均設有自動的充氧、控制溫度加熱和投喂的裝置，使用加熱棒來維持水溫介于20～25 ℃[9]。期間均按照泥鰍養(yǎng)殖的最佳標準正常投喂泥鰍繁育期的顆粒飼料，按照體質量的6%來進行投喂（具體是每天4次，時間分別是07：00、12：00、17：00 和22：00），投喂過0.5 h后自動移除其殘餌，并計算其干質量，用于計算后續(xù)的攝食量。

設置試驗池3組，標號分別為A1、A2、A3，A1中加入芽孢桿菌制劑;A2中加入乳酸菌制劑;A3中加入光合細菌制劑;對照池1組，標號為B，不投放益生菌，其他條件均一致。每組均設置3個平行重復。試驗前要分別測量各池水體的氨態(tài)氮、亞硝態(tài)氮、溶解氧、pH值。每組放養(yǎng)規(guī)格為200尾剛剛孵化出的泥鰍（0.5 g左右），投喂市售全價顆粒飼料，試驗時間為8周。每周一08：00在每個試驗組中投放益生菌產品，之后，第1周至第4周，每2周的周四08：00采集水樣，第5至第8周時候，每周周四08：00采集水樣，進行檢測，連續(xù)檢測8周（合計采集6次）。樣品的采集、分析方法均參考GB 17378—2007《海洋監(jiān)測規(guī)范》進行。在試驗期間，正常投餌每組試驗組以及對照組，同時，定期補充氧氣，每周更換10%的養(yǎng)殖用水，控制水溫恒定在20～25 ℃。檢測水質指標：酸堿度（pH值）、溶解氧（DO）、氨氮（NH4+-N）、亞硝態(tài)氮（NO2--N）。

在試驗進行到第8周末時，通過稱量泥鰍的質量，再計算泥鰍的特定生長率SGR（%/d），目的是通過測定出泥鰍的生長效果指標，反映出益生菌制劑對繁育期泥鰍的水質調控的影響效果。

1.3 指標檢測

1.3.1 水質指標測定 檢測水質指標為：酸堿度（pH值）、溶解氧（DO）、氨氮（NH4+-N）、亞硝態(tài)氮（NO2--N）。其中溶解氧含量的測定采用哈希便攜式溶氧儀現(xiàn)場測定;酸堿度含量的測定采用哈希便攜式pH計現(xiàn)場測定;氨氮含量的測定采取水楊酸分光光度法測得;亞硝態(tài)氮含量的測定采用重氮偶合比色法測得，氨氮量和亞硝態(tài)氮的含量測定均在企業(yè)實驗室內進行。

1.3.2 生長指標測定 待試驗結束時，將每組泥鰍全部撈出，并稱取質量和計數(shù)，以此來計算特定生長率和存活率。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)用SPSS 19.0軟件來進行單因素方差分析（One-way ANOVA），結果以平均值±標準誤差表示，P<0.05作為差異顯著。

2 結果與分析

2.1 溶解氧

試驗期間，水體溶氧量的水平均在加入益生菌后得到了增加（圖1）。在試驗過程中，投入光合細菌的試驗組溶氧量的增加幅度顯著（20.00%，P<0.05），其他的2個試驗組溶氧量的增加量并不顯著（乳酸菌：5.11%，芽孢桿菌：4.34%，P>0.05）。其中光合細菌試驗組對水體溶氧量的提升作用時間較芽孢桿菌和乳酸菌試驗組的最短。

2.2 酸堿度

從圖2可以看出，在加入了益生菌后酸堿度均發(fā)生了改變。光合細菌以及乳酸菌對試驗水體酸堿度的提升顯著（P<0.05），而芽孢桿菌對試驗水體酸堿度的增加幅度并不顯著（P>0.05）。養(yǎng)殖泥鰍水體最適宜的pH值范圍是7.5～8.8[13]，光合細菌組的pH值是幾組中最適宜的。

