姚清華 顏孫安 陳美珍 黃敏敏 林虬

摘要：[目的]研究不同農(nóng)藥對我國兩種銀耳（Tremella fuciformisBerk）主栽品種Tr01、Tr21生長及農(nóng)藥殘留的影響。[方法]采用拌料方式添加不同質(zhì)量濃度的9組（11種）農(nóng)藥處理，測定各組銀耳生長性狀、產(chǎn)量、農(nóng)藥殘留并開展質(zhì)量安全風險評估。[結(jié)果]在9組農(nóng)藥拌料栽培處理條件下，聯(lián)苯菊酯、啶蟲脒、氯氰菊酯、阿維菌素、乙酰甲胺磷、咪鮮胺、吡蟲啉、異丙威、噠螨靈、克百威、毒死蜱11種農(nóng)藥在500、1000、2000mg·kg拌料質(zhì)量濃度下，除吡蟲啉組外，其他農(nóng)藥拌料組銀耳均未檢出農(nóng)藥殘留。銀耳中吡蟲啉殘留引起的最高膳食急性、慢性風險熵分別為0.006、0.0009，遠小于1，說明其膳食健康風險極低。20%異丙威乳油拌料添加會導致銀耳子實體無法正常生長。3.5%氯氰菊酯、1.5%啶蟲脒微乳劑，5%阿維菌素乳油，30%乙酰甲胺磷乳油拌料添加會顯著降低銀耳Tr01的產(chǎn)量。3%聯(lián)苯菊酯、3%啶蟲脒微乳劑，3.5%氯氰菊酯、1.5%啶蟲脒微乳劑拌料添加會顯著降低銀耳Tr21的產(chǎn)量。[結(jié)論]銀耳品種丁Tr01比品種Tr21更易受農(nóng)藥影響;異丙威等部分農(nóng)藥種類會抑制銀耳生長;在試驗條件下，銀耳中的農(nóng)藥殘留膳食風險處于可接受水平。

關(guān)鍵詞：銀耳;風險評估;農(nóng)藥;培養(yǎng)料;產(chǎn)量

中圖分類號：S567.34文獻標志碼：A 文章編號：1008-0384（2019）09-1064-09

0引言

（研究意義）銀耳（Tremella fuciformis Berk），又名雪耳、白木耳，是中國傳統(tǒng)食藥用菌之一。銀耳具有增強免疫力、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老等多種功效，深受消費者喜歡。但銀耳栽培過程易受青霉、鏈孢霉、螨蟲、菇蚊等病蟲害的侵襲，嚴重影響產(chǎn)量和品質(zhì)。化學農(nóng)藥是銀耳病蟲害防治的主要方法，但不合理規(guī)范使用易導致農(nóng)藥殘留，引起質(zhì)量安全隱患，并成為銀耳出口瓶頸。與許多其他小宗農(nóng)作物類似，銀耳栽培上并無注冊農(nóng)藥供使用，且我國暫無銀耳殘留限量標準，給菇農(nóng)在銀耳栽培過程中的病蟲害正常防控造成嚴重困擾。（前人研究進展）目前，關(guān)于銀耳栽培中農(nóng)藥合理使用及其質(zhì)量安全風險評估的研究尚不多見。溫志強等研究了6種殺蟲劑和2種殺菌劑在拌料和噴霧2種施用模式下，對銀耳Tr01生長及農(nóng)藥殘留的影響。另有文獻報道了滅蠅胺、乙酰甲胺磷在銀耳生長中的消解規(guī)律，但銀耳品種不明確。但部分農(nóng)藥種類與生產(chǎn)實際不甚相符且未深入探討銀耳品種間的差異及產(chǎn)量影響。因此，根據(jù)銀耳栽培實際，開展農(nóng)藥對銀耳生長發(fā)育及質(zhì)量安全的影響，可為銀耳規(guī)范化栽培、健康科學消費提供參考。（本研究切入點）本研究實施前，對我國銀耳主產(chǎn)地區(qū)古田縣進行多次調(diào)研、樣品采集、驗證分析，發(fā)現(xiàn)銀耳常見的農(nóng)藥殘留種類有：聯(lián)苯菊酯、啶蟲脒、氯氰菊酯、阿維菌素、乙酰甲胺磷、咪鮮胺、吡蟲啉、異丙威、噠螨靈、克百威、毒死蜱等。常見的農(nóng)藥使用方式是對栽培前的空菇房噴施，但此法僅能起到預防的作用，對銀耳栽培過程中出現(xiàn)的病蟲害防治效果不佳。針對目前銀耳栽培農(nóng)藥標準不統(tǒng)一、施用方式不合理的問題，采用拌料處理方式開展9組農(nóng)藥處理對不同銀耳品種的施用效果分析。（擬解決的關(guān)鍵問題）本研究以古田縣銀耳主栽品種Tr01、Tr21為試驗對象，采用拌料添加農(nóng)藥的方式，分析9組農(nóng)藥500、1000、2000mg·kg處理對銀耳生長發(fā)育的影響及其殘留安全性評價，旨在為制訂銀耳栽培農(nóng)藥安全使用規(guī)范奠定科學基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1供試菌株及農(nóng)藥

