湯祥忠 劉東 楊永環(huán)

摘 要：本文闡述了使用紫外-可見分光光度法（Ultraviolet-visible Spectral Analysis，UV-VIS）測定高吸水性止血材料中透明質(zhì)酸鈉含量的方法和步驟。試驗(yàn)結(jié)果顯示，方法回收率為97%～98%，方法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為：0.68%和0.90%，線性范圍是0～11.4μg/mL，相關(guān)系數(shù)為0.9968。該方法是一種簡單、快速、準(zhǔn)確測定高吸水性止血材料中透明質(zhì)酸鈉含量較好的方法。

關(guān)鍵詞：高吸水性止血材料;紫外-可見分光光度法;透明質(zhì)酸鈉

中圖分類號：R927 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1003-5168（2019）34-0119-03

Determination of Sodium Hyaluronate in Superabsorbent

Hemostatic Materials

TANG Xiangzhong LIU Dong YANG Yonghuan

（Medical Instrument Testing of Henan，Zhengzhou Henan 450003）

Abstract： This paper described the method and procedure of determining the content of sodium hyaluronate in superabsorbent hemostatic materials by UV-VIS. The results show that the recovery of the method is between 97% and 98%， and the relative standard deviation of the method is 0.68% and 0.90%. The linear range is 0～11.4μg/mL， and the correlation coefficient is 0.996 8. It is a simple， rapid and accurate method for the determination of sodium hyaluronate in superabsorbent hemostatic materials.

Keywords： super absorbent hemostatic material;UV-VIS;sodium hyaluronate

1 研究背景

透明質(zhì)酸（商品一般為鈉鹽，Haluronic acid、HA）又名玻璃酸、玻尿酸，是一種酸性粘多糖，廣泛存在于動物各種組織細(xì)胞間質(zhì)中，如皮膚、關(guān)節(jié)滑液、軟骨、眼球玻璃體等及公雞雞冠里。1934年，美國Meyer等人首先從牛眼玻璃體中分離出該物質(zhì)。透明質(zhì)酸是粘多糖中最具代表性的一種，因?yàn)橥该髻|(zhì)酸被認(rèn)為是唯一幾乎存在于從細(xì)菌到人類所有動物體之中的粘多糖。透明質(zhì)酸鈉具有多樣的生理功能和優(yōu)良的物化性質(zhì)，同時(shí)也是我國衛(wèi)生部公布的第一批新資源食品之一，已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健食品、化妝品等領(lǐng)域。隨著對透明質(zhì)酸鈉的研究逐漸深入，透明質(zhì)酸鈉在組織工程、納米材料等領(lǐng)域也表現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛力[1]。

筆者所在的課題組通過潛心研究，創(chuàng)新性地將膠原、透明質(zhì)酸鈉和絲素肽等生物材料交聯(lián)起來，復(fù)合成新型的生物醫(yī)用止血材料，該材料具備以下優(yōu)點(diǎn)：①止血迅速且效果好，尤其對動脈活動性出血和實(shí)質(zhì)性臟器廣泛滲血;②有良好的生物相容性，有促進(jìn)受損組織創(chuàng)面愈合的作用。對該材料中透明質(zhì)酸鈉含量的測試，筆者所在的課題組參考了《組織工程醫(yī)療產(chǎn)品 透明質(zhì)酸鈉》（YY/T 1571—2017）中關(guān)于透明質(zhì)酸鈉的測定方法[2]，并對該方法進(jìn)行改進(jìn)，對該方法的回收率和重復(fù)性進(jìn)行測定。

2 材料與方法

2.1 材料與試劑

D-葡萄糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)品（≥99.8%，中國食品藥品檢定研究院生產(chǎn)）;咔唑（分析純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）;無水乙醇（分析純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）;四硼酸鈉（分析純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）;濃硫酸（分析純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）。

2.2 儀器與設(shè)備

紫外-可見分光光度計(jì)（Agilent Cary 60，美國安捷倫科技有限公司）;XP205DR分析天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司];IKA MS3漩渦振蕩器（上海萊貝科學(xué)儀器有限公司）。

2.3 試驗(yàn)方法

2.3.1 溶液的配制

2.3.1.1 咔唑試液。稱取0.125g咔唑，加無水乙醇100mL溶解，置暗處保存。

2.3.1.2 葡萄糖醛酸（GA）標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密稱取經(jīng)105℃以五氧化二磷為干燥劑，真空干燥至恒重的葡萄糖醛酸對照品約0.1g，置于100mL量瓶中，加水溶解稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取貯備液5.0mL，置100mL量瓶中，加水制成每1.0mL中含50μg的溶液，搖勻，4℃下貯存。

