張?zhí)咸希悇俨?，張華琦，王清峰，楊林花，陸小蘿，盧盛勇

（1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽(yáng)550025；2.銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜禽健康養(yǎng)殖中心，貴州銅仁554300）

為防治肉雞疾病和提高經(jīng)濟(jì)效益，在肉雞的養(yǎng)殖中普遍使用抗生素等人工合成類(lèi)藥物做飼料添加劑，雖然有防治效果，但也產(chǎn)生了藥物殘留、環(huán)境污染等問(wèn)題。因此，尋找安全、綠色的飼料添加劑刻不容緩（廖玉英等，2010；郭愛(ài)偉等，2009）。中草藥具有毒副作用小、無(wú)藥殘與不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn)，其含有豐富的營(yíng)養(yǎng)與生物活性物質(zhì)，能夠提高動(dòng)物機(jī)體免疫和生長(zhǎng)性能，是抗生素的理想替代品（盧福山等，2011）。青蒿是我國(guó)常見(jiàn)中草藥，具有解暑、祛風(fēng)、止癢等功效。有研究表明，青蒿作為飼料添加劑應(yīng)用于畜禽的實(shí)際生產(chǎn)中，能夠提高畜禽的生產(chǎn)性能、免疫性能以及改善畜禽的產(chǎn)品品質(zhì)（宋志華等，2016；周全民等，2015；馬飛等，2011）。目前，關(guān)于青蒿應(yīng)用于肉雞實(shí)際生產(chǎn)的報(bào)道相對(duì)較少。本試驗(yàn)以青蒿及其中草藥復(fù)方作為飼料添加劑，研究其對(duì)散養(yǎng)肉雞免疫及抗病性能的影響，確定青蒿作為飼料添加劑的最佳添加方式，為其應(yīng)用于肉雞的實(shí)際生產(chǎn)提供理論依據(jù)與實(shí)踐參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)所用中草藥購(gòu)于貴陽(yáng)市太升中藥批發(fā)市場(chǎng)，藥材經(jīng)65℃烘干，粉碎后80目過(guò)篩備用。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選用體況健康、初始體重基本一致[（580±18.34）g]的30日齡脫溫肉雞360只，采用多因素單水平的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將試雞隨機(jī)分為4個(gè)組，每個(gè)組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只，進(jìn)行60 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)，試驗(yàn)1組飼喂基礎(chǔ)日糧（表1），試驗(yàn)2、3、4組分別在基礎(chǔ)日糧中添加1%的青蒿、1%的青蒿復(fù)合添加劑Ⅰ（青蒿、板藍(lán)根、魚(yú)腥草、陳皮等）及1%的青蒿復(fù)合添加劑Ⅱ（青蒿、黃芪、天麻、金銀花等），具體見(jiàn)表2。

1.3 飼養(yǎng)管理 采用圍欄分區(qū)散養(yǎng)，每天喂料2次（早晚各1次），試雞自由采食、飲水。試驗(yàn)期間，按照常規(guī)飼養(yǎng)管理，定期清掃圈舍，消毒。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

表2 試驗(yàn)分組情況

1.4 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.4.1 腹瀉率、發(fā)病率及死亡率 于正式期每天觀察3次（早、中、晚）雞群狀態(tài)，詳細(xì)記錄雞群腹瀉、發(fā)病、死亡等情況。

1.4.2 免疫器官指數(shù) 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)重復(fù)選取3只試雞，取免疫器官胸腺、脾臟以及法氏囊等稱(chēng)重。

1.4.3 血清免疫及抗氧化指標(biāo) 試驗(yàn)結(jié)束后每個(gè)重復(fù)選取3只試雞進(jìn)行翅靜脈采血5 mL，離心分離出血清，分裝于離心管中-20℃條件保存，用于血清免疫及抗氧化指標(biāo)的測(cè)定。所用試劑盒均購(gòu)自南京建成生物技術(shù)有限公司，操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的步驟進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)處理 本試驗(yàn)全部數(shù)據(jù)都采用Excel 2013進(jìn)行初步整理分析，應(yīng)用SAS 9.3軟件中Proc GLM過(guò)程進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。平均值的多重比較采用Duncan’s法進(jìn)行，差異顯著性水平為P＜0.05。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 青蒿及其復(fù)合中草藥添加劑對(duì)肉雞抗病性能的影響 由表3可知，青蒿及其復(fù)合中草藥添加劑都能夠顯著降低散養(yǎng)肉雞的腹瀉率和死亡率（P＜0.05）。試驗(yàn)2組的腹瀉率和死亡率最低，較試驗(yàn)1組分別降低了68.31%和85.73%（P＜0.05）。試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組的發(fā)病率較試驗(yàn)1組分別降低了42.44%與57.56%（P＜0.05），其中試驗(yàn)3組的發(fā)病率最低。

