付楊 楊莉莉 韓鳳娟

摘要 目的：探討理沖生髓飲對卵巢癌SKOV3細胞周期和凋亡影響。方法：以卵巢癌SKOV3細胞為研究對象，采用CCK-8法檢測不同濃度順鉑對SKOV3細胞抑制作用，Annexin V-FITC法檢測SKOV3細胞凋亡情況，細胞周期與細胞凋亡檢測試劑測定SKOV3細胞周期變化，流式細胞術(shù)檢測SKOV3細胞中CD44+CD117+細胞比例。結(jié)果：與空白組比較，24 h和48 h順鉑組SKOV3細胞凋亡率明顯增加，G0/G1期細胞比例降低，S期細胞比例升高，CD44+CD117+細胞比例明顯增加，與順鉑組比較，24 h和48 h理沖生髓飲聯(lián)合順鉑組SKOV3細胞凋亡率明顯增加，G1期細胞比例降低，S期細胞比例升高，CD44+CD117+細胞比例明顯降低，其中理沖生髓飲中劑量組聯(lián)合順鉑組作用效果最強。結(jié)論：理沖生髓飲具有抗腫瘤作用，其機制可能是增加順鉑對卵巢癌SKOV3細胞凋亡，調(diào)控細胞周期阻滯，降低卵巢癌SKOV3細胞中干細胞數(shù)量。

關(guān)鍵詞 理沖生髓飲;卵巢癌SKOV3細胞;卵巢癌干細胞;細胞周期;細胞凋亡

Abstract Objective：To explore the effects of Lichong Shengsui decoction on cycle and apoptosis of ovarian cancer SKOV3 cells.Methods：Taking ovarian cancer SKOV3 cells as the research objects，the inhibitory effect of different concentrations of cisplatin on SKOV3 cells was detected by CCK-8 method.The apoptosis of SKOV3 cells was detected by Annexin V-FITC method.The cycle changes of SKOV3 cells was detected with the cell cycle and apoptosis detection reagents，and the ratio of CD44+CD117+ cells in SKOV3 cells was detected by flow cytometry.Results：Compared with the blank group，the apoptosis rate of SKOV3 cells in the cisplatin group was significantly increased in the 24 h and 48 h.The proportion of cells in G0/G1 phase was decreased，the proportion of cells in S phase cells was increased，and the proportion of CD44+ CD117+ cells was significantly increased.Compared with the cisplatin group，the apoptosis rate of SKOV3 cells in Lichong Shengsui Decoction combined with cisplatin was significantly increased in the 24 h and 48 h.The proportion of cells in G1 phase was decreased，the proportion of cells in S phase was increased，and the proportion of CD44+CD117+cells was significantly decreased.Among them，the middle dose of Lichong Shengsui Decoction combined with cisplatin group had the strongest effects.Conclusion：Lichong Shengsui Decoction has anti-tumor effect，and its mechanism maybe increase the apoptosis of ovarian cancer SKOV3 cells by cisplatin，regulate cell cycle arrest and decrease the number of stem cells in ovarian cancer SKOV3 cells.

Key Words Lichong Shengsui Decoction; Ovarian cancer SKOV3 cells; Ovarian cancer stem cells; Cell cycle; Cell apoptosis