2.3.1.3 0.025mol/L的四硼酸鈉硫酸溶液。稱取四硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O）9.54g，加入1L濃硫酸中，加蓋。不定時(shí)地振搖，直至四硼酸鈉完全溶解。室溫下貯存。

2.3.1.4 試樣制備。精密稱取5g高吸水性止血材料樣品（以下稱止血材料），然后剪成1cm×1cm的小塊于100mL燒杯中，并在燒杯中加入量取的20mL水，用玻璃棒充分?jǐn)嚢?，使止血材料中透明質(zhì)酸鈉充分溶解于水中，然后過濾去除不溶物，并用水洗滌不溶物三次以上，濾液合并轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，并用水定容至刻度。

2.3.2 測定步驟

2.3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.4、0.8、1.2、1.6mL和2.0mL，分別置于25mL具塞試管中，各加水至10mL，混勻，冰浴中冷卻，緩緩加入已冷卻的硼砂硫酸溶液5.0mL，密塞，混勻，沸水浴加熱10min，冰浴中冷卻至室溫。精密加入咔唑試液0.2mL，混勻，沸水浴加熱15min，冰浴中冷卻至室溫。按紫外-可見分光光度法，在600nm波長處測定吸光度，以葡萄糖醛酸的濃度對相應(yīng)的吸光度計(jì)算回歸方程。

2.3.2.2 測定。精密量取供試品溶液10mL置于具塞試管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備自冰浴中冷卻起依法操作，測定吸光度，由回歸方程計(jì)算出供試液中葡萄糖醛酸濃度[C1]。

2.3.2.3 計(jì)算。含量[X]按式（1）計(jì)算。

[X=C1×100×10-6×401.3W1×100%]? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?（1）

式中：[C1]為回歸方程計(jì)算出的供試品溶液中葡萄糖醛酸濃度，μg/mL;[W1]為試樣質(zhì)量，g;401.3為玻尿酸分子量;194.1為葡萄糖醛酸的分子量。

3 結(jié)果與討論

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

依次進(jìn)樣0.0、2.28、4.56、6.84、9.12μg/mL和11.4μg/mL葡萄糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，對其吸光度值進(jìn)行測定，結(jié)果如表1所示。

葡萄糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線是在參考儀器測定結(jié)果基礎(chǔ)上擬合出來的，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。通過線性擬合，葡萄糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線在被測范圍0～11.4μg/mL內(nèi)的回歸方程和相關(guān)系數(shù)依次為：[y=0.008 7x+0.281]與[R2=0.996 8]。

3.2 測定相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

選取兩批次的高吸水性止血材料，分別對其透明質(zhì)酸鈉含量測定5次，具體結(jié)果如表2所示。通過對兩組樣品的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行分析，樣品1的[RSD]為0.68%，樣品2的[RSD]為0.90%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均在5%以下，說明該方法對同一樣品測試的重復(fù)性較好。

3.3 測定加標(biāo)回收率

選取一定量的高吸水性止血材料樣品，測定高吸水性止血材料的加標(biāo)回收率。依次將1、2μg/mL和5μg/mL透明質(zhì)酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液加入樣品中，然后同樣品制備方法一樣進(jìn)行樣品的處理和測試，具體測定結(jié)果如表3所示。

3.4 檢出限的測定

連續(xù)進(jìn)行11次空白測試，并按公式（2）計(jì)算檢出限：

[QL=3S0b]? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? （2）

公式（2）中，[QL]、[S0]、[b]依次代表檢出限、11次空白測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差、標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率。

11次空白測定吸光度值分別為：0.279、0.277、0.279、0.277、0.278、0.278、0.281、0.283、0.279、0.278、0.277;空白測定標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.006 6，標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率為0.008 7。根據(jù)公式（2）計(jì)算檢出限，計(jì)算結(jié)果為0.76μg/mL。

4 結(jié)論

通過對測試結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，本文建立的測定高吸水性止血材料中透明質(zhì)酸鈉含量的紫外-可見分光光度法，方法回收率為97%～98%，方法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.68%和0.90%，線性范圍在0～11.4μg/mL，相關(guān)系數(shù)為0.996 8?？梢?，此方法可以作為高吸水性止血材料中透明質(zhì)酸鈉含量的測定方法，且具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[1]刁立琴，韓婷，高保栓，等.透明質(zhì)酸鈉修護(hù)貼敷料的生物學(xué)評價(jià)[J].中國醫(yī)療器械信息，2019（10）：27-28.

[2]國家食品藥品監(jiān)督管理總局.組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 透明質(zhì)酸鈉：YY/T 1571—2017[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.