銀耳Tr01、Tr21菌株來源于古田縣建宏農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，其子實體外形如圖1示。兩個品種均具有子實體大、朵形美的特點，但Tr01耳片為黃色、Tr21耳片為白色。

本試驗涉及11種農(nóng)藥，設(shè)置9組農(nóng)藥處理，劑型及生產(chǎn)企業(yè)如表1示。

1.2儀器設(shè)備

氣相色譜儀（GC-2010plus，日本島津公司）·三重四級桿質(zhì)譜（TSQ8040，日本島津公司）、高效液相色譜儀（Agilent 1200，美國安捷倫科技有限公司）。三重四級桿質(zhì)譜（Agilent 6460，美國安捷倫科技有限公司）、吹氮濃縮裝置（Reati-ThermⅢHRA-TING/STIRRING MODMLE，PIERCE公司）、超純水制備器（Mili-Q System，美國Millpor公司）、超聲儀（KD-500DE，昆山市超聲儀器有限公司）、渦旋混合器（德國IKA公司）。

1.3滅菌對農(nóng)藥降解的影響

將9組農(nóng)藥溶于水，根據(jù)古田縣銀耳栽培方法配制培養(yǎng)料并滅菌，按1000mg·kg（制劑量/培養(yǎng)料干重）添加、拌勻、裝袋、滅菌，采集滅菌前后培養(yǎng)料樣品，供測水分及相應(yīng)農(nóng)藥含量，將滅菌前后樣品中的農(nóng)藥含量換算成以干基計，再計算農(nóng)藥的降解率。

降解率/%=（滅菌前菌包農(nóng)藥含量-滅菌后菌包農(nóng)藥含量）/滅菌前菌包農(nóng)藥含量×100

1.4農(nóng)藥拌料試驗

本試驗的施藥方式、劑量參考溫志強、古田縣菇農(nóng)生產(chǎn)實踐及農(nóng)藥使用說明。2個銀耳菌種均設(shè)9個供試農(nóng)藥組和1個空白對照組，每個農(nóng)藥組設(shè)500、1000、2000mg·kg拌料質(zhì)量濃度（制劑量/培養(yǎng)料干重）;共56個處理，每個處理3個重復，每個重復20個菌包。

將農(nóng)藥溶于水后，與麥麩、棉籽殼等培養(yǎng)料拌勻，根據(jù)古田縣銀耳生產(chǎn)通用方法進行裝袋、滅菌、接種、栽培。觀察各組銀耳接種后菌絲生長情況。出菇時，隨機選取5個菌包，測量銀耳子實體直徑。每個處理銀耳進行測產(chǎn)，計算單個菌包銀耳產(chǎn)量。隨機采集每個處理組3朵銀耳子實體，供測水分及相應(yīng)農(nóng)藥含量。

1.5指標測定

水分檢測參照GB/T 5009.3-2016;聯(lián)苯菊酯、氯氰菊酯、乙酰甲胺磷、毒死蜱、噠螨靈利用GC-MS/MS進行分析測定，色譜柱為SH-Rxi-5Sil MS（日本島津）;啶蟲脒、阿維菌素、咪鮮胺、吡蟲啉、異丙威、克百威利用LC-MS/MS進行分析測定，色譜柱為PhenomenexLunaC8（美國菲羅門）。

