李 麗, 張 羽, 李紅梅

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院 產(chǎn)科, 陜西 延安, 716000)

稽留流產(chǎn)(MA)是指胚胎或胎兒雖然已經(jīng)在子宮內(nèi)死亡，但沒有自動(dòng)從機(jī)體內(nèi)排出的自然流產(chǎn)形式，目前發(fā)生率有較為明顯的增高趨勢(shì)[1]。MA發(fā)病復(fù)雜，目前仍有50%病因無法明確[2], 而免疫因素成為近幾年的研究熱點(diǎn)。輔助性T細(xì)胞(Th)17/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)模式在母胎界面的免疫調(diào)節(jié)影響著妊娠結(jié)局[3], 其中白介素-17(IL-17)是Th17細(xì)胞分泌的具有促炎作用的炎癥因子，白介素-35(IL-35)是Treg細(xì)胞分泌的具有抑炎作用的抑炎因子，二者在母胎界面的動(dòng)態(tài)平衡對(duì)妊娠起著決定性作用[4]。本研究通過檢測(cè)母體外周血血清IL-17及IL-35的表達(dá)水平來分析其對(duì)MA的影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年3—9月在本院就診的30例MA患者設(shè)為病例組，納入標(biāo)準(zhǔn): 停經(jīng)7～12周，既往月經(jīng)規(guī)律，經(jīng)血清人絨毛膜促性腺激素(HCG)及B超動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)診斷為MA患者; 無感染、內(nèi)分泌異常、生殖系統(tǒng)畸形、染色體異常等。另選取同期30例正常早孕要求終止妊娠患者設(shè)為對(duì)照組，納入標(biāo)準(zhǔn): 停經(jīng)7～12周，既往月經(jīng)規(guī)律，B超可見胎心，本次妊娠無感染、保胎、先兆流產(chǎn)史; 患者同意。排除標(biāo)準(zhǔn): 有其他內(nèi)外科疾病合并癥史、不良嗜好史。2組患者年齡、孕周及孕次比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核并通過。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑: HBS酶標(biāo)儀和HBS-4009全自動(dòng)洗板機(jī)購買自華泰和合商貿(mào)有限公司, HT-400B電熱恒溫培養(yǎng)箱購買自上海赫田科學(xué)儀器有限公司, TGL-168 離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠), XW-80A 旋渦離合器(上海青浦滬西儀器廠), DHG-9023A 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司), 0.1～50.0 mL分液器(TOMOS LIFE SCIENCE Group), 人IL-17和IL-35酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒均購買自上海撫生實(shí)業(yè)有限公司。

1.2.2 標(biāo)本的采集與處理: 2組患者均在行人工流產(chǎn)術(shù)前采集肘前靜脈血5 mL, 以3 500 轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速離心15 min后取上層血清，采用ELISA方法檢測(cè)血清中IL-17、IL-35濃度，具體實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作。

1.3 結(jié)果計(jì)算與判斷

采用酶標(biāo)儀測(cè)出標(biāo)準(zhǔn)品各濃度在450 nm處的光密度(OD)值。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品OD值為縱坐標(biāo)做出標(biāo)準(zhǔn)曲線。將所有樣品OD值根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出樣品血清中IL-17及IL-35的濃度值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 血清中IL-17及IL-35濃度水平變化

觀察組血清IL-17濃度顯著高于對(duì)照組(P<0.05), IL-35濃度顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者血清IL-17、IL-35濃度比較 pg/mL

IL-17: 白細(xì)胞介素-17; IL-35: 白細(xì)胞介素-35。

與對(duì)照組比較, *P<0.05。

2.2 血清及胚胎絨毛組織中IL-17及IL-35表達(dá)的相關(guān)性分析

2組患者的血清及胚胎絨毛組織中IL-17及IL-35的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.756,P<0.05)。

3 討 論

表達(dá)父系Ⅰ類抗原的滋養(yǎng)層被認(rèn)為類似于半同種異體移植物，可被母體CD4+T細(xì)胞所排斥，因此，妊娠的過程會(huì)激發(fā)母體一系列的免疫反應(yīng)[5], 而母體能否對(duì)其產(chǎn)生免疫耐受對(duì)于胚胎的植入及維持至關(guān)重要[6]。一次成功的妊娠取決于母胎界面免疫因子的動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)胚胎植入時(shí)，母體內(nèi)促炎因子會(huì)及時(shí)減少，免疫調(diào)節(jié)會(huì)轉(zhuǎn)向免疫耐受，從而抑制機(jī)體對(duì)胚胎的排斥反應(yīng)[7]。在這一系列適應(yīng)性免疫應(yīng)答過程中，Th細(xì)胞和Treg細(xì)胞發(fā)揮了重要作用[8]。

