秦玉燕 王運(yùn)儒 時鵬濤 甘志勇 杜國冬 藍(lán)唯 李乾坤 吳鳳

摘要：【目的】探究葉面噴硒對茶樹葉片硒及礦質(zhì)元素含量的影響，為硒肥的合理利用及富硒茶的安全生產(chǎn)提供技術(shù)支持?！痉椒ā恳詠單徕c（Na2SeO3）（四價硒）和硒酸鈉（Na2SeO4）（六價硒）為硒源，在田間對桂綠1號茶樹進(jìn)行葉面噴施試驗，其中，亞硒酸鈉設(shè)0、5.0、25.0、50.0、100.0和150.0 mg/L 6個處理，硒酸鈉設(shè)25.0 mg/L處理。分別于施肥后第6、12、18、24、30和36 d采集茶樹嫩葉，分析其總硒、有機(jī)硒及Zn、K、Fe、Ca和Mg含量的變化規(guī)律。【結(jié)果】噴施5.0～150.0 mg/L亞硒酸鈉和25.0 mg/L硒酸鈉均可提高茶樹葉片的總硒和有機(jī)硒含量，尤其以噴施25.0～150.0 mg/L亞硒酸鈉和25.0 mg/L硒酸鈉效果顯著（P<0.05，下同）;隨噴施亞硒酸鈉濃度的增加，茶樹葉片的總硒和有機(jī)硒含量迅速升高;隨采樣時間的延長，總硒和有機(jī)硒含量在施肥后第6～18 d迅速降低，第24 d后趨于穩(wěn)定;25.0 mg/L六價硒（硒酸鈉）處理茶樹葉片的總硒含量在施肥后18 d內(nèi)與25.0 mg/L四價硒（亞硒酸鈉）處理無顯著差異（P>0.05，下同），但在施肥24 d后顯著高于25.0 mg/L四價硒（亞硒酸鈉）處理。各處理茶樹葉片有機(jī)硒含量占總硒含量的比例保持在93.3%～96.6%，處理間差異不顯著。亞硒酸鈉噴施濃度為50.0 mg/L時可顯著提高茶樹葉片的Fe含量，濃度大于100.0 mg/L時會顯著降低葉片的Zn和K含量，濃度為150.0 mg/L時顯著降低葉片的Fe含量。5.0～150.0 mg/L亞硒酸鈉處理和25.0 mg/L硒酸鈉處理對茶樹葉片的Ca和Mg含量影響不顯著?！窘Y(jié)論】葉面噴硒可明顯提高茶樹葉片的總硒和有機(jī)硒含量;茶樹葉片吸收無機(jī)硒后大部分可轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒形態(tài)。富硒茶生產(chǎn)推薦使用25.0～50.0 mg/L亞硒酸鈉或25.0 mg/L硒酸鈉，推薦采摘時間分別在施肥后12～36 d和施肥后6～36 d。

關(guān)鍵詞： 茶樹;硒;有機(jī)硒;葉面噴施;礦質(zhì)元素

中圖分類號： S571.1? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2019）03-0622-06