1.6農(nóng)藥殘留安全評價

每人每千克體重農(nóng)藥殘留每日攝入量[Edibledaily intake（EDI），mg·kgbw day]通過公式（1）計算：

EDI=（C×D）/Bw （1）

式中C為食物中農(nóng)藥殘留質(zhì)量濃度（mg·kg），D為食物日攝入量（kg），Bw為消費者平均體重。

通過風險熵（Hazard quotient，HQ）來衡量農(nóng)藥殘留的健康風險，急性、慢性風險分別通過將EDI與急性參考攝入量（Acute reference dose，ARfD）、每日容許攝入量（Acceptable daily intake，ADI）比較獲得，計算公式如下：

HQ=EDI/ARfD（ADI） （2）

當HQ≥1時，表示有不可接受的健康風險;HQ<1時，表示健康風險可接受。

1.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件進行單因素方差統(tǒng)計分析，Duncan's多重比較組間差異（P<0.05表示差異顯著）。獨立樣本t檢驗比較Tr01與Tr21間的差異性（P<0.05表示差異顯著）。數(shù)據(jù)采用“平均值±標準差”表示。

2結(jié)果與分析

2.1 高溫滅菌對農(nóng)藥降解的影響

11種農(nóng)藥殘留定量限均為0.01mg·kg，加標回收率為70.1%-106.4%，表明檢測方法穩(wěn)定、準確、可靠，符合農(nóng)藥殘留測定要求。

由表2可知，不同農(nóng)藥在高溫滅菌條件下降解率介于1.0%-100.0%，從高到低依次為乙酰甲胺磷、咪鮮胺、毒死蜱、丁硫克百威（以克百威計）、啶蟲脒、聯(lián)苯菊酯、異丙威、阿維菌素、吡蟲啉、氯氰菊酯、噠螨靈。不同農(nóng)藥組，啶蟲脒的降解率為70.4%、61.5%、69.8%。培養(yǎng)料中的乙酰甲胺磷及其降解產(chǎn)物甲胺磷含量均低于定量限（0.01mg·kg）。丁硫克百威組菌包在滅菌前后，均未有丁硫克百威檢出，僅檢出其主要降解產(chǎn)物克百威。

2.2農(nóng)藥拌料處理對銀耳子實體農(nóng)藥降解的影響及安全性評價

銀耳Tr01和Tr21子實體水分含量分別為（72.09±1.80）%、（72.93±1.76）%，無顯著性差異（P>0.05）。不同拌料質(zhì)量濃度條件下農(nóng)藥在銀耳子實體中的殘留如表3所示。僅吡蟲啉處理組銀耳子實體存在農(nóng)藥殘留，且3個拌料質(zhì)量濃度銀耳吡蟲啉殘留值與培養(yǎng)料中吡蟲啉的添加質(zhì)量濃度梯度增加趨勢一致。Tr01和Tr21子實體吡蟲啉殘留量分別為0.13、0.21、0.51mg·kg和0.06、0.14、0.32mg.kg。

吡蟲啉的急性參考劑量（ARfD）和每日允許攝人量（ADI）分別為0.06mg·kgbw day和0.4mg·kgbwday。每日銀耳攝入量參考我國居民蔬菜的消費水平11.5g，不同消費者體重參考文獻。以銀耳中吡蟲啉殘留最高值0.51mg·kg評估不同消費人群急性、慢性膳食風險，結(jié)果如表4示。由于體重較輕，2-5歲兒童的急性風險商、慢性風險商值最高，分別為0.006、0.0009，但均遠小于1，表明因食用銀耳而暴露于吡蟲啉的風險水平極低。

2.3 農(nóng)藥拌料處理對銀耳生長的影響

與空白對照組比較，9組農(nóng)藥以拌料添加至培養(yǎng)基中，對銀耳菌絲前期生長無明顯影響。其對銀耳子實體大小的影響如表5所示。500mg·kg的20%異丙威乳油拌料組銀耳子實體出現(xiàn)生長停滯現(xiàn)象，1000mg·kg、2000mg·kg處理組則無法形成原基及出菇。