與Th1及Th2不同, Th17細(xì)胞形成了CD4+T淋巴細(xì)胞的新子集，介導(dǎo)外來組織的炎癥反應(yīng)、自身免疫疾病及同種異體移植物的排斥反應(yīng)。而這些細(xì)胞與Treg細(xì)胞密切相關(guān), Treg細(xì)胞是抑制機(jī)體自身免疫炎癥反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)因素，特別是在外周血及外周組織[9]。研究[10]表明，妊娠失敗與體內(nèi)Treg細(xì)胞數(shù)量的減少有關(guān)，且在不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者體內(nèi)也觀察到了Th17/Treg細(xì)胞的免疫失衡。此外，還有學(xué)者[11]認(rèn)為，促進(jìn)同種異體移植物排斥的Th17型細(xì)胞相關(guān)因子可能會(huì)導(dǎo)致妊娠的不良結(jié)局，而促進(jìn)母體對(duì)胎兒免疫耐受的Treg細(xì)胞相關(guān)因子可能會(huì)改善妊娠結(jié)局。

IL-17為Th17細(xì)胞分泌的促炎因子，在復(fù)雜的免疫炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。IL-17分為6種類型，即IL-17 A～F, 其DNA序列具有同源性，屬于同一個(gè)家族[12]。IL-17A是家族中最早發(fā)現(xiàn)的炎性因子，當(dāng)機(jī)體受到內(nèi)源性、外源性、病毒、真菌及寄生蟲等感染時(shí), IL-17A會(huì)及時(shí)介導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，從而保護(hù)機(jī)體免受病原體入侵。但當(dāng)這種炎癥反應(yīng)過度激活時(shí)，便會(huì)對(duì)自身組織進(jìn)行攻擊從而發(fā)生自身免疫性疾病。同理，當(dāng)胚胎這種半同種異體移植物植入母體時(shí)，若機(jī)體對(duì)其產(chǎn)生過度排斥，將會(huì)導(dǎo)致不良的妊娠結(jié)局，甚至發(fā)生流產(chǎn)。Qian等[3]研究認(rèn)為，對(duì)于習(xí)慣性流產(chǎn)、子癇前期、先兆流產(chǎn)等病理性妊娠患者來說，其血清中IL-17水平明顯較高，提示IL-17水平升高與患者妊娠失敗具有一定相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示, MA患者體內(nèi)IL-17含量較正常妊娠患者明顯增多，與Qian等研究結(jié)果一致。

在Th17/Treg免疫調(diào)節(jié)的模式中, Treg細(xì)胞可以產(chǎn)生抑制性炎癥因子IL-35。IL-35是2007年被命名的一種新型免疫抑制因子，屬于IL-12家族，由α和β鏈的異源二聚體組成，受體為IL-12Rβ2和gp130[13]。IL-35主要由Treg細(xì)胞分泌，并且對(duì)Treg細(xì)胞介導(dǎo)的體內(nèi)、外免疫抑制調(diào)節(jié)有著必不可少的作用。越來越多的研究表明，IL-35在自身免疫性疾病和傳染病中擔(dān)任重要角色。有研究[14]表明，IL-35可有效減輕同種異體移植物的排斥反應(yīng)，并且在免疫性、感染性等類型的疾病發(fā)生、發(fā)展過程中，可能發(fā)揮較為獨(dú)特的作用。而在母胎界面中，IL-35可以調(diào)節(jié)免疫抑制作用，減少機(jī)體對(duì)胚胎的攻擊，從而確保妊娠順利進(jìn)行。Ozkan等[4]報(bào)道稱，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者體內(nèi)IL-35的表達(dá)水平明顯較正常妊娠患者低，與本研究結(jié)論一致。

因機(jī)體對(duì)外來物的識(shí)別作用產(chǎn)生一系列的適應(yīng)性免疫應(yīng)答，當(dāng)免疫炎癥反應(yīng)大于免疫抑制反應(yīng)時(shí)，機(jī)體將出現(xiàn)排斥作用。但正常的妊娠過程并沒有因?yàn)槊庖吲懦庾饔枚鴮?dǎo)致妊娠失敗，而是通過免疫反應(yīng)的“重新調(diào)整”，激活了免疫抑制作用而保護(hù)胚胎順利生長(zhǎng)，這就是免疫調(diào)節(jié)的動(dòng)態(tài)平衡。因此，本研究通過檢測(cè)外周血中Th17/Treg細(xì)胞的特異性相關(guān)因子的含量，間接反映兩者的免疫調(diào)節(jié)作用對(duì)妊娠的影響。只有當(dāng)IL-17/IL-35達(dá)到免疫平衡，即促炎反應(yīng)與抑炎反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)，才能確保妊娠物不被母體所排斥，最終使胚胎順利生長(zhǎng)。本研究對(duì)稽留流產(chǎn)患者血清中IL-17、IL-35的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，提示Th17/Treg在不良妊娠結(jié)局中可能發(fā)揮較為關(guān)鍵的作用。本研究結(jié)果也顯示, IL-17升高及IL-35降低與不良妊娠有關(guān)，并且二者間的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)。

本研究可為診斷MA提供輔助性參考指標(biāo)，為提早預(yù)測(cè)MA提供一定的理論依據(jù)，進(jìn)而預(yù)防可能發(fā)生的不良妊娠結(jié)局?；诩?xì)胞的治療已成為減輕移植后排斥反應(yīng)的新方法，為加強(qiáng)母嬰安全提供了一定理論依據(jù)。