0 引言

【研究意義】硒是形成谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和硫氧還蛋白還原酶（TrxR）的重要組分，是人類和動物必需的微量營養(yǎng)元素，在清除體內(nèi)活性氧自由基、抗腫瘤和抗癌等方面發(fā)揮重要作用。據(jù)報道，世界上有40多個國家和地區(qū)的土壤缺硒，我國約有72%地區(qū)處于不同程度的缺硒狀態(tài)（李財運(yùn)等，2018）。因此，通過施用外源硒、借助植物的生物強(qiáng)化作用獲得富硒產(chǎn)品成為近年來研究的熱點。茶樹是天然富硒能力較強(qiáng)的植物，其葉片是硒積累的主要器官，即富硒茶可作為人體補(bǔ)硒的理想產(chǎn)品（秦玉燕等，2017）。但硒可能會在植物中過量積累，且無機(jī)硒對人體的毒性較大，因此有必要探究富硒茶葉中的硒形態(tài)及外源硒與茶葉營養(yǎng)品質(zhì)的關(guān)系，以促進(jìn)富硒茶的安全生產(chǎn)和人體科學(xué)補(bǔ)硒?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】已有研究表明，葉面噴硒既可提高茶葉硒含量，也可影響茶樹體內(nèi)礦質(zhì)元素平衡，進(jìn)而影響茶葉的整體營養(yǎng)價值。胡秋輝等（2000）研究發(fā)現(xiàn)，富硒茶葉中的硒可有效抑制茶葉在貯藏期間維生素C（Vc）含量降低，阻止茶湯氧化褐變，保持綠茶品質(zhì)。胡秋輝等（2001）研究認(rèn)為，通過人工施用亞硒酸鈉生產(chǎn)的富硒茶葉具有與天然富硒茶葉相近的硒形態(tài)和抗氧化功能。李靜等（2007）研究表明，葉面噴施亞硒酸鈉能降低茶葉中的茶多酚和兒茶素含量，明顯提高氨基酸和可溶性糖含量。雷紅靈等（2012）研究顯示，一定濃度的亞硒酸鈉處理可促使藤茶中的黃酮、可溶性蛋白、可溶性糖和游離氨基酸含量明顯提高。王磊等（2016）研究表明，秋茶期葉面噴施750.00～3000.00 g/ha有機(jī)螯合肽水溶性硒，綠茶茶樣含硒量可達(dá)0.276～1.106 mg/kg。晉永芬和高炳德（2018）研究發(fā)現(xiàn)，在春小麥拔節(jié)期和孕穗期噴施2次10.00～20.00 mg/kg或孕穗期噴施1次40.00～50.00 mg/kg亞硒酸鈉溶液，均能使春小麥達(dá)到富硒標(biāo)準(zhǔn)。已有研究表明，葉面噴施亞硒酸鈉11.25～22.50 g/ha即可使水稻、大豆、玉米和小麥籽粒中硒含量滿足低硒區(qū)居民補(bǔ)硒的需要（匡恩俊等，2018）?！颈狙芯壳腥朦c】目前，有關(guān)硒在茶樹上的研究多集中于總硒含量及其對茶葉化學(xué)品質(zhì)的影響方面，關(guān)于茶樹對硒形態(tài)的轉(zhuǎn)化及硒對茶樹體內(nèi)礦質(zhì)元素平衡影響的研究鮮見系統(tǒng)報道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】通過對桂綠1號茶樹葉面施用不同濃度和不同價態(tài)硒肥，分析茶樹葉片硒含量的動態(tài)變化及施硒對葉片有機(jī)硒和礦質(zhì)元素含量的影響，為富硒茶的安全生產(chǎn)和人體科學(xué)補(bǔ)硒提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

試驗于2017年8—10月在廣西亞熱帶作物研究所茶園進(jìn)行，土壤類型為紅土，pH 4.5，有機(jī)質(zhì)含量21.2 g/kg，總硒含量0.37 mg/kg。以亞硒酸鈉和硒酸鈉（分析純）為硒源，供試茶樹品種為桂綠1號，樹齡3年。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 試驗設(shè)計 參考秦冰等（2013）的方法，亞硒酸鈉（四價硒）設(shè)6個濃度處理，分別為0（對照，YSe0）、5.0（YSe1）、25.0（YSe2）、50.0（YSe3）、100.0（YSe4）和150.0（YSe5） mg/L，硒酸鈉（六價硒）設(shè)25.0 mg/L[YSe（VI）]處理，以探究相同濃度不同價態(tài)硒對茶樹葉片總硒含量的影響。每處理面積為2.0 m×1.5 m=3.0 m2，重復(fù)3次，處理間設(shè)1.0 m隔離行。于2017年8月31日進(jìn)行葉面噴施，噴施時以葉面均勻布滿霧狀水滴為宜，每處理噴施1.0 L，對照（YSe0）處理噴施等體積清水。

1. 2. 2 樣品采集與處理 分別于葉面噴硒后6、12、18、24、30和36 d采摘茶樹嫩葉，每份樣品采摘100.0～200.0 g鮮樣，用清水洗凈后再用去離子水沖洗，晾干，置于烘箱中105 ℃殺青30 min，60 ℃烘至恒重，粉碎，過60目篩后裝袋儲存于干燥器中，用于總硒和有機(jī)硒含量測定，同時選取噴硒后24 d的葉片進(jìn)行礦質(zhì)元素含量測定。