中圖分類號：R285.5文獻標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.06.008

卵巢癌死亡率居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤第一位，病因和發(fā)病機制尚不明確。據(jù)統(tǒng)計全世界范圍內(nèi)每年有將近20萬例患者被診斷為卵巢癌，12.5萬例患者死亡[1]。理想的腫瘤細胞減滅術(shù)輔以系統(tǒng)的鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療是卵巢癌的規(guī)范性治療方案，盡管患者對腫瘤細胞減滅術(shù)和化療最初治療反應(yīng)良好，而多數(shù)患者會因復(fù)發(fā)最終導(dǎo)致死亡，對鉑類制劑的敏感程度決定卵巢癌患者最終疾病進展，化療耐藥是卵巢癌復(fù)發(fā)和治療失敗的最主要原因之一[2-3]。自20世紀(jì)70年代腫瘤干細胞學(xué)說提出以來，腫瘤干細胞被認為是腫瘤治療失敗的根本原因，干細胞特殊的生物學(xué)特性存在決定了腫瘤干細胞成為腫瘤治療過程中的巨大障礙。有研究者提出，消滅腫瘤干細胞的多能性和自我更新能力可阻止上皮性卵巢癌疾病的進展和消除化療耐藥及其引起的復(fù)發(fā)[4，5]。因此，靶向消滅卵巢癌干細胞成為科研工作者的一個研究方向。課題組基于“溫煦腎陽，搜剔胞絡(luò)瘀滯”提出理沖生髓飲組方，該組方臨床研究發(fā)現(xiàn)可減輕卵巢癌化療患者化療反應(yīng)、提高機體免疫力，進而達到抗腫瘤作用，然而作用機制并不明確?；诖吮狙芯刻接懤頉_生髓飲對卵巢癌SKOV3細胞增殖、凋亡以及亞細胞表型影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 SD大鼠，雌性，體質(zhì)量180～220 g，購于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心，飼養(yǎng)于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)婦科藥理實驗室，溫度（25±2）℃，濕度45%～50%。

1.1.2 藥物 理沖生髓飲有效藥物組成：莪術(shù)、三棱、人參、黃芪、水蛭、浙貝母、鹿茸、淫羊藿，中藥購于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院中藥局。

1.1.3 試劑與儀器 青霉素和鏈霉素溶液（美國hyclone公司，批號：J170012）、胰蛋白酶（美國hyclone公司，批號：J180025）、1640培養(yǎng)液（美國hyclone公司，批號：AD17321268）;胎牛血清（美國gibco公司，批號：1989478）;CCK-8試劑盒（日本Dojindo公司，批號：LQ727）;FITC Mouse Anti-Human CD44（美國BD公司，批號：5275777），PE Mouse Anti-Human CD117（美國BD公司，批號：5153811）;APC Mouse Anti-Human CD133（美國BD公司，批號：5160823188）;Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒（天津三箭生物技術(shù)有限公司，批號：AGZ20）和細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒（碧云天生物技術(shù)研究所，批號：0101419190308）;光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司，型號：IX51）;酶標(biāo)儀（瑞士TECAN公司，型號：Infinite M200 Pro）;人卵巢癌SKOV3細胞株（上海中橋新舟生物技術(shù)有限公司，貨號：ZQ0074）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

1.2.1.1 卵巢癌細胞培養(yǎng)和實驗分組 卵巢癌細胞SKOV3用含10%FBS的1640培養(yǎng)基置于37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，3～4 d進行傳代處理，取對數(shù)生長期細胞進行相關(guān)實驗研究，實驗分為：空白組：正常培養(yǎng)基培養(yǎng)、順鉑組：10 μg/mL順鉑、理沖生髓飲低劑量+順鉑組：10%含藥血清+10 μg/mL順鉑，理沖生髓飲中劑量+順鉑組：10%含藥血清+10 μg/mL順鉑，理沖生髓飲高劑量+順鉑組：10%含藥血清+10 μg/mL順鉑，共5組。

1.2.1.2 理沖生髓飲含藥血清制備 SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機分為空白組、理沖生髓飲低、中、高劑量組，每組8只，理沖生髓飲低劑量組予有效組分2.66 g/kg（相當(dāng)于中藥飲片8.55 g/kg），中劑量組給予有效組分5.32 g/kg（相當(dāng)于中藥飲片17.1 g/kg），高劑量組予有效組分10.64 g/kg（相當(dāng)于中藥飲片34.2 g/kg），蒸餾水稀釋有效組分;空白組予同體積蒸餾水，連續(xù)灌胃7 d。于末次給藥結(jié)束2 h眼眶取血，室溫下靜置30 min，離心機3 500 r/min 4 ℃離心10 min，抽取血清0.22 μm無菌條件下過濾2次，56 ℃恒溫水浴鍋滅活30 min，置-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 給藥方式 取對數(shù)生長期卵巢癌skov3細胞以104接種于24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)12 h，再分別加入不同濃度含藥血清及順鉑干預(yù)24 h或者48 h，收集細胞用于后期實驗。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

