范培培，閆靜宇，古愛菊，劉冰冰，盧揚揚，付麗娜

(黃河科技學院 醫(yī)學院，河南 鄭州 450063)

香菇又名花菇，是藥食兩用的真菌。香菇多糖是香菇中主要活性成分，具有調(diào)節(jié)免疫力、降血糖、抗腫瘤、抗氧化等功能，廣泛應(yīng)用于食品和生物醫(yī)藥方面[1-2]。隨著研究的深入，香菇多糖的提取技術(shù)也日益成熟。超聲波輔助提取多糖的方法被廣泛使用，其產(chǎn)生的振動可加速細胞內(nèi)多糖的釋放、溶解，使多糖更快的進入溶劑，顯著縮短提取時間。寶天曼香菇來自伏牛山大自然的饋贈，獨特的地理氣候孕育了獨特的香菇，研究以寶天曼香菇為原料，使用超聲波輔助方法提取香菇多糖，固定料液比、超聲功率、溫度，考察超聲時間對多糖提取率的影響，并探索其體外抗氧化活性，為香菇多糖的深度開發(fā)利用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

香菇：采購于南陽內(nèi)鄉(xiāng)寶天曼。葡萄糖(GR)：上海阿拉丁試劑網(wǎng)；苯酚：洛陽昊華化學試劑有限公司；濃H2SO4、冰醋酸：洛陽市化學試劑廠；無水乙醇：天津市科密歐化學試劑有限公司；以上試劑均為分析純；三吡啶三吖嗪：購于阿拉丁試劑網(wǎng)；FeSO4、無水乙醇：天津市科密歐化學試劑有限公司；以上試劑均為分析純；5%苯酚溶液：自制。

1.2 儀器

TU-1810紫外-可見分光光度計：北京普析通用儀器有限公司；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；FA1004型電子天平：上海良平儀器儀表有限公司；XFB-200型粉碎機：吉首市中誠制藥機械廠；3號藥典篩、5號藥典篩：浙江上虞市五四儀器篩具廠；SHZ-D(Ш)循環(huán)水式多用真空泵：邦西儀器科技(上海)有限公司；遠紅外鼓風干燥箱：天津市華北實驗儀器有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 香菇的預處理

將南陽寶天曼干香菇洗凈、晾干，于50℃烘箱中干燥6 h，經(jīng)粉碎機粉碎得粉末，之后過3號和5號藥典篩、裝瓶密封保存。

1.3.2 葡萄糖標準曲線的繪制[3]

圖1 葡萄糖標準曲線Fig.1 Standard curve of glucose

準確稱量1.0000 g干燥至恒重的葡萄糖標準品于100 mL容量瓶，定容，得10 mg/mL葡萄糖溶液。精密移取1.0 mL葡萄糖溶液于100 mL容量瓶中，定容，搖勻，得0.1 mg/mL的葡萄糖標準溶液。分別精密移取葡萄糖標準溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL于50 mL容量瓶中，加1.0 mL5%苯酚溶液、5.0 mL濃硫酸，搖勻，靜置，于紫外分光光度計490 nm處測定吸光度A。以葡萄糖標準溶液濃度C(mg/mL)為橫坐標x，吸光度A為縱坐標y繪制標準曲線(圖1)。線性回歸方程為：y=0.9107x-0.1847，R2=0.9989，由圖可看出在標準溶液濃度0.2 ～1.2 mg/mL范圍內(nèi)，呈線性相關(guān)。

1.3.3 超聲時間對香菇多糖提取率影響的測定

固定料液比為1：40、超聲溫度50℃、超聲功率為200 W。各稱取1.00 g香菇粉末于5個錐形瓶中，加40 mL蒸餾水，置數(shù)控超聲波清洗器中，分別將超聲時間定為10，20，30，40，50 min。超聲后冷卻至室溫，抽濾，置于蒸發(fā)皿中濃縮，將濃縮液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶，定容。用移液管各移取2.0 mL于5個100 mL容量瓶中定容。之后各移取4.0 mL溶液于50 mL容量瓶中，分別加入5%苯酚溶液2.0 mL和濃硫酸10.0 mL，搖勻，靜置，冷卻至室溫[4]。于紫外分光光度計490 nm處測定吸光度值A(chǔ)，代入葡萄糖標準曲線公式進而計算香菇多糖提取率。