1. 2. 3 測定項目及方法 總硒及礦質(zhì)元素含量測定：稱取0.5 g樣品，加入8.0 mL HNO3和2.5 mL H2O2，浸泡過夜后微波消解，消解完全后轉(zhuǎn)移至50.0 mL容量瓶定容。消解液經(jīng)適當(dāng)稀釋后可直接用火焰原子吸收光度計測定Zn、K、Fe、Ca和Mg含量;取10.0 mL消解溶液，趕酸至約1.0 mL，加入3.0 mL 6.0 mol/L HCl于120 ℃還原15 min，冷卻，定容至10.0 mL，用原子熒光光度計測定總硒含量。以國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)茶葉GBW10016作為質(zhì)控樣，對樣品測定過程進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。有機(jī)硒含量參考DB 3301/T 117—2007采用差減法進(jìn)行測定：稱取1.0 g樣品，加入10.0 mL 6.0 mol/L HCl，超聲處理30 min后，于60 ℃水浴振蕩提取3 h，過濾，取濾液5.0 mL，加入10.0 mL HNO3于160 ℃消解至澄清后，趕酸至近干，加入3.0 mL 6.0 mol/L HCl于120 ℃還原15 min，冷卻，定容至10.0 mL，以原子熒光光譜儀測定無機(jī)硒含量?？偽繙p去無機(jī)硒含量，即得有機(jī)硒含量。

1. 3 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用Duncan’s新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2. 1 葉面噴硒對茶樹葉片總硒含量的影響

2. 1. 1 噴施亞硒酸鈉對茶樹葉片總硒含量的影響

由表1可知，各時期采集的YSe0處理茶樹葉片總硒含量均較低，為0.02～0.03 mg/kg，隨噴施亞硒酸鈉濃度的增加，茶樹葉片總硒含量迅速升高。在整個采樣時期，YSe1、YSe2、YSe3、YSe4和YSe5處理的葉片總硒含量分別為0.09～0.66、0.50～4.23、1.59～7.92、2.51～15.88和3.24～28.37 mg/kg。其中，YSe1處理的葉片總硒含量較YSe0處理提高1.93～27.15倍，YSe2、YSe3、YSe4和YSe5處理葉片總硒含量分別是YSe1處理的4.89～6.65、12.07～18.10、24.18～30.30和31.90～60.11倍。各采樣時期除YSe1處理的總硒含量與YSe0處理無顯著差異（P>0.05，下同）外，其他采樣時期亞硒酸鈉處理（YSe2、YSe3、YSe4和YSe5處理）間的總硒含量差異均達(dá)顯著水平（P<0.05，下同），且顯著高于YSe0和YSe1處理。說明噴施5.0～150.0 mg/L亞硒酸鈉均可提高茶樹葉片的總硒含量，其中噴施25.0～150.0 mg/L的效果顯著。試驗觀察還發(fā)現(xiàn)，YSe5處理茶樹的葉面在施肥6 d后出現(xiàn)褐色斑點和穿孔，說明高濃度（150.0 mg/L）亞硒酸鈉處理對茶樹具有毒害作用。

2. 1. 2 噴施不同價態(tài)硒對茶樹葉片總硒含量的影響

由表1可知，YSe（VI）處理在施肥后6、12、18、24、30和36 d的茶樹葉片總硒含量（0.88～3.56 mg/kg）分別是YSe2處理葉片總硒含量（0.50～4.23 mg/kg）的83.22%及1.27、1.59、1.79、1.80和1.76倍;隨施肥時間的延長，YSe（VI）和YSe2處理葉片的總硒含量均呈下降趨勢，但Se（VI）處理比YSe2處理降幅小，其中在施肥后36 d，YSe2處理和YSe（VI）處理葉片的總硒含量分別較施肥后6 d下降88.18%和75.28%;YSe（VI）處理在施肥后6、12、18、24、30和36 d茶樹葉片的總硒含量均顯著高于YSe0處理，但在施肥后的6～18 d與YSe2處理差異不顯著，施肥24 d后YSe（VI）處理顯著高于YSe2處理。說明25.0 mg/L六價硒（硒酸鈉）處理與25.0 mg/L四價硒（亞硒酸鈉）處理茶樹18 d內(nèi)其葉片的總硒含量無明顯差異，但施肥后24 d的葉片總硒含量顯著高于25.0 mg/L四價硒（亞硒酸鈉）處理。