2.3 氨氮量

如圖3所示，光合細菌對降解水體氨氮量的水平有明顯的效果，與對照相比差異顯著（P<0.05）。3個試驗組的氨氮濃度變化明顯，芽孢桿菌、乳酸菌、光合細菌分別是下降8.49%、11.68%、32.85%。此外，光合細菌組的作用時間比較短，在第4次監(jiān)測后基本也已經趨向穩(wěn)定。

2.4 亞硝態(tài)氮

從圖4可以看出，光合細菌和乳酸菌對降解亞硝態(tài)氮能力相對芽孢桿菌細菌更好，而芽孢桿菌不能夠降解亞硝態(tài)氮。試驗結束時，光合細菌、乳酸菌分別下降28.60%、14.84%，芽孢桿菌的亞硝態(tài)氮水平升高27.72%。

2.5 生長指標變化

益生菌產品對泥鰍的SGR與存活率影響見表2。結果顯示，芽孢桿菌和光合細菌組的特定生長率和成活率較對照組有所提高，乳酸菌的使用較對照組的特定生長率略微下降。其中光合細菌對泥鰍的SGR和存活率的影響均較高，分別達到99.45%、10.32%，且差異顯著（P<0.05）。

3 討論

3.1 養(yǎng)殖活動對水質的影響

養(yǎng)殖活動對水質的影響不是單一的，也不是一成不變的。多年來，蝦池底質不斷老化，水質越來越容易敗壞，誘發(fā)的蝦病很難控制，嚴重制約了對蝦養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展[10-14]。只有將水質優(yōu)化好，才能提高泥鰍的生長水平，更好地進行泥鰍養(yǎng)殖。已有學者發(fā)現(xiàn)，有機廢物在腐敗降解的過程中將耗損大量的氧氣，使溶氧量下降，同時產生氨、氮和硫化氫等排泄廢物，導致水質敗壞，這無疑增加了水生動物的發(fā)病幾率[15]。養(yǎng)殖活動對水質的影響較為重要，不可忽視，所以在利用益生菌產品調控水質的同時還須控制養(yǎng)殖活動。一些學者首次將微生態(tài)制劑應用于水產養(yǎng)殖，微生態(tài)制劑在水產養(yǎng)殖上的應用按用途可分為2類：一類是促進養(yǎng)殖動物生長和提高機體免疫力的飼料微生態(tài)添加劑，另一類為改善水質的水體微生態(tài)調控劑[13]。同時，水體溫度和生物穩(wěn)定會受到水環(huán)境變化的影響。而向養(yǎng)殖水體中投放益生菌制劑，可以很好地解決這一難題。

3.2 益生菌制劑對水質指標的影響

微生態(tài)制劑產品作為一類新型、綠色和環(huán)保的飼料添加劑，越來越多地被開發(fā)與應用于水產養(yǎng)殖生產中[16]。同時，在國外學者的研究中發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌和乳酸菌可以有效降低水體中的亞硝態(tài)氨，減少疾病發(fā)生[10，17]。此外，國內著名學者也發(fā)現(xiàn)了光合細菌和芽孢桿菌是具有協(xié)同作用的[18]。

以往養(yǎng)殖戶在追求產量的同時，沒有考慮到水生生態(tài)環(huán)境遭到破壞，導致病害逐年增加。益生菌的使用使泥鰍處于最佳生長狀態(tài)，縮短了泥鰍的養(yǎng)殖周期，提高了養(yǎng)殖效率。微生物制劑越來越多地被應用在水產養(yǎng)殖行業(yè)中，被稱為是一代純天然無污染的綠色制劑。益生菌產品在改善水質的同時還要注意在轉換過程中可能會因氧的匱乏而發(fā)生變化。因此，在使用益生菌制劑時要打開增氧機，使水體的供氧力度大大增加，這樣才能更好地發(fā)揮出益生菌制劑的作用。

4 結論

本試驗結果表明，與芽孢桿菌和乳酸菌相比，光合細菌可以更好地抑制并降解有機物，來降低氨氮、亞硝酸鹽等的含量，起到凈化水質的作用，同時還可以提高水體的溶解氧含量，并一定程度上可以提高泥鰍的生長性能，為生產實際的理想產品。

參考文獻：

[1]邱楚雯，王韓信，陳迪虎，等. 臺灣泥鰍人工繁殖及早期發(fā)育的研究[J]. 水產科技情報，2014，41（6）：284-289.