1.3.4 香菇多糖提取率的測定

香菇多糖提取率的計算公式為：香菇多糖提取率/%=(C×V×N /m)×100%；C為由標準曲線求得的多糖質(zhì)量濃度，mg/mL；N為稀釋倍數(shù)；V為稀釋后總體積，mL；m為香菇粉末質(zhì)量，g。

1.3.5 體外抗氧化能力測定

抗氧化活性測定主要是基于“Fe3+-三吡啶三吖嗪(TPTZ)螯合物在酸性條件被還原為藍色的螯合物Fe2+-TPTZ(593 nm處有最大吸收)”，通過檢測藍色產(chǎn)物的生成量而測定香菇多糖的抗氧化能力[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 超聲時間對香菇多糖提取率的影響

固定料液比為1∶40、超聲溫度50℃、超聲功率為200 W，測定不同超聲時間對香菇多糖提取率的影響，該項目進行平行試驗3次，求其平均值。

圖2 超聲時間對香菇中多糖得率的影響Fig.2 Effect of ultrasonic time on the extraction yield of polysaccharides from lentinan

由圖2可知，隨著超聲時間增加，溶劑分子的擴散速度也加快，多糖的溶出增多，香菇多糖成分會逐漸擴散，在超聲時間為40 min時香菇多糖的提取率最高，之后出現(xiàn)降低的趨勢，同時也說明隨著超聲時間的延長，多糖結(jié)構(gòu)可能會遭到破壞，雜質(zhì)溶出也相應(yīng)增加，導致香菇多糖的提取率下降[6]。因此，將寶天曼香菇多糖的最佳超聲時間確定為40 min。

2.2 抗氧化活性試驗

2.2.1 繪制FeSO4標準曲線

準確稱取111.2 mg的FeSO4溶于水，加濃硫酸0.25 mL定容至50 mL，置入小鐵釘。取5 mL上述溶液于50 mL容量瓶中，定容，制備0.8 mmol/LFeSO4標準溶液。預先加5 mL水于小試管，取5 mL FeSO4標準溶液加入試管，得0.4 mmol/L標準溶液，按此方法依次制備0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mmol/L的FeSO4標準溶液。依次取上述溶液0.2 mL，加1.8 mL FRAP工作液，在37℃條件下于紫外分光光度計中測定593 nm處吸光度，繪制FeSO4標準曲線。由圖3顯示，F(xiàn)eSO4的濃度與吸光度A呈線性相關(guān)，線性回歸方程為：y=0.9731x+0.2314，R2=0.9993。

圖3 FeSO4標準曲線Fig.3 The standard curve of FeSO4

2.2.2 抗氧化活性測定

移取香菇多糖粗提液稀釋至不同濃度，加6 mLFRAP，加入600 μL超純水，置于37℃水浴鍋中放置10 min，于紫外分光光度計中測定593 nm處吸光度[7]。

圖4 抗氧化活性測試曲線Fig.4 Antioxidant capacity measurement curve

將測得的吸光度A代入FeSO4標準曲線換算為FeSO4當量濃度，由圖4可知，線性相關(guān)方程為y=0.1243x-0.2856，R2=0.9987，香菇多糖的抗氧化活性隨質(zhì)量濃度的增加呈線性增強，擬合度良好。

3 結(jié)論

研究以寶天曼香菇為原料，以香菇多糖提取率為指標，采用超聲波輔助提取方法探索超聲時間對多糖提取率的影響及

其體外抗氧化活性。結(jié)果顯示，在固定料液比1∶50(g/mL)、超聲功率300 W、提取溫度50℃時，超聲波輔助提取寶天曼香菇多糖的最佳超聲時間為40 min，提取率高達11.92%，且香菇多糖的抗氧化能力與濃度呈線性相關(guān)，并逐漸增強。結(jié)果表明南陽寶天曼香菇味道鮮美、多糖含量高、體外抗氧化能力強，為香菇多糖的進一步開發(fā)利用提供參考。