表3 青蒿及其復(fù)合中草藥添加劑對(duì)肉雞抗病性能的影響%

表4 青蒿及其復(fù)合中草藥添加劑對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響g/kg

2.2 青蒿及其復(fù)合中草藥添加劑對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響 由表4可知，試驗(yàn)2組胸腺指數(shù)最高，與試驗(yàn)1組相比提高了57.29%（P＜0.05）；脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)3個(gè)中草藥添加組與對(duì)照組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05），但都高于試驗(yàn)1組。

2.3 青蒿及其復(fù)合中草藥添加劑對(duì)肉雞血清免疫指標(biāo)的影響 由表5可知，青蒿及其復(fù)合中草藥添加劑能不同程度提高血清中免疫球蛋白和補(bǔ)體C3、C4的含量。其中3個(gè)中草藥組IgM的含量較試驗(yàn)1組分別提高了93.44%、126.23%和106.56%（P＜0.05），IgM含量以試驗(yàn)3組最高，3個(gè)中草藥組之間差異均不顯著（P＞0.05）。IgG含量和IgA含量各組之間差異不顯著（P＞0.05）。對(duì)于補(bǔ)體C3含量，3個(gè)中草藥組都顯著高于對(duì)照組，分別提高了30.82%、41.01%和27.87%（P＜0.05），其中以試驗(yàn)3組含量最高，試驗(yàn)2組和4組與其差異不顯著（P＞0.05）。各組之間補(bǔ)體C4的含量差異不顯著（P＞0.05），但都有所提高。

表5 青蒿及其復(fù)合中草藥添加劑對(duì)肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

2.4 青蒿及其復(fù)合中草藥添加劑對(duì)肉雞血清抗氧化指標(biāo)的影響 由表6可知，試驗(yàn)3組超氧化物歧化酶（SOD）含量最高[（223.48±15.82）U/mL）]，與試驗(yàn)1組相比提高了17.84%，且差異顯著（P＜0.05），3個(gè)中草藥添加組之間差異不顯著（P＞0.05）。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）含量和丙二醛（MDA）含量各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

表6 青蒿及其復(fù)合中草藥添加劑對(duì)肉雞抗氧化指標(biāo)的影響 U/mL

3 討論

3.1 青蒿及其復(fù)方中草藥添加劑對(duì)肉雞抗病性能的影響 研究表明，中草藥作為飼料添加劑具有藥物與營(yíng)養(yǎng)雙重作用，不僅能提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能，還能防治疾病，增強(qiáng)動(dòng)物的抗病性能（鮑宇紅等，2016）。有關(guān)青蒿在肉雞抗病性能方面的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。相關(guān)研究表明，飼用青蒿復(fù)合制劑與小鼠免疫力與抗病性能的增強(qiáng)呈正相關(guān)。在小鼠超敏反應(yīng)和T細(xì)胞介導(dǎo)的皮膚炎癥反應(yīng)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，局部給予小鼠青蒿素可有效抑制超敏反應(yīng)和ConA驅(qū)動(dòng)的T細(xì)胞增殖；誘導(dǎo)調(diào)節(jié)T細(xì)胞的產(chǎn)生，達(dá)到對(duì)相關(guān)疾病的治療作用（Li等，2012）。馮文宇（2006）將由中草藥青蒿和金銀花組成的青銀注射液注射進(jìn)感染病原菌的小鼠體內(nèi)，研究發(fā)現(xiàn)青銀注射液能夠有效抑制或滅殺小鼠體內(nèi)的致病菌，并能提高小鼠的存活率以及增強(qiáng)其抗病性。金銀花中主要活性成分如綠原酸、黃酮類(lèi)等能夠提高機(jī)體免疫力、抗病性能且具有抑菌、抗病毒的功效，而青蒿因其有效成分如黃酮類(lèi)、香豆素類(lèi)和揮發(fā)油類(lèi)等同樣具有抑菌、抗病毒和免疫調(diào)節(jié)的作用（汪曉河等，2018；王申，2015）。因此，兩者組合而成的青銀注射液對(duì)小鼠的健康機(jī)能有促進(jìn)作用?？导t軍（2009）研究表明，在斷奶仔豬的飼糧中分別添加四種青蒿提取物（RY16、RY17、RY18、RY19），與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組RY16、RY17、RY18、RY19的總發(fā)病率分別降低了27.2%、21.8%、19.8%、6.3%，且RY16、RY17的腹瀉率顯著降低（P＜0.05），表明青蒿提取物具有提高仔豬抗病性能的功效。賈玉剛（2018）通過(guò)在藏雞的基礎(chǔ)日糧中分別添加由黃芪、黨參、當(dāng)歸、甘草等配伍而成的中草藥制劑，發(fā)現(xiàn)該復(fù)方中草藥制劑能提高試雞的存活率，增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能，接近或達(dá)到抗生素的飼用效果，有良好的替抗前景。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在試雞日糧中添加青蒿及其復(fù)方中草藥制劑均能顯著降低試雞的腹瀉率和死亡率，其中試驗(yàn)2組的抗病效果最好，說(shuō)明青蒿及其復(fù)方中草藥制劑具有提高散養(yǎng)肉雞抗病性能，降低其死亡率的功效，這與上述的研究結(jié)果較為一致。