銀耳Tr01：培養(yǎng)料中拌料添加3.5%氯氰菊酯、1.5%啶蟲脒微乳劑，3個拌料質(zhì)量濃度下子實體均直徑顯著小于對照組（P<0.05）;拌料添加3%聯(lián)苯菊酯、3%啶蟲脒微乳劑，5%阿維菌素乳油，30%乙酰甲胺磷乳油，45%咪鮮胺乳油，1%丁硫克百威、4%毒死蜱顆粒劑，當添加質(zhì)量濃度為500mg·kg時，子實體直徑顯著小于對照組（P<0.05），添加質(zhì)量濃度為1000mg·kg、2000mg·kg時，子實體大小與對照組無顯著性差異（P>0.05）;10%吡蟲啉粉劑，5%噠螨靈、5%啶蟲脒微乳劑處理組子實體直徑與對照組均無顯著性差異（P>0.05）。

銀耳Tr21：培養(yǎng)料中拌料添加3%聯(lián)苯菊酯、3%啶蟲脒微乳劑，10%吡蟲啉粉劑，5%噠螨靈、5%啶蟲脒微乳劑，3個拌料質(zhì)量濃度下子實體直徑均顯著小于對照組（P<0.05）。拌料添加3.5%氯氰菊酯、1.5%啶蟲脒微乳劑，當添加質(zhì)量濃度為500mg·kg時，子實體直徑顯著小于對照組（P<0.05）;添加質(zhì)量濃度為1000mg·kg、2000mg·kg時，子實體大小與對照組無顯著性差異（P>0.05）。5%阿維菌素乳油、30%乙酰甲胺磷乳油、1%丁硫克百威、4%毒死蜱顆粒劑處理組子實體直徑與對照組均無顯著性差異（P>0.05）。

比較Tr01和Tr21生長可知，對照組或培養(yǎng)料中添加3%聯(lián)苯菊酯、3%啶蟲脒微乳劑，45%咪鮮胺乳油，5%噠螨靈、5%啶蟲脒微乳劑時，二者子實體直徑并無顯著性差異（P>0.05）。但培養(yǎng)料中添加3.5%氯氰菊酯、1.5%啶蟲脒微乳劑，5%阿維菌素乳油，30%乙酰甲胺磷乳油，1%丁硫克百威、4%毒死蜱顆粒劑時，Tr01子實體直徑顯著小于Tr21（P<0.05）。可見，銀耳Tr01子實體生長更易受農(nóng)藥影響，但部分處理子實體直徑僅在低質(zhì)量濃度（500mg·kg）時顯著小于對照組，中（1000mg·kg）、高（2000mg·kg）質(zhì)量濃度處理組與對照無顯著性差異（P>0.05）。

2.4農(nóng)藥拌料處理對銀耳產(chǎn)量的影響

農(nóng)藥拌料添加對銀耳產(chǎn)量的影響如圖2所示。培養(yǎng)料添加20%異丙威乳油會導致銀耳Tr01、Tr21無法生長。培養(yǎng)料添加低中高3個質(zhì)量濃度的3.5%氯氰菊酯、1.5%啶蟲脒微乳劑，5%阿維菌素乳油，30%乙酰甲胺磷乳油，均會顯著降低銀耳Tr01產(chǎn)量（P<0.05）。培養(yǎng)料中添加500mg.kg或1000mg.kg的3%聯(lián)苯菊酯、3%啶蟲脒微乳劑，5%噠螨靈、5%啶蟲脒微乳劑，1%丁硫克百威、4%毒死蜱顆粒劑會導致銀耳Tr01產(chǎn)量顯著下降（P<0.05），2000mg.kg處理組與對照組無顯著性差異（P>0.05）。培養(yǎng)料中添加500mg·kg的45%咪鮮胺乳油栽培組銀耳Tr01產(chǎn)量顯著低于對照組（P<0.05），1000mg·kg、2000mg.kg處理組與對照組無顯著性差異（P>0.05）。而吡蟲啉處理組在500mg.kg時，銀耳Tr01產(chǎn)量于對照組無顯著性差異（P>0.05），1000mg.kg、2000mg.kg處理組，銀耳產(chǎn)量顯著低于對照組（P<0.05）。