1.2.3.1 CCK-8檢測順鉑對卵巢癌細胞增殖抑制作用 取對數(shù)生長期人卵巢癌SKOV3細胞，調(diào)整細胞密度為104/mL加入96孔培養(yǎng)板，每孔加入100 μL置于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中孵育待細胞鋪滿瓶底后加入順鉑濃度梯度為0 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、25 μg/mL、30 μg/mL，每孔加入含順鉑的培養(yǎng)液100 μL，每個濃度重復(fù)5個復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，干預(yù)結(jié)束后每孔加入10 μL的CCK-8繼續(xù)孵育4 h，酶標(biāo)儀檢測450 nm處的吸光度值。根據(jù)吸光度值計算順鉑對SKOV3細胞抑制率，求算IC50值。

1.2.3.2 Annexin V-FITC法檢測理沖生髓飲聯(lián)合順鉑對SKOV3細胞的凋亡情況影響 取對數(shù)生長期人卵巢癌SKOV3細胞，調(diào)整細胞密度為104/mL加入6孔培養(yǎng)板，每孔加入2 000 μL置于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中孵育24 h，實驗分為空白組、順鉑組、順鉑+低劑量組、順鉑+中劑量組和順鉑+高劑量組，每孔加入2 000 μL含有相應(yīng)藥物的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h和48 h，胰酶進行消化收集細胞，進行細胞計數(shù)，PBS洗滌2次，1 000 r/min離心5 min，棄上清，加入195 μL Annexin V-FITC結(jié)合液輕輕重懸細胞，加入5 μL Annexin V-FITC，輕輕混勻，加入10 μL碘化丙啶染色液，混勻，室溫避光孵育20 min，孵育完成進行流式細胞儀檢測。

1.2.3.3 流式細胞術(shù)檢測理沖生髓飲聯(lián)合順鉑對SKOV3細胞周期調(diào)控影響 取對數(shù)生長期人卵巢癌SKOV3細胞，調(diào)整細胞密度為104/mL加入6孔培養(yǎng)板，每孔加入2 000 μL置于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中孵育24 h，實驗分為空白組、順鉑組、順鉑+低劑量組、順鉑+中劑量組和順鉑+高劑量組，每孔加入2 000 μL含有相應(yīng)藥物的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h和48 h，胰酶進行消化收集細胞，進行細胞計數(shù)，加入1 mL冰浴預(yù)冷70%乙醇，輕輕吹打混勻，4 ℃固定2 h。1 000 r/min離心3～5 min，沉淀細胞，加入1 mL冰浴預(yù)冷的PBS，重懸細胞，1 000 r/min左右離心3～5 min離心棄上清，每管細胞樣品中加入染色緩沖液0.5 mL，PI染色液25 μL，RNase A 10 μL，重懸細胞，37 ℃避光溫浴30 min，用流式細胞儀在激發(fā)波長488 nm波長處檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。采用MODFIT分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。

1.2.3.4 理沖生髓飲聯(lián)合順鉑對SKOV3細胞中CD44+CD117+的比例 取對數(shù)生長期人卵巢癌SKOV3細胞，調(diào)整細胞密度為104/mL加入6孔培養(yǎng)板，每孔加入2 000 μL置于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中孵育24 h，實驗分為空白組、順鉑組、順鉑+低劑量組、順鉑+中劑量組和順鉑+高劑量組，每孔加入2 000 μL含有相應(yīng)藥物的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，胰酶進行消化收集細胞，進行細胞計數(shù)，PBS洗滌2次，1 000 r/min離心5 min，棄上清，加入100 μL PBS重懸細胞，加入20 μL FITC小鼠抗人CD44、5 μL PE小鼠抗人CD117、10 μL APC小鼠抗人CD133，混勻，避光孵育20 min，孵育結(jié)束后，加入2 mL PBS洗滌細胞，1 000 r/min離心5 min棄上清，加入500 μL PBS重懸細胞，上機進行檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，所得計量數(shù)據(jù)資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，各組間比較采用方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 順鉑對SKOV3細胞增殖抑制作用影響 顯微鏡下觀察不同濃度的順鉑對SKOV3細胞增殖及形態(tài)影響，隨著順鉑濃度的升高貼壁細胞數(shù)量逐漸減少，凋亡細胞呈懸浮狀態(tài)并且伴有細胞形態(tài)的改變。見圖1。不同濃度順鉑對SKOV3細胞抑制作用影響，從圖中可以看出SKOV3細胞存活率隨著順鉑濃度的增加而降低，與順鉑濃度呈負相關(guān)，根據(jù)曲線進行擬合算出順鉑的IC50值為23.19 μg/mL。見圖2。

