史蓉 周麗

摘?要：以酒泉枸杞為研究對(duì)象，選取3個(gè)等級(jí)的枸杞測(cè)定其營(yíng)養(yǎng)成分，各等級(jí)枸杞外形個(gè)大肉厚，品相上佳，蛋白質(zhì)含量高，糖分含量高，脂肪含量低，主要活性成分有枸杞多糖、甜菜堿、總酚。通過(guò)體外模擬胃消化法研究枸杞提取物對(duì)4種常見(jiàn)腸道致病菌的抑制作用。結(jié)果表明：通過(guò)體外模擬胃液消化，枸杞提取液對(duì)4種腸道致病菌有抑制作用，且抑菌能力為鼠傷寒沙門氏菌>銅綠假單胞菌≥大腸埃希氏菌>金黃色葡萄球菌。

關(guān)鍵詞：酒泉枸杞;營(yíng)養(yǎng)成分;抑菌性

枸杞為我國(guó)“藥食同源”的名貴中草藥之一，含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，具有滋補(bǔ)肝腎、益精明目、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等多種保健功效，被廣泛用于功能性食品的研究與開發(fā)[1-2]?，F(xiàn)代臨床上廣泛用于降血脂、降血糖、保肝、抗腫瘤、抗衰老等[3]。枸杞的果品品質(zhì)分外觀品質(zhì)和內(nèi)在品質(zhì)兩方面，其中百粒重、粒度、色澤等為果實(shí)外觀品質(zhì)，決定著果實(shí)的商品性;水分、灰分、蛋白質(zhì)、脂肪、總糖、甜菜堿、枸杞多糖、總酚等為果實(shí)的內(nèi)在品質(zhì)，決定著果實(shí)的營(yíng)養(yǎng)及藥用性，其含量是評(píng)價(jià)食品和中藥藥材品質(zhì)的一項(xiàng)重要指標(biāo)[4]。酒泉位于河西走廊西端，屬半沙漠干旱性氣候，冬冷夏熱溫差大，日照長(zhǎng)，出產(chǎn)的枸杞粒大，色紅、肉質(zhì)厚味甜，糖分高。我中心對(duì)2015—2017年檢驗(yàn)的本地枸杞參數(shù)進(jìn)行了分析，對(duì)3個(gè)等級(jí)枸杞的百粒重、粒度、蛋白質(zhì)、脂肪、總糖、甜菜堿、枸杞多糖、總酚這8個(gè)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定評(píng)價(jià)，研究各等級(jí)枸杞子營(yíng)養(yǎng)成分的含量差異。

傳統(tǒng)評(píng)價(jià)抑菌性的方法對(duì)于枸杞有效成分在胃液中的消化過(guò)程可能發(fā)生的各種生化反應(yīng)無(wú)法真實(shí)反映。近年來(lái)，體外模擬胃液消化模型由于具有簡(jiǎn)單易行、成本低、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于分析活性成分在消化液中的變化。本研究用有機(jī)溶劑萃取并結(jié)合水溶液提取枸杞提取液，用圓濾紙片擴(kuò)散法，利用體外模擬胃液模型，經(jīng)過(guò)不同濃度、不同消化時(shí)間的多次試驗(yàn)，研究枸杞提取液對(duì)4種常見(jiàn)細(xì)菌性腸道致病菌的抑制作用。

1?材料與方法

1.1?材料、試劑和設(shè)備

特優(yōu)、特級(jí)、甲級(jí)枸杞，產(chǎn)地酒泉;金黃色葡萄球ATCC25923、銅綠假單胞菌ATCC27853、大腸埃希氏菌ATCC25922、鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028、副溶血性弧菌ATCC17802，廣東省食品微生物安全工程技術(shù)研究開發(fā)中心;化學(xué)試劑（分析純），天津市百世化工有限公司。

立式壓力蒸汽滅菌器，上海申安醫(yī)療器械廠;BHC-1300ⅡA2型生物安全柜，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;SP-756P紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司;CS-9000薄層掃描儀，日本島津。

1.2?方法

1.2.1?營(yíng)養(yǎng)成分分析?百粒重、粒度、蛋白質(zhì)、脂肪、總糖、枸杞多糖采用GB/T 18672—2014《枸杞》規(guī)定的方法測(cè)定[5]。甜菜堿的測(cè)定：采用薄層色譜法[6]。總酚的測(cè)定：使用Folin-Ciocalteu法進(jìn)行測(cè)定[7-8]，樣品總酚含量（%）以沒(méi)食子酸來(lái)表示。取1%的樣液1mL加10%福林酚5mL，7.5%的Na2CO3 溶液4mL，搖勻，室溫下放置60min，765nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。取1 mg/mL 沒(méi)食子酸溶液稀釋成0.1 mg/mL，再分別稀釋成0.015、0.030、0.045、0.060、0.075 mg/mL，同一條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。按式（1）計(jì)算樣品的總酚含量。