2. 1. 3 不同采樣時期茶樹葉片總硒含量的變化規(guī)律

由表1可知，YSe0處理中各采樣時期茶樹葉片的總硒含量基本相同;YSe1、YSe2、YSe3、YSe4、YSe5和YSe（VI）處理葉片的總硒含量在施肥后6～12 d降低最快，至施肥后12 d比施肥后6 d下降45.22%～63.59%，在施肥后18 d降低也較快，比施肥后12 d下降40.86%～54.55%，在施肥后24 d降幅減緩，較施肥后18 d下降6.31%～30.77%，在施肥24 d后，葉片的總硒含量趨于穩(wěn)定。說明葉面噴施同一濃度（25.0 mg/L）亞硒酸鈉和硒酸鈉后，隨采樣時期的延長，茶樹葉片的總硒含量呈先迅速降低后基本趨于穩(wěn)定的變化趨勢。

由表1還可看出，對比標(biāo)準(zhǔn)NY/T 600-2002《富硒茶》中規(guī)定富硒茶含硒量0.25～4.00 mg/kg，YSe1處理茶樹在施肥后6～12 d其葉片的總硒含量達(dá)富硒水平，在施肥后18～36 d低于富硒范圍;YSe2和YSe3處理葉片的總硒含量在施肥后6 d超出富硒范圍，在施肥后12～36 d達(dá)富硒水平;YSe4處理葉片的總硒含量在施肥后12 d內(nèi)超出富硒范圍，在施肥后18～36 d達(dá)富硒水平;YSe5處理葉片的總硒含量在施肥后24 d內(nèi)超出富硒范圍，在施肥后30～36 d達(dá)富硒水平;YSe（VI）處理葉片的總硒含量在施肥后6～36 d均處于富硒范圍。說明通過葉面噴施25.0～100.0 mg/L亞硒酸鈉或25.0 mg/L硒酸鈉，并分別選在施肥后12～36 d和施肥后6～36 d采摘可生產(chǎn)富硒茶。

2. 2 葉面噴硒對茶樹葉片有機(jī)硒含量的影響

由表2可知，各處理茶樹葉片的有機(jī)硒含量變化規(guī)律與總硒含量變化一致，即有機(jī)硒含量隨噴硒濃度的增加迅速升高;在同一硒濃度下，隨采樣時期的延長，有機(jī)硒含量在噴施18 d內(nèi)迅速降低，在噴施24 d后有機(jī)硒含量較穩(wěn)定。在整個采樣期間，YSe0、YSe1、YSe2、YSe3、YSe4、YSe5和YSe（VI）處理葉片的有機(jī)硒含量分別為0.02～0.03、0.08～0.63、0.47～4.04、1.50～7.51、2.41～15.10、3.10～27.04和0.84～3.40 mg/kg。各采樣時期除YSe1處理的有機(jī)硒含量與YSe0處理無顯著差異外，其他采樣時期亞硒酸鈉處理（YSe2、YSe3、YSe4和YSe5處理）間的有機(jī)硒含量差異均達(dá)顯著水平，且顯著高于YSe0和YSe1處理。說明噴施5.0～150.0 mg/L亞硒酸鈉或25.0 mg/L硒酸鈉均可提高茶樹葉片的有機(jī)硒含量，尤其以噴施25.0～150.0 mg/L亞硒酸鈉和25.0 mg/L硒酸鈉的效果顯著。

由表3可知，各處理茶樹葉片的硒形態(tài)均以有機(jī)硒為主，有機(jī)硒含量占總硒含量的比例穩(wěn)定在93.3%～96.6%，處理間無顯著差異，說明噴施不同濃度亞硒酸鈉和25.0 mg/L硒酸鈉茶樹在不同采樣時期其葉片的有機(jī)硒含量占總硒含量比例相對穩(wěn)定。