2.2 理沖生髓飲聯(lián)合順鉑對SKOV3細胞凋亡影響與空白組比較，藥物處理24 h和48 h的順鉑組SKOV3細胞凋亡率明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），順鉑聯(lián)合低劑量組、順鉑聯(lián)合中劑量組和順鉑聯(lián)合高劑量組SKOV3細胞凋亡率增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;與順鉑組比較，藥物處理24 h的順鉑聯(lián)合低劑量組、順鉑聯(lián)合中劑量組SKOV3細胞凋亡率明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），順鉑聯(lián)合高劑量組SKOV3細胞凋亡沒有明顯變化;藥物處理48 h的順鉑聯(lián)合中劑量組、順鉑聯(lián)合高劑量組SKOV3細胞凋亡率明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），順鉑聯(lián)合低劑量組SKOV3細胞凋亡沒有明顯變化。見表1、圖3。

2.3 理沖生髓飲聯(lián)合順鉑對SKOV3細胞周期影響藥物干預(yù)24 h的流式細胞術(shù)結(jié)果顯示第1個高峰為G0/G1期、凹谷為S期、第2峰為G2/M期，其顯示區(qū)域的峰面積的比例就是各周期的比例。與空白組比較，順鉑組中G0/G1期細胞數(shù)量有所降低（P<0.05），G2/M期細胞數(shù)量有所增加（P>0.05），S期細胞數(shù)量明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與順鉑組比較，理沖生髓飲中、低劑量聯(lián)合順鉑組中G0/G1期細胞數(shù)量明顯升高（P<0.05），理沖生髓飲低劑量聯(lián)合順鉑中G2/M期細胞數(shù)量明顯降低（P<0.05），理沖生髓飲中劑量聯(lián)合順鉑組中G2/M期細胞數(shù)量略有增加（P>0.05），S期細胞數(shù)量明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。理沖生髓飲高劑量聯(lián)合順鉑組中G0/G1期細胞數(shù)量明顯降低（P<0.05），S期細胞數(shù)量明顯升高（P<0.05），G2/M期細胞數(shù)量略有增加（P>0.05）。見表2、圖4。

藥物干預(yù)48 h的流式細胞術(shù)結(jié)果顯示與空白組比較，順鉑組中G0/G1期、G2/M期和S期細胞數(shù)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。與順鉑組比較，理沖生髓飲高、中、低劑量聯(lián)合順鉑組中G0/G1期細胞數(shù)量明顯降低（P<0.05），S期細胞數(shù)量明顯升高（P<0.05），理沖生髓飲低、中劑量聯(lián)合順鉑組中G2/M期細胞數(shù)量明顯降低（P>0.05），理沖生髓飲高劑量聯(lián)合順鉑組中G2/M期細胞數(shù)量明顯升高（P>0.05）。見表3、圖4。

2.4 理沖生髓飲聯(lián)合順鉑對SKOV3細胞中CD44+CD117+細胞比例 CD44+CD117+細胞分布于右上象限，熒光信號越多表明細胞比例越大。與空白組比較，順鉑組中CD44+CD117+細胞數(shù)量明顯升高（P<0.05），與順鉑組比較，理沖生髓飲低、中、高劑量聯(lián)合順鉑組中CD44+CD117+細胞數(shù)量明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。其中理沖生髓飲中劑量聯(lián)合順鉑組中CD44+CD117+細胞數(shù)量降低最為明顯。見表4、圖5。