農(nóng)藥對銀耳Tr21產(chǎn)量的影響與銀耳Tr01有所差異。培養(yǎng)料中添加3%聯(lián)苯菊酯、3%啶蟲脒微乳劑，3.5%氯氰菊酯、1.5%啶蟲脒微乳劑會顯著降低銀耳產(chǎn)量（P<0.05）;5%阿維菌素乳油處理組銀耳Tr21的產(chǎn)量于對照組均無顯著性差異（P>0.05）。拌料添加500mg.kg、1000mg.kg的30%乙酰甲胺磷乳油，銀耳Tr21產(chǎn)量顯著高于對照組（P<0.05），而2000mg.kg添加質(zhì)量濃度則會顯著降低產(chǎn)量（P<0.05）;培養(yǎng)料中添加500mg.kg、1000mg.ks的45%咪鮮胺乳油或5%噠螨靈、5%啶蟲脒微乳劑，銀耳Tr21產(chǎn)量顯著低于對照組（P<0.05），2000mg·kg處理組與對照組無顯著性差異（P>0.05）。10%吡蟲啉粉劑處理組，銀耳Tr21產(chǎn)量于對照組無顯著性差異（P>0.05）。500mg.KG、1000mg.kg的1%丁硫克百威、4%毒死蜱顆粒劑拌料添加會導致銀耳Tr21產(chǎn)量顯著低于對照組（P<;0.05），而2000mg·kg處理組則顯著高于對照組（P<0.05）。

3討論與結(jié)論

農(nóng)藥拌料栽培是食用菌生產(chǎn)上防治病蟲害的主要方式之一，但高溫滅菌會引起農(nóng)藥的降解。農(nóng)藥的熱穩(wěn)定性與其分子結(jié)構(gòu)及配制用的乳化劑、溶劑、穩(wěn)定劑等密切相關(guān)。而乙酰甲胺磷、丁硫克百威分別是甲胺磷、克百威的低毒化衍生物，在滅菌及施用后均會降解。本試驗中，1%丁硫克百威、4%毒死蜱農(nóng)藥組在滅菌前未檢出丁硫克百威的原因可能是①農(nóng)藥本身質(zhì)量的問題;②丁硫克百威在原藥中的濃度僅為1%，且為顆粒劑，經(jīng)過水溶后再與麥麩、棉籽殼混勻，裝袋等程序后，可能已經(jīng)分解為其消解物克百威。

農(nóng)藥拌料栽培的優(yōu)點是對食用菌子實體生長和殘留影響較小。劉洋等在糙皮側(cè)耳栽培料中添加3g.kg的氯氰菊酯和溴氰菊酯，在于實體中均未檢出殘留。本試驗中，銀耳子實體除吡蟲啉外也無其他農(nóng)藥殘留檢出。銀耳中吡蟲啉殘留引起的急性、慢性風險熵遠小于1，表明其膳食風險極低。但本研究評估僅考慮銀耳，并未考慮蔬菜、水果、谷物等其他食物中的吡蟲啉殘留。食用菌品種、栽培方式、栽培季節(jié)的差異對農(nóng)藥在子實體中的殘留有一定影響。本研究也發(fā)現(xiàn)，銀耳Tr01與Tr21農(nóng)藥殘留特點有所差異，且前者生長更易受農(nóng)藥影響。

農(nóng)藥拌料栽培的缺點是可能會抑制食用菌的菌絲生長，如殺菌劑多菌靈、甲基托布津在拌料使用時會導致銀耳菌絲不生長、不出耳或子實體畸形、腐爛。本研究中殺蟲劑異丙威拌料栽培也會導致銀耳生長異常，而在培養(yǎng)料中適量添加1%丁硫克百威、4%毒死蜱顆粒劑或30%乙酰甲胺磷乳油可提高銀耳Tr21產(chǎn)量?？梢姡煌y耳種類的生長性狀和產(chǎn)量在不同農(nóng)藥種類或不同施用濃度條件下變化規(guī)律不一，其機理需進一步深入研究。