2. 3 葉面噴硒對茶樹葉片礦質(zhì)元素含量的影響

采集施肥后24 d的茶樹葉片進(jìn)行礦質(zhì)元素含量測定，結(jié)果（表4）表明，隨噴施亞硒酸鈉濃度的升高，葉片Zn、K、Fe、Ca和Mg含量總體上呈先升高后降低的變化趨勢;YSe1、YSe2、YSe3和YSe（VI）處理葉片的Zn和K含量均高于YSe0處理，但差異不顯著，YSe4和YSe5處理葉片的Zn和K含量顯著低于YSe0處理，說明噴施低濃度（5.0、25.0和50.0 mg/L）亞硒酸鈉和25 mg/L硒酸鈉能促進(jìn)茶樹葉片對Zn和K的吸收，噴施高濃度（100.0和150.0 mg/L）亞硒酸鈉會抑制Zn和K的吸收;YSe1、YSe2、YSe3、YSe4和YSe（VI）處理葉片的Ca和Mg含量均高于YSe0處理，處理YSe5葉片的Ca和Mg含量均低于YSe0，但差異不顯著。說明噴施5.0～150.0 mg/L亞硒酸鈉或25.0 mg/L硒酸鈉對茶樹葉片Ca和Mg含量均無明顯影響;YSe1、YSe2、YSe3和YSe（VI）處理茶樹葉片的Fe含量均高于YSe0處理，YSe4和YSe5處理葉片的Fe含量低于YSe0處理，其中，YSe1、YSe2、YSe（VI）和YSe4處理葉片的Fe含量與YSe0處理無顯著差異，YSe3和YSe5處理葉片的Fe含量與YSe0處理差異顯著。說明噴施低濃度（5.0、25.0或50.0 mg/L）亞硒酸鈉或25.0 mg/L硒酸鈉能促進(jìn)茶樹葉片對Fe的吸收，噴施高濃度（100.0和150.0 mg/L）亞硒酸鈉不利于茶樹葉片對Fe的吸收。

3 討論

3. 1 不同濃度亞硒酸鈉處理對茶樹葉片總硒含量的影響

本研究中，葉面噴施5.0～150.0 mg/L亞硒酸鈉可明顯提高茶樹葉片的總硒含量，且隨噴施濃度的增加，葉片總硒含量迅速升高，與李靜等（2007）對盆栽茶樹的研究結(jié)果存在差異;隨采樣時間的延長，葉片吸收的硒向茶樹其他部位轉(zhuǎn)移，總硒含量迅速降低，施肥24 d后，硒由葉片向其他部位轉(zhuǎn)移達(dá)到平衡狀態(tài)，葉片總硒含量趨于穩(wěn)定，與張雯和耿增超（2012）對蔬菜的研究結(jié)果一致。本研究觀察發(fā)現(xiàn)，以高濃度（150.0 mg/L）亞硒酸鈉噴施茶樹葉面時，從噴施后第6 d開始出現(xiàn)褐色斑點和穿孔，與秦冰等（2013）的研究結(jié)果相似，說明葉面噴施150.0 mg/L亞硒酸鈉已超出了茶樹對硒的耐受范圍。