W1=A×2002×1000000×100（1）

式（1）中，W1為枸杞總酚含量（%）、A為提取液中沒(méi)食子酸濃度（g/mL）。

1.2.2?枸杞提取液的制備?枸杞樣品80℃干燥6h，粉碎均勻，分別準(zhǔn)確稱取2.00、5.00、10.00、15.00、20.00g，置于圓底燒瓶中，加80%乙醇溶液80℃水浴回流提取1h，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)?jīng)過(guò)多次回流過(guò)濾，除去單糖、低聚糖、苷類及生物堿等干擾性成分，直至濾液微黃。殘?jiān)脽崴粗猎?，加?00 mL，沸水浴回流提取2h，提取其中所含的有效成分，趁熱過(guò)濾，洗液并入濾液，冷卻后移入200 mL容量瓶中定容。制成2.5%、5%、7.5%、10%的提取液。

1.2.3?枸杞提取液經(jīng)過(guò)人工胃液消化對(duì)腸道致病菌的抑制作用?參考改進(jìn)袁清霞[9]的方法，1、2、3、4號(hào)離心管中分別加入5 mL 4種濃度的枸杞多糖水溶液，每管加入模擬人工胃液1 mL，再放入若干圓濾紙片。另設(shè)1組空白對(duì)照，該離心管中以相同體積的超純水代替枸杞多糖水溶液，加入模擬人工胃液1 mL。所有離心管于37℃、150r/min的搖床中消化0.5、1、1.5、2h，沸水浴10min滅酶活。分別將金黃色葡萄球菌、銅綠假單菌、大腸埃希氏菌、鼠傷寒沙門氏菌菌懸液吸取0.2mL均勻涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板表面，副溶血性弧菌菌懸液0.2mL涂布于3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板。用無(wú)菌鑷子將不同消化時(shí)間處理過(guò)的濾紙片貼于含菌平板上，每個(gè)平板均勻貼4張不同濃度濾紙片。操作完成后平板置于36℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，取出測(cè)量抑菌圈直徑。

2?結(jié)果與分析

2.1?枸杞營(yíng)養(yǎng)成分分析

綜合檢測(cè)3個(gè)不同等級(jí)酒泉枸杞的2項(xiàng)外觀指標(biāo)（粒度、百粒重）和6項(xiàng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量（蛋白質(zhì)、脂肪、總糖、甜菜堿、枸杞多糖、總酚）（附表）。

由附表可知，不同等級(jí)枸杞的品質(zhì)性狀均存在不同程度的差異。其中，粒度和百粒重呈逆相關(guān)性，即每50g枸杞粒數(shù)越少，則每1粒單個(gè)枸杞越大，每100粒枸杞的重量就越重，說(shuō)明枸杞個(gè)大肉厚品相好。參考GB/T 18672—2014《枸杞》標(biāo)準(zhǔn)可知，3個(gè)等級(jí)枸杞的粒度和百粒重指標(biāo)均優(yōu)于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明酒泉枸杞外形個(gè)大肉厚，品相上佳。3個(gè)等級(jí)枸杞的蛋白質(zhì)和脂肪含量相差不大，相比同類水果干制品蛋白質(zhì)含量較高，屬于高蛋白低脂肪的健康食品。糖分含量高，特優(yōu)和特級(jí)兩個(gè)等級(jí)枸杞的總糖含量均高于60%，這與酒泉地處戈壁，晝夜溫差大，日照時(shí)間長(zhǎng)的獨(dú)特地理位置有關(guān)。枸杞多糖含量較高，特優(yōu)級(jí)枸杞中枸杞多糖含量達(dá)到了4.65%，枸杞多糖是一種水溶性多糖，是枸杞中最主要的活性成分，現(xiàn)已有很多研究表明，枸杞多糖具有促進(jìn)免疫、抗衰老、抗腫瘤、清除自由基、抗疲勞、抗輻射、保肝、生殖功能保護(hù)和改善等作用[10]。甜菜堿和總酚國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)未列入，但也是枸杞的主要活性成分，甜菜堿是枸杞果、葉、柄中主要的生物堿之一，枸杞對(duì)脂質(zhì)代謝或抗脂肪肝的作用主要是由于所含的甜菜堿引起的，它在體內(nèi)起甲基供應(yīng)體的作用[11]?？偡邮嵌喾宇愇镔|(zhì)的總稱，能有效清除自由基，延緩衰老，同時(shí)還含有天然維生素[12]，但因其易分解不穩(wěn)定，測(cè)得含量較低，對(duì)其有效的提取方法還需進(jìn)一步研究。