3.2 青蒿及其復(fù)方中草藥添加劑對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響 胸腺、脾臟和法氏囊作為家禽的免疫器官在發(fā)揮免疫相關(guān)功能中有著極其重要的作用，免疫器官指數(shù)是衡量肉雞免疫性能的重要指標(biāo)（燕磊等，2017）。其重量可反映肉雞的免疫狀況（呂景旭等，1998）。Rivas（1988）認(rèn)為，雞的免疫性能與其免疫器官重量成正相關(guān)關(guān)系，免疫器官會(huì)因其自身重量的增加而功能增強(qiáng)。青蒿等中草藥中含有很多的免疫活性成分，如有機(jī)酸、生物堿、多糖及苷類(lèi)等，這些活性成分能夠刺激動(dòng)物的免疫系統(tǒng)并使其活化，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。代飛燕（2004）通過(guò)白術(shù)、干姜、天花粉等配伍而成的復(fù)方中草藥制劑添加在試雞的基礎(chǔ)日糧中進(jìn)行為期42 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)，研究發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，復(fù)方中草藥組試雞的免疫器官指數(shù)顯著提高（P＜0.05）。帥學(xué)宏（2015）為觀察青蒿多糖對(duì)免疫抑制小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用，用環(huán)磷酰胺（Cy）作用于小鼠建立免疫抑制模型，并將4個(gè)不同劑量的青蒿多糖對(duì)模型小鼠進(jìn)行腹腔注射，7 d后測(cè)定其免疫器官指數(shù)，并對(duì)其胸腺、脾臟進(jìn)行組織學(xué)觀察，研究發(fā)現(xiàn)青蒿多糖可提升免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)，且組織學(xué)觀察顯示青蒿多糖對(duì)Cy引起的脾臟和胸腺的結(jié)構(gòu)損傷具有一定修復(fù)作用，表明青蒿多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用。本試驗(yàn)在日糧中添加青蒿及其復(fù)方中草藥飼喂肉雞，結(jié)果表明肉雞的免疫器官指數(shù)均有不同程度的提高，其中試驗(yàn)2組與試驗(yàn)1組的胸腺指數(shù)相比差異顯著（P＜0.05），說(shuō)明青蒿及其復(fù)方中草藥制劑對(duì)肉雞的免疫器官指數(shù)有促進(jìn)作用，這與前人的研究結(jié)果一致，其中試驗(yàn)2組（青蒿組）的綜合效果最好。本試驗(yàn)中試驗(yàn)3、4組（青蒿復(fù)合I組、青蒿復(fù)合II組）相比于試驗(yàn)1組，肉雞的免疫器官指數(shù)有所提高，但差異不顯著（P＞0.05）。馬飛（2011）研究表明，青蒿復(fù)合中草藥制劑能顯著提高試雞的免疫器官指數(shù)（P＜0.05），這與本試驗(yàn)中兩個(gè)青蒿復(fù)合中草藥組的研究結(jié)果并不一致，其原因可能與青蒿的配方、添加劑量以及試驗(yàn)動(dòng)物所處的生長(zhǎng)階段不同有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。