3. 2 不同價態(tài)硒處理對茶樹葉片總硒含量的影響

本研究中，25.0 mg/L六價硒（硒酸鈉）處理茶樹葉片的總硒含量在施肥后18 d前與25.0 mg/L四價硒（亞硒酸鈉）處理差異不顯著，施肥24 d后顯著高于25.0 mg/L四價硒（亞硒酸鈉）處理，說明茶樹葉片在施硒初始階段對四價硒和六價硒（硒酸鈉）的吸收差異不明顯，但由于四價硒（亞硒酸鈉）在葉片中的轉(zhuǎn)移速度比六價硒（硒酸鈉）快，因此在施硒后期25.0 mg/L六價硒（硒酸鈉）處理葉片的總硒含量顯著高于25.0 mg/L四價硒（亞硒酸鈉）處理，與Pezzarossa等（2007）對番茄、郭璐等（2013）對小白菜的研究結(jié)果相似。由于葉片吸收的六價硒（硒酸鈉）需先還原為四價硒（亞硒酸鈉）才能進(jìn)一步轉(zhuǎn)化，因而六價硒（硒酸鈉）在葉片中的轉(zhuǎn)移速度較四價硒（亞硒酸鈉）慢，因此，25.0 mg/L六價硒（硒酸鈉）處理茶樹葉片的硒能保留更長時間，葉面噴施效果優(yōu)于25.0 mg/L四價硒（亞硒酸鈉）。此外，由于硒酸鈉毒性大于亞硒酸鈉，且價格也較貴，因此在實際生產(chǎn)中可根據(jù)生產(chǎn)需要選擇適宜價態(tài)的硒肥。

3. 3 葉面噴施硒對茶樹葉片硒形態(tài)轉(zhuǎn)化的影響

本研究中，茶樹葉面噴硒后6～36 d，其葉片的硒主要以有機(jī)態(tài)形式存在，有機(jī)硒含量占總硒含量的93.3%～96.6%，變幅較小，與劉慶等（2016a，2016b）對玉米、張城銘和周鑫斌（2018）對水稻的研究結(jié)果一致。說明茶樹葉面噴施無機(jī)硒（亞硒酸鈉或硒酸鈉）后6 d，絕大部分無機(jī)硒均已轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒形態(tài)，且施肥濃度、肥料價態(tài)和采樣時期對有機(jī)硒含量占總硒含量比例的影響不明顯。但也有研究表明，施硒濃度會影響植物有機(jī)硒的轉(zhuǎn)化率，杜振宇等（2004）研究認(rèn)為，施用低濃度（0.15 mg/kg）硒未影響茄子有機(jī)硒轉(zhuǎn)化率，但施用相對高濃度（0.60和3.00 mg/kg）硒時，其有機(jī)硒轉(zhuǎn)化率顯著降低;殷紅清等（2012）用添加外源硒的營養(yǎng)液培養(yǎng)洋蔥，發(fā)現(xiàn)洋蔥的有機(jī)硒質(zhì)量濃度及轉(zhuǎn)化率均隨外源硒濃度的增大迅速降低。說明不同遺傳特性植物對硒的耐受能力與代謝機(jī)制可能存在差異。

3. 4 葉面噴施硒對茶樹葉片礦質(zhì)元素含量的影響

本研究結(jié)果表明，葉面噴施低濃度（5.0～50.0 mg/L）硒（亞硒酸鈉和硒酸鈉）可在一定程度上提高茶樹葉片的Zn、K、Fe、Ca和Mg含量，但除50.0 mg/L硒處理對葉片F(xiàn)e含量具有顯著促進(jìn)作用外，其他低濃度硒處理的效果均不顯著，與劉群龍等（2015）對梨的研究結(jié)果一致;葉面噴施高濃度（150.0 mg/L）亞硒酸鈉對茶樹葉片具有明顯毒害作用，顯著抑制其葉片對Zn、K和Fe的積累，與Kopsell等（2000）對甘藍(lán)、李財運(yùn)等（2018）對山核桃、張城銘和周鑫斌（2018）對水稻的研究結(jié)果存在差異，可能與硒對礦質(zhì)元素含量的影響在不同作物上表現(xiàn)不同有關(guān)。目前，對施用外源硒影響礦質(zhì)元素積累的機(jī)理尚未清楚，今后仍需深入探究。

4 結(jié)論

葉面噴硒可明顯提高茶樹葉片的總硒和有機(jī)硒含量，但對有機(jī)硒含量占總硒含量比例的影響不明顯。茶樹葉片吸收的無機(jī)硒大部分可轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒形態(tài)。生產(chǎn)富硒茶推薦葉面噴施亞硒酸鈉濃度為25.0～50.0 mg/L，硒酸鈉使用濃度為25.0 mg/L，采摘時間可分別選在噴施后12～36 d和噴施后6～36 d。

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（責(zé)任編輯 思利華）