2.2?枸杞提取物在體外模擬胃液消化過(guò)程中對(duì)4種腸道致病菌的抑制作用

據(jù)國(guó)內(nèi)外統(tǒng)計(jì)，在各種食物中毒中，以細(xì)菌性食物中毒最多，細(xì)菌性食物中毒的患者一般都表現(xiàn)有明顯的胃腸炎癥狀，其中腹痛、腹瀉最為常見(jiàn)[13]。本試驗(yàn)將不同濃度的枸杞提取液經(jīng)過(guò)人工胃液消化0.5～2h后作用于4種供試菌，結(jié)果表明，隨著枸杞提取液濃度的增加，消化時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)銅綠假單胞菌、大腸埃希氏菌、鼠傷寒沙門氏菌這3種革蘭氏陰性菌有明顯抑制作用，對(duì)金黃色葡萄球菌抑制作用微弱。

從圖1～4可以看出，枸杞提取液經(jīng)過(guò)模擬人工胃液的消化作用，對(duì)銅綠假單胞菌、大腸埃希氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的抑制作用隨著消化時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)。枸杞提取液濃度為10%時(shí)，消化1h，對(duì)銅綠假單胞菌的抑制作用達(dá)到最強(qiáng);消化1.5h，對(duì)鼠傷寒沙門氏菌抑制作用達(dá)到最強(qiáng);消化2h，對(duì)大腸埃希氏菌的抑制作用達(dá)到最強(qiáng)。枸杞提取液濃度為7.5%時(shí)，消化1.5h，對(duì)金黃色葡萄球的抑制作用達(dá)到最強(qiáng)?？梢?jiàn)，不同濃度的枸杞提取液經(jīng)過(guò)人工模擬胃液的消化對(duì)4種致病菌的抑菌活性是不同的，同一濃度枸杞提取液經(jīng)過(guò)消化對(duì)鼠傷寒沙門氏菌抑制作用最強(qiáng)，對(duì)銅綠假單胞菌和大腸埃希氏菌抑制作用相當(dāng)，對(duì)金黃色葡萄球菌抑制作用最弱。結(jié)合試驗(yàn)現(xiàn)象查閱文獻(xiàn)可知，枸杞的抑菌效果主要是枸杞多糖的作用，枸杞多糖液經(jīng)過(guò)模擬人工胃液消化，隨著消化時(shí)間的延長(zhǎng)，多糖含量逐漸增加，抑菌效果增強(qiáng)，這與參考文獻(xiàn)的報(bào)道結(jié)果一致[14-15]。說(shuō)明在胃液中，較低的pH可能降低了分子之間的作用力，導(dǎo)致部分糖苷鍵斷裂，胃蛋白酶也可以促進(jìn)多糖類物質(zhì)的釋放[16]，增強(qiáng)了抑菌效果。

3?結(jié)論

本研究以酒泉枸杞為原料，測(cè)得其粒大、肉厚、味甜，外在品質(zhì)優(yōu)良;蛋白質(zhì)、枸杞多糖、甜菜堿含量較高，脂肪含量低，具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。在試驗(yàn)中用有機(jī)溶劑去除雜質(zhì)，熱水浸提其有效成分，通過(guò)人工胃液消化作用于4種致病菌，表明枸杞提取物具有較強(qiáng)的抑菌能力。在含枸杞食品中，增加枸杞提取物含量，通過(guò)胃液消化可有效防止腸道致病菌的滋生。目前對(duì)于枸杞的提取和深加工應(yīng)用還較少，酒泉地區(qū)枸杞產(chǎn)量大、品質(zhì)好、糖分高、枸杞多糖含量高，對(duì)枸杞深加工的研究開發(fā)、有效成分提取、深入研究其抗菌保鮮方法，必將提高其產(chǎn)品附加值，具有廣闊的開發(fā)前景，是未來(lái)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要途徑之一?！?/p>

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Antibacterial Activities and Nutritional Components of Jiuquan Lycium barbarum

SHI Rong，ZHOU Li

（Jiuquan Food Inspection and Testing Center，Jiuquan 735000，China）

Abstract：Jiuquan wolfberry was used as the research object to determination of three grades of nutrients.The appearance of a large wolfberry grade flesh，good quality，and the protein content was high，the sugar content was high，and the fat content was low，the main active ingredients were Lycium barbarum polysaccharides，betaine and total phenols.The inhibitory effect of Lycium barbarum extract on 4 common enteric pathogens was studied by simulating gastric digestion in vitro.Results showed that digestion of gastric juice in vitro，Lycium barbarum extract had antibacterial effects on four intestinal pathogens，and the inhibitory effect followed the descending order of Salmonella typhimurium>Pseudomonas aeruginosa≥Escherichia coli>Staphylococcus aureus.

Keywords：Jiuquan wolfberry;nutritional component;antibacterial effect

（責(zé)任編輯?唐建敏）