3 討論

王秀霞教授針對卵巢癌“腎陽虛衰，血瘀于胞”病機以及“久病入于絡(luò)”，確立“溫煦腎陽，搜剔胞絡(luò)瘀滯”的治療原則，反復(fù)推敲確立理沖生髓飲組方。理沖生髓飲組方由人參、鹿茸、黃芪、淫羊藿、水蛭、莪術(shù)、三棱、浙貝母組成，其中三棱、莪術(shù)為君藥。從藥物作用來說，張壽甫老先生認為“三棱、莪術(shù)性近和平，而以治女子瘀血，雖堅如鐵石亦能徐徐消除，而猛烈開破之品轉(zhuǎn)不能建此奇功，此三棱、莪術(shù)獨具之良能也”，“……若與參、術(shù)、耆諸藥并用大能開胃進食，調(diào)血和血”[6]。三棱、莪術(shù)不僅能消癥，且配合人參、黃芪可改善卵巢癌患者食欲不振情況，提高機體免疫力[7];水蛭破瘀血而不傷新血，《本經(jīng)》曰：“水蛭最善食人之血，而性又遲緩善入。遲緩則生血不傷，善入則堅積易破，借其力以消既久之滯，自有利而無害也”，可搜剔胞絡(luò)之瘀滯;浙貝母軟堅散結(jié);人參、鹿角霜、黃芪、淫羊藿益氣溫陽補腎，提高機體免疫力[8-9]。卵巢癌發(fā)病屬正虛邪實，過用攻伐恐犯虛虛之戒，緩攻緩消，攻補兼施，寓補于攻，寓攻于補，方能奏效，基于此理沖生髓飲全方藥物性溫或平，味多甘辛苦，共奏溫煦腎陽、流行脈絡(luò)、搜剔胞絡(luò)瘀滯之功效。

細胞周期是細胞生命活動的基本過程，它控制著細胞從靜止期向生長增殖期轉(zhuǎn)化。哺乳動物的細胞生長和分裂周期分為4個階段，即G1期、S期、G2期、M期，在細胞周期過程中通過細胞周期檢測點來保證細胞周期事件忠實性及按序完成[10]，腫瘤是在環(huán)境因素和遺傳因素共同作用下引起的細胞周期紊亂、細胞失控性生長的一類疾病，失控性生長是各種腫瘤共同的生物學(xué)特征，其主要分子機制是細胞周期紊亂導(dǎo)致細胞增殖過多和凋亡過少[11-12]，其中S期的DNA合成和G2/M期的細胞有絲分裂對維持腫瘤細胞的惡性增殖尤為重要。本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)理沖生髓飲有效組分聯(lián)合順鉑可顯著提高SKOV3細胞的凋亡率，在順鉑作用下，SKOV3細胞細胞周期主要分布于G1期，理沖生髓飲有效組分中劑量聯(lián)合順鉑干預(yù)48 h時G1期細胞減少、S期細胞增多，總凋亡率可達96.03%，而順鉑組總凋亡率僅為84.81%，作用最為顯著。理沖生髓飲聯(lián)合順鉑可以通過提高S期細胞比例，增加細胞凋亡，促進順鉑的抗腫瘤作用，該研究結(jié)果與劉念的研究結(jié)果相似[13]。

CD44+CD117+細胞是由CD44和CD177共同結(jié)合來標(biāo)記卵巢癌干細胞[14]。CD44是透明質(zhì)酸受體，與細胞遷移有關(guān)，是乳腺癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌等惡性腫瘤的干細胞標(biāo)記物[15];CD117也被稱為c-kit，是酪氨酸激酶Ⅲ型受體，被認為是干細胞因子受體，且具有抗凋亡作用。CD44+CD117+細胞對順鉑具有耐藥性，且100個CD44+CD117+細胞就可在體內(nèi)形成腫瘤[16]。研究表明，降低CD44+CD117+細胞的比例可減輕腫瘤進展、增強順鉑敏感性[17-18]。本研究應(yīng)用理沖生髓飲干預(yù)卵巢癌SKOV3細胞，24 h后發(fā)現(xiàn)順鉑對CD44+CD117+細胞具有富集作用，順鉑作用下CD44+CD117+細胞比例明顯高于空白組，理沖生髓飲中劑量聯(lián)合順鉑降低CD44+CD117+細胞比例作用最為明顯。該結(jié)果表明理沖生髓飲能夠降低順鉑對卵巢癌干細胞的富集作用，靶向降低卵巢癌干細胞CD44+CD117+比例，通過對卵巢癌干細胞的靶向作用達到治療卵巢癌的目的。綜上所述，理沖生髓飲聯(lián)合順鉑能夠增加卵巢癌SKOV3細胞凋亡，影響調(diào)控細胞周期，降低CD44+CD117+細胞數(shù)量，進而增加抗腫瘤作用及逆轉(zhuǎn)多藥耐藥。