3.3 青蒿及其復(fù)合中草藥添加劑對(duì)肉雞血清免疫和抗氧化指標(biāo)的影響 血清中免疫與抗氧化指標(biāo)能直接反映機(jī)體的健康狀況。血清中的免疫球蛋白主要有IgG、IgM、IgA等，免疫球蛋白在畜禽機(jī)體的體液免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著極其重要的作用，其含量的高低能反映機(jī)體免疫力的強(qiáng)弱（劉輝等，2015）。補(bǔ)體是體液免疫中一些必須經(jīng)過(guò)活化才能產(chǎn)生生物活性的蛋白質(zhì)，能參與機(jī)體的免疫反應(yīng)。C3和C4作為補(bǔ)體系統(tǒng)的重要組成部分，在動(dòng)物機(jī)體免疫和維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中發(fā)揮著重要作用。Guo（2004）研究發(fā)現(xiàn)，中草藥提取物能夠改善和修復(fù)肉雞的免疫功能，并能刺激試雞使其體液免疫的活力增強(qiáng)。相關(guān)研究表明，青蒿口服液能夠提高小鼠體液免疫與細(xì)胞免疫功能。林盛裕（2017）通過(guò)將松針、仙人掌、辣蓼等配伍而成的復(fù)方中草藥提取物添加到廣西麻雞的基礎(chǔ)日糧中，進(jìn)行為期120 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)，研究發(fā)現(xiàn)較對(duì)照組，中草藥提取組試雞血清中IgG、IgA、IgM、補(bǔ)體C3和C4的含量顯著提高（P＜0.05），表明中草藥提取物能顯著改善試雞的血清免疫指標(biāo)，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。馬紹偉（2016）通過(guò)在河田雞的基礎(chǔ)日糧中添加復(fù)方中草藥超微粉，進(jìn)行為期105 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)，并分別于28、56、105 d采血進(jìn)行血清免疫指標(biāo)的測(cè)定，結(jié)果顯示，復(fù)方中草藥超微粉能顯著提高試驗(yàn)28 d時(shí)試雞血清中補(bǔ)體C4和IgM含量（P＜0.05），顯著提高56 d和105 d試雞IgG的含量，表明該中草藥超微粉能提高河田雞的免疫機(jī)能。本試驗(yàn)結(jié)果表明，青蒿及其復(fù)合中草藥添加劑都能夠不同程度提高試雞血清中免疫球蛋白的含量，其中各中草藥組的IgM含量相比于對(duì)照組都顯著提高（P＜0.05），IgG和IgA的含量各組之間差異不顯著（P＞0.05），但中草藥組都有所提高，這與上述的研究結(jié)果較為一致，說(shuō)明青蒿及其復(fù)合中草藥在一定程度上能夠增強(qiáng)肉雞的機(jī)體免疫功能，有利于雞群的健康狀況。

畜禽機(jī)體在代謝時(shí)會(huì)生成一些對(duì)自身不好的氧自由基，具有強(qiáng)氧化性，這些氧自由基會(huì)引發(fā)生物膜發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，產(chǎn)生如MDA等會(huì)對(duì)膜蛋白造成損害的終產(chǎn)物，破壞細(xì)胞的正常功能，對(duì)機(jī)體造成損害（Rafalowska，1989）。機(jī)體對(duì)自由基的清除主要依賴(lài)于機(jī)體完整的抗氧化防御系統(tǒng)的預(yù)防性或阻斷性控制，從而保護(hù)機(jī)體組織和細(xì)胞免受自由基的氧化損傷（霍振華等，2009）。機(jī)體的抗氧化指標(biāo)主要包括MDA、GSH-Px、SOD、CAT與T-AOC（M Szczubial，2004）。許多研究表明，中草藥添加劑能有效提高SOD和GSH-Px等酶的活性，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，降低MDA等有害終產(chǎn)物的含量。青蒿中富含養(yǎng)分和抗氧化活性物質(zhì)，且青蒿中的抗?fàn)I養(yǎng)因子比例極低，能夠作為飼料添加劑應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)中。黃金華（2017）研究表明，在廣西靈山土雞的基礎(chǔ)日糧中添加中藥沉香粉能顯著提高試雞的抗氧化能力（P＜0.05）。邱玉朗（2017）在白羽肉雞的基礎(chǔ)日糧中添加復(fù)方中草藥添加劑并探究對(duì)其對(duì)抗氧化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)復(fù)方中草藥制劑顯著提高了血液SOD、TAOC和GSH-Px水平（P＜0.05），同時(shí)降低了MDA水平（P＜0.05），表明該復(fù)方中草藥制劑具有增強(qiáng)試雞機(jī)體抗氧化性能的功效。本試驗(yàn)研究表明，3個(gè)中草藥組與對(duì)照組相比試雞血清中的GSH-Px與SOD含量不同程度提高，MDA含量降低，其中試驗(yàn)3組的SOD含量最高，且顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），說(shuō)明青蒿及其復(fù)合中草藥添加劑可以提高散養(yǎng)肉雞的抗氧化能力，有利于雞群健康生長(zhǎng)。本研究中試驗(yàn)3組（青蒿復(fù)合Ⅰ組）的添加效果要優(yōu)于試驗(yàn)2組（青蒿組），其原因可能是多成分、多功能的青蒿復(fù)方添加劑在配伍之后發(fā)生藥效互補(bǔ)，使其效果要好于添加單體青蒿。

4 結(jié)論

在日糧中添加青蒿及其復(fù)方中草藥添加劑均能不同程度改善和提高散養(yǎng)肉雞的抗病性、免疫器官指數(shù)、血清免疫以及抗氧化指標(biāo)。綜合分析，試驗(yàn)2組（添加1%青蒿組）對(duì)提高散養(yǎng)肉雞抗病以及免疫性能的效果最好。