[2]張從義，雷曉中，李金忠，等. 兩種稻田養(yǎng)鰍模式的經濟效益比較[J]. 湖北農業(yè)科學，2016，55（22）：5891-5894.

[3]袁雪梅，姚嘉赟，藺凌云，等. 泥鰍致病性維氏氣單胞菌的分離與鑒定[J]. 浙江農業(yè)學報，2018，30（5）：730-737.

[4]許友卿，張青紅，李穎慧，等. 飼料中添加杜仲葉粉對青魚生長和組織免疫相關基因表達的影響研究[J]. 農業(yè)現(xiàn)代化研究，2015，36（6）：1074-1079.

[5]高丹丹，程 浩，馬忠仁，等. 泥鰍蛋白抗氧化肽的Plastein反應修飾研究[J]. 浙江農業(yè)學報，2018，30（8）：1312-1320.

[6]李君華，劉佳亮，曹學彬，等. 芽孢桿菌與光合細菌協(xié)同作用對養(yǎng)殖刺參的影響[J]. 漁業(yè)現(xiàn)代化，2013，40（1）：7-12.

[7]劉敏佳，傅一鳴，尚偉偉. 一種環(huán)保型泥鰍飼料養(yǎng)殖效果初探[J]. 湖北農業(yè)科學，2018，57（2）：92-94，102.

[8]蓋建軍，矯新明，陳煥根. 4種微生態(tài)制劑對養(yǎng)殖水質的影響[J]. 現(xiàn)代農業(yè)科技，2013，8（10）：255-256.

[9]王篤彩，閆斌倫，李士虎. 3種微生態(tài)制劑對養(yǎng)殖水體水質影響的比較研究[J]. 水生態(tài)學雜志，2011，32（1）：66-70.

[10]Wahyu A，Widanarni，Anja M. Effect of probiotic Bacillus

megaterium PTB 1.4 on the population of intestinal microflora，digestive enzyme activity and the growth of catfish（Clarias sp.）[J]. HAYATI Journal of Biosciences，2016，23（4）：168-172.

[11]夏曉華，霍蔚然，李墨溢，等. 乙氧氟草醚對泥鰍的毒性研究[J]. 湖北農業(yè)科學，2017，56（8）：1522-1525.

[12]劉翠艷，陳四玉，孫桃桃，等. 馬齒莧-益生菌聯(lián)用對熱毒證小鼠腹瀉的預防效果[J]. 浙江農業(yè)學報，2018，30（2）：211-219.

[13]淦 勝. 淺談光合細菌在水產養(yǎng)殖上的應用[J]. 漁業(yè)致富指南，2011（11）：33-34.

[14]劉愛君，尹 望. 微生態(tài)制劑對魚塘養(yǎng)殖水體的影響[J]. 飼料研究，2014（13）：27-51.

[15]黃翔峰，王 坤，陳國鑫，等. 水生動植物組合對水產養(yǎng)殖廢水的凈化能力[J]. 水處理技術，2015，41（2）：62-66.

[16]陳 謙，張新雄，趙 海，等. 用于水產養(yǎng)殖的微生態(tài)制劑的研究和應用進展[J]. 應用與環(huán)境生物學報，2012，18（3）：524-530.

[17]Wang Y B，Xu Z R，Xia M S. The effectiveness of commercial probiotics in northern white shrimp Pcnaeus vannamei ponds[J]. Fisheries Science，2005，71（5）：1036-1041.

[18]周丹丹，李延云，聶宇燕，等. 光合細菌與芽孢桿菌對淡水養(yǎng)殖水體修復實驗研究[J]. 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2011，13（4）：40-42. 吳井生，陳永霞. 稀釋液配方和稀釋倍數(shù)對豬精子活力及運動參數(shù)的影響[J]. 江蘇農業(yè)科學，2019，47（6）：155-158.