參考文獻

[1]Torre LA，Bray F，Siegel RL，et al.Global cancer statistics，2012[J].CA Cancer J Clin，2015，65（2）：87-108.

[2]Eisenhauer EA，Vermorken JB，van Glabbeke M.Predictors of response to subsequent chemotherapy in platinum pretreated ovarian cancer：a multivariate analysis of 704 patients[J].Ann Oncol，1997，8（10）：963-968.

[3]Meinhold-Heerlein I，Hauptmann S.The heterogeneity of ovarian cancer[J].Arch Gynecol Obstet，2014，289（2）：237-239.

[4]于風(fēng)勝，李藝，崔恒.卵巢癌干細胞及卵巢癌治療[J].中國實用婦科與產(chǎn)科雜志，2014，30（1）：14-17.

[5]王文靜，吳韶飛，郭飄婷，等.熊果酸對卵巢癌干細胞荷瘤裸鼠耐藥的逆轉(zhuǎn)作用[J].上海中醫(yī)藥雜志，2016，50（5）：70-76.

[6]張錫純.醫(yī)學(xué)衷中參西錄·下冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：120.

[7]程堃.理沖生髓飲對卵巢癌術(shù)后化療患者減毒增效作用的臨床研究[D].哈爾濱：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

[8]辛宇，邱智東，董金香，等.中藥治療卵巢癌研究進展[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2018，18（21）：21-22.

[9]郝悅，張新.中醫(yī)藥治療卵巢癌研究進展[J].實用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2011，25（7）：35-36.

[10]Funk JO，Kind P.Cell cycle control，genetic instability and cancer[J].Hautarzt，1997，48（3）：157-165.

[11]Otto T，Sicinski P.Cell cycle proteins as promising targets in cancer therapy[J].Nat Rev Cancer，2017，17（2）：93-115.

[12]曹亞.細胞周期與腫瘤[J].國外醫(yī)學(xué)：生理、病理科學(xué)與臨床分冊，2002，22（2）：103-105.

[13]劉念，江彩霞，劉力，等.黃連素對人卵巢癌細胞增殖和凋亡的影響[J].中國婦幼保健，2018，33（4）：911-914.

[14]Zhang S，Balch C，Chan MW，et al.Identification and characterization of ovarian cancer-initiating cells from primary human tumors[J].Cancer Res，2008，68（11）：4311-4320.

[15]Burgos-Ojeda D，Rueda BR，Buckanovich RJ.Ovarian cancer stem cell markers：prognostic and therapeutic implications[J].Cancer Lett，2012，322（1）：1-7.

[16]Ffrench B，Gasch C，O′Leary JJ，et al.Developing ovarian cancer stem cell models：laying the pipeline from discovery to clinical intervention[J].Mol Cancer，2014，13：262.

[17]Amy PN Skubitza，Elizabeth P Taras，Kristin LM Boylan，et al.Targeting CD133 in an in vivo ovarian cancer model reduces ovarian cancer progression[J].Gynecol Oncol，2013，130（3）：579-587.

[18]Zhang R，Zhang P，Wang H，et al.Inhibitory effects of metformin at low concentration on epithelial-mesenchymal transition of CD44+CD117+ovarian cancer stem cells[J].Stem Cell Res Ther，2015，6：262.

（2018-11-01收稿 責(zé)